HPLC-ELSD测定舒筋通络颗粒中黄芪甲苷含量

陈光辉，赵志强，张久胜，陈进钱，彭新华

(神威药业有限公司，河北 石家庄 051430)

HPLC-ELSD测定舒筋通络颗粒中黄芪甲苷含量

陈光辉，赵志强*，张久胜，陈进钱，彭新华

(神威药业有限公司，河北 石家庄 051430)

目的：建立舒筋通络颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)，色谱柱为DIONEX C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-水(38∶62)，流速为1.0 mL·min-1，柱温为30 ℃，载气流速为2.5 L·min-1，漂移管温度为105 ℃。结果：黄芪甲苷的线性范围为0.968 8～9.688 μg，平均回收率为98.9%，RSD=1.2%。结论：该方法重现性好、灵敏、准确，可作为舒络通络颗粒的质量控制方法。

HPLC-ELSD；舒筋通络颗粒；黄芪甲苷；含量测定

舒筋通络颗粒是由牛膝、骨碎补、川芎、天麻、黄芪、葛根、威灵仙等9味中药组成，具有补肝益肾、活血舒筋功效[1]，是神威药业集团研制的国家二类中药保护品种。现代药理学研究表明，舒筋通络颗粒组方中的黄芪，主要含皂苷类、黄酮类、多糖类及氨基酸类成分等，黄芪总皂苷(AST)具有免疫调节、护肝作用[2]，其中黄芪甲苷(AST-Ⅳ)为活性指标成分。现行的舒筋通络颗粒标准[3]要求测定骨碎补的含量，未对其他成分进行定量测定。为了更好地控制本品质量，保证临床疗效，笔者研究建立并验证了HPLC-ELSD检测黄芪甲苷含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

DIONEX Ultimate 3000高效液相色谱系统(Ultimate 3000四元泵，Ultimate 3000自动进样器，变色龙色谱工作站)，Alltech 2000 ES蒸发光散射检测器。

1.2 试药

黄芪甲苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110781-200613)；舒筋通络颗粒(神威药业集团有限公司，规格：12g/袋，批号：12010501，12042501，12061501，12092101，12092201，12092301，12092401，12092501，12092801，12100701，12100601)。

乙腈(Fisher Scientific，色谱纯)；正丁醇、甲醇、氢氧化钠(天津化学试剂一厂，分析纯)；D101型大孔吸附树脂(天津市光复精细化工研究所)；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DIONEX C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(38∶62)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；ELSD的漂移管温度：105 ℃，载气流速：2.5 L·min-1。

在上述色谱条件下，黄芪甲苷的典型保留时间为1.07 min，理论板数以黄芪甲苷计为8 765。

2.2 溶液制备和进样

2.2.1 对照品溶液 精密称取黄芪甲苷对照品适量，用甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取本品内容物研细，取约10 g，精密称定，加氢氧化钠1 g，精密加入甲醇100 mL，称定重量，加热回流提取1 h，放凉，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液50 mL，蒸干，加热水10 mL分次使溶解，置分液漏斗中，放冷，用水饱和过的正丁醇萃取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5 mL加热使溶解，放凉，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，长12 cm)，以水80 mL洗脱，弃去水液，再用40%的乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%的乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 取处方中缺黄芪的其他药味，按制法制成阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.4 进样 分别精密量取对照品溶液4，6，8 μL和供试品溶液8 μL进样。

2.3 方法专属性考察

分别精密吸取阴性对照溶液、对照品溶液以及舒筋通络颗粒供试品溶液各8 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。结果显示在该色谱条件下，其他成分不干扰黄芪甲苷的测定，可与其他成分达到基线分离。

A.阴性对照品 B.黄芪甲苷对照品 C.供试品图1 舒筋通络颗粒及对照品HPLC图

2.4 线性关系考察

精密称取黄芪甲苷对照品48.44 mg，置50 mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。依次精密吸取对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10 μL，注入高效液相色谱仪测定峰面积。以进样量的常用对数为横坐标(X)，峰面积的常用对数为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得黄芪甲苷线性回归方程分别为Y=1.663 4X+0.882(r=0.999 5，n=6)。结果表明，黄芪甲苷的进样量在0.968 8～9.688 μg的对数值与各自峰面积的对数值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取0.968 8 mg·mL-1的黄芪甲苷对照品溶液6 μL，重复进样6次，测定其峰面积分别为141.80，143.20，143.07，141.99，143.39，142.25，结果得RSD=0.48%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批样品(批号：12010501)，平行制备6份供试品溶液并测定含量。结果6份样品中黄芪甲苷含量的RSD=1.7%(n=6)，表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

新制备一供试品溶液(批号:12010501)，室温放置，经第0，2，4，6，8，10，16，24 h测定，结果峰面积的RSD=1.1%(n=8)，表明供试品溶液在室温放置24 h内稳定。

2.8 回收率试验

称取舒筋通络颗粒细粉约5 g(批号：12010501，含量：0.671 mg·g-1)，精密称定，平行做9份，分成3组，每组分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(0.968 8 mg·mL-1)3.0，3.5，4.0 mL，然后按上述方法制备供试品溶液，并测定其含量，计算回收率，结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收率试验

2.9 样品含量的测定

取舒筋通络颗粒10批，依法测定，计算样品中黄芪甲苷含量，测定结果见表2。

表2 舒筋通络颗粒中黄芪甲苷含量测定结果

3 讨论

由于舒筋通络颗粒为复方制剂，成分复杂，曾按《中国药典》2010年版一部黄芪含量测定项下供试品溶液处理方法[4]，分别用甲醇超声提取与加热回流提取后，再用水饱和的正丁醇振摇提取，试对比超声处理及加热回流提取方法提取黄芪甲苷，结果加热回流提取含量较高，故选择加热回流提取。分别用甲醇、1%和2%氢氧化钠甲醇溶液加热回流提取[5]后，再用水饱和的正丁醇振摇提取，结果氢氧化钠甲