HPLC-ELSD测定舒筋通络颗粒中黄芪甲苷含量

2013-09-26 10:03陈光辉赵志强张久胜陈进钱彭新华
中国现代中药 2013年12期
关键词:甲苷通络黄芪

陈光辉,赵志强,张久胜,陈进钱,彭新华

(神威药业有限公司,河北 石家庄 051430)

HPLC-ELSD测定舒筋通络颗粒中黄芪甲苷含量

陈光辉,赵志强*,张久胜,陈进钱,彭新华

(神威药业有限公司,河北 石家庄 051430)

目的:建立舒筋通络颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD),色谱柱为DIONEX C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(38∶62),流速为1.0 mL·min-1,柱温为30 ℃,载气流速为2.5 L·min-1,漂移管温度为105 ℃。结果:黄芪甲苷的线性范围为0.968 8~9.688 μg,平均回收率为98.9%,RSD=1.2%。结论:该方法重现性好、灵敏、准确,可作为舒络通络颗粒的质量控制方法。

HPLC-ELSD;舒筋通络颗粒;黄芪甲苷;含量测定

舒筋通络颗粒是由牛膝、骨碎补、川芎、天麻、黄芪、葛根、威灵仙等9味中药组成,具有补肝益肾、活血舒筋功效[1],是神威药业集团研制的国家二类中药保护品种。现代药理学研究表明,舒筋通络颗粒组方中的黄芪,主要含皂苷类、黄酮类、多糖类及氨基酸类成分等,黄芪总皂苷(AST)具有免疫调节、护肝作用[2],其中黄芪甲苷(AST-Ⅳ)为活性指标成分。现行的舒筋通络颗粒标准[3]要求测定骨碎补的含量,未对其他成分进行定量测定。为了更好地控制本品质量,保证临床疗效,笔者研究建立并验证了HPLC-ELSD检测黄芪甲苷含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

DIONEX Ultimate 3000高效液相色谱系统(Ultimate 3000四元泵,Ultimate 3000自动进样器,变色龙色谱工作站),Alltech 2000 ES蒸发光散射检测器。

1.2 试药

黄芪甲苷对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110781-200613);舒筋通络颗粒(神威药业集团有限公司,规格:12g/袋,批号:12010501,12042501,12061501,12092101,12092201,12092301,12092401,12092501,12092801,12100701,12100601)。

乙腈(Fisher Scientific,色谱纯);正丁醇、甲醇、氢氧化钠(天津化学试剂一厂,分析纯);D101型大孔吸附树脂(天津市光复精细化工研究所);水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:DIONEX C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(38∶62);流速:1.0 mL·min-1;柱温:30 ℃;ELSD的漂移管温度:105 ℃,载气流速:2.5 L·min-1。

在上述色谱条件下,黄芪甲苷的典型保留时间为1.07 min,理论板数以黄芪甲苷计为8 765。

2.2 溶液制备和进样

2.2.1 对照品溶液 精密称取黄芪甲苷对照品适量,用甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取本品内容物研细,取约10 g,精密称定,加氢氧化钠1 g,精密加入甲醇100 mL,称定重量,加热回流提取1 h,放凉,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液50 mL,蒸干,加热水10 mL分次使溶解,置分液漏斗中,放冷,用水饱和过的正丁醇萃取4次,每次40 mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加水5 mL加热使溶解,放凉,通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm,长12 cm),以水80 mL洗脱,弃去水液,再用40%的乙醇30 mL洗脱,弃去洗脱液,继用70%的乙醇80 mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶内,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 取处方中缺黄芪的其他药味,按制法制成阴性样品,再按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.4 进样 分别精密量取对照品溶液4,6,8 μL和供试品溶液8 μL进样。

2.3 方法专属性考察

分别精密吸取阴性对照溶液、对照品溶液以及舒筋通络颗粒供试品溶液各8 μL,注入液相色谱仪,记录色谱图,见图1。结果显示在该色谱条件下,其他成分不干扰黄芪甲苷的测定,可与其他成分达到基线分离。

