MMP－7和VEGF在急性白血病中表达的关系及意义

王石松

（河南省南阳医学高等专科学校第一附属医院血液科，南阳473000）

基质金属蛋白酶－7（MMP－7）即基质溶解素，在多种实体瘤中高表达并与肿瘤的发生及转移浸润有关。VEGF是血管形成的主要刺激因子，参与多种实体肿瘤的转移。然而，MMP－7和VEGF在急性白血病表达的关系及意义尚未见报道。本研究通过免疫组织化学SP法测定急性白血病中MMP－7和VEGF的表达，初步探讨二者在急性白血病中表达的关系及意义。

1 材料与方法

1.1 材料来源 52例初治急性白血病患者为我院2010年2月至2012年8月住院患者，依据1986年FAB制定MIC分型标准确诊，初治组52例 （急性淋巴细胞白血病17例，急性髓系白血病35例），其中男31例，女21例年龄15～65岁，平均46.5岁。浸润组 （肝脾淋巴结肿大）36例。无浸润组 （无肝脾淋巴结肿大）16例。对照组为健康志愿者22例，其中男13例，女9例；年龄17～66岁，平均44.2岁。

1.2 检测方法 用免疫细胞化学SP法检测骨髓单个核细胞 （BMMNC）中MMP－7和VEGF。MMP－7和VEGF单克隆抗体、S－P免疫标记试剂盒为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。髂后或髂前上嵴穿刺取骨髓，用淋巴细胞分离液 （比重1.077）分离BMMNC并涂片，干燥后用新鲜配制的丙酮溶液于室温下固定30分钟，用磷酸盐缓冲液 （0.01mol／L，pH7.4）漂洗3次；0.1%Triton100通透10分钟，再用PBS漂洗3次，然后根据试剂说明书进行操作。每一批实验均设阳性及阴性对照，阳性对照采用胃癌切片 （由试剂公司提供），阴性对照以PBS代替一抗。

1.3 结果判定 细胞质或细胞核出现棕黄色颗粒染色为阳性。根据阳性颗所占的面积及显色程度，参照1997年全国免疫组化技术诊断标准化专题研讨会意见，对阳性细胞进行积分：细胞质和 （或）核内见浅黄色颗粒，明显高于背景底色，阳性颗粒所占细胞面积的比例＜50%为1分；细胞质和 （或）核内见较深黄色颗粒，阳性颗粒所占细胞面积的比例为51%～70%为2分；细胞质和（或）核内见大量深黄色颗粒，浆和／或核有时可被颗粒掩盖而不显，阳性颗粒所占细胞面积的比例＞70%为3分。每片统计500个细胞中的阳性细胞数，结合每个细胞的积分算出总阳性积分，平均阳性积分＝总阳性积分／500。并换算为每100个细胞的阳性积分。

1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，多组均数间采用t检验，两变量间相关性采用pearson相关分析，检验水准α＝0.05。

2 结果

2.1 MMP－7和VEGF阳性产物呈棕黄色颗粒状定位于胞浆内 初治组MMP－7和VEGF平均积分显著高于对照组 （P＜0.05）。肝脾淋巴结肿大组MMP－7和VEGF平均积分显著高于无肝脾淋巴结肿大组 （P＜0.05）。见表1。

表1 MMP－7和VEGF在各组中平均积分 （分）表达的比较

2.2 MMP－7和VEGF在ALL中表达的关系 MMP－7和VEGF的过表达呈正相关关系，r＝0.5127，P＜0.05。

3 讨论

MMP－7是基质金属蛋白酶 （matrixmetalloproteinasesMMPs）家族中重要成员之一，亦称基质溶素，其主要作用底物为层黏连蛋白 （LN）、纤维蛋白、蛋白多糖和核心蛋白，而LN亦为ECM的主要成分。既往研究已发现，LN作为构成细胞外基质主体结构的糖蛋白，首先介导了肿瘤细胞对基底膜的附着，然后在瘤细胞分泌的蛋白溶酶作用下发生分解，使肿瘤细胞得以突破基质膜发生侵袭和转移［1］。在实体瘤中已经证实与恶性肿瘤侵袭转移相关［2－3］。而肿瘤在浸润转移过程中在转移部位必须形成新的血管，而血管结构形成均需要ECM的降解和重建。近年有报道MMP－7与肿瘤脉管生成可能有关［4］。Conor C等［5］发现 K562细胞高表达 MMP－7，用 MMP－7单抗封闭MMP－7导致K562细胞侵润性显著降低，提示高表达的MMP－7参与K562细胞的侵润。VEGF是血管形成的主要刺激因子，在急性髓细胞白血病 （AML）、ALL、慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病患者的骨髓和外周血白血病细胞中均发现有VEGF及其受体的表达［6］，Aguyo等［7］测定了90例未治的高白细胞性急性髓样白血病 （AML）患者细胞内VEGF水平，结果显示，VEGF水平持续增高的患者完全缓解 （CR）率低，生存时间和无病生存期缩短。

在多种肿瘤中，VEGF的表达与MMP－7的表达密切相关，如老年骨肉瘤、乳腺癌、大肠癌等［8，9］。吕成方等［10］研究发现胃癌组织中VEGF以及MMP－7高表达与胃癌的侵袭和转移密切相关。Mitsiades等［11］认为MMP－7能降解细胞膜上的Fas配体，抑制Fas介导的细胞凋亡，促进肿瘤细胞的生长，可能间接促进了肿瘤细胞分泌VEGF。而MMP－7和VEGF在急性白血病患者骨髓单个核细胞中表达的关系尚未见报道。本研究检测了MMP－7和VEGF在急性白血病患者骨髓单个核细胞的表达，结果表明急性白血病患者骨髓单个核细胞MMP－7和VEGF的表达显著高于对照组，提示高表达的MMP－7和VEGF可能参与急性白血病的发生。白血病预后差的一个很重要的因素就是其广泛的浸润性，本研究发现浸润组 （肝脾淋巴结肿大）阳性积分显著高于无浸润组（无肝脾淋巴结肿大）（P＜0.05），进一步分析发现MMP－7和VEGF的表达呈正相关关系，提示MMP－7和VEGF在急性白血病血管基质的破坏与重建中起协同作用，促进急性白血病髓外浸润。本文结果提示检测急性白血病患者骨髓单个核细胞中MMP－7和VEGF的表达可作为预后的参考指标，对化疗方案的选择有一定的指导意义。

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