A.阴性对照品 B.黄芪甲苷对照品 C.供试品图1 舒筋通络颗粒及对照品HPLC图

2.4 线性关系考察

精密称取黄芪甲苷对照品48.44 mg,置50 mL量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。依次精密吸取对照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10 μL,注入高效液相色谱仪测定峰面积。以进样量的常用对数为横坐标(X),峰面积的常用对数为纵坐标(Y),绘制标准曲线,得黄芪甲苷线性回归方程分别为Y=1.663 4X+0.882(r=0.999 5,n=6)。结果表明,黄芪甲苷的进样量在0.968 8~9.688 μg的对数值与各自峰面积的对数值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取0.968 8 mg·mL-1的黄芪甲苷对照品溶液6 μL,重复进样6次,测定其峰面积分别为141.80,143.20,143.07,141.99,143.39,142.25,结果得RSD=0.48%(n=6),表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批样品(批号:12010501),平行制备6份供试品溶液并测定含量。结果6份样品中黄芪甲苷含量的RSD=1.7%(n=6),表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

新制备一供试品溶液(批号:12010501),室温放置,经第0,2,4,6,8,10,16,24 h测定,结果峰面积的RSD=1.1%(n=8),表明供试品溶液在室温放置24 h内稳定。

2.8 回收率试验

称取舒筋通络颗粒细粉约5 g(批号:12010501,含量:0.671 mg·g-1),精密称定,平行做9份,分成3组,每组分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(0.968 8 mg·mL-1)3.0,3.5,4.0 mL,然后按上述方法制备供试品溶液,并测定其含量,计算回收率,结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收率试验

2.9 样品含量的测定

取舒筋通络颗粒10批,依法测定,计算样品中黄芪甲苷含量,测定结果见表2。

表2 舒筋通络颗粒中黄芪甲苷含量测定结果

3 讨论

由于舒筋通络颗粒为复方制剂,成分复杂,曾按《中国药典》2010年版一部黄芪含量测定项下供试品溶液处理方法[4],分别用甲醇超声提取与加热回流提取后,再用水饱和的正丁醇振摇提取,试对比超声处理及加热回流提取方法提取黄芪甲苷,结果加热回流提取含量较高,故选择加热回流提取。分别用甲醇、1%和2%氢氧化钠甲醇溶液加热回流提取[5]后,再用水饱和的正丁醇振摇提取,结果氢氧化钠甲醇溶液加热回流提取含量相同,高于甲醇回流提取含量,故选择1%氢氧化钠甲醇溶液加热回流提取。

根据10批样品含量测定结果,结合《中国药典》2010年版一部黄芪中黄芪甲苷的含量限度及其制剂有效成分的转移率,考虑大生产的实际情况,笔者认为,本品每袋(12 g/袋,相当于黄芪生药0.423×12 g)含黄芪以黄芪甲苷计不得少于2.5 mg为宜。

采用HPLC测定舒筋通络颗粒中黄芪甲苷的含量,处理方法简单,所测结果重现性好、精密度好,适用于多种中药配伍使用的黄芪甲苷的定量分析。

[1] 雒晓东,梁德,刘金文,等.舒筋通络颗粒治疗神经根型和椎动脉型颈椎病2期临床研究[J].中国中医骨伤科杂志,2006,14(4):48-50.

[2] 黄可儿,赵敏,王建华.黄芪总苷的药理研究进展[J].中药新药与临床药理,2005,16(6):461-463.

[3] 国家食品药品监督管理局.舒筋通络颗粒标准[S].YBZ23662005-2009Z.

[4] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2010:283-284.

[5] 夏广萍,刘鹏.不同处理方法和不同产地黄芪药材中黄芪甲苷的含量测定[J].中药材,2008,31(3):385-387.

AstragalosideⅣinShujintongluoGranulesDeterminationbyHPLC-ELSD

CHEN Guang-hui,ZHAO Zhi-qiang*,ZHANG Jiu-sheng,CHEN Jin-qian,PENG xin-hua

(ShinewayPharmaceuticalCo.,Ltd.,Shijiazhuang051430,China)

Objective:To establish a method for determining astragaloside Ⅳ in Shujintongluo Granules.Methods:The sample was separated on DIONEX C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm)with acetonitrile-water(38∶62)as mobile phase,flow rate 1.0 mL·min-1,column temperature 30 ℃,the gas flow rate 2.5 L·min-1and drift tube temperature 105 ℃.Results:The linear range of astragaloside Ⅳwas 0.968 8~9.688 μg(r=0.999 5).The average recovery was 98.9%(RSD=1.2%).Conclusion:The method is sensitive,accurate,and has good repeatability.It can be used for Shujintongluo granules quality control.

HPLC-ELSD;Shujintongluo granules;Astragaloside Ⅳ;Determination

2013-04-27)

*

赵志强,工程师,研究方向:药品质量控制;E-mail:13613304779@163.com

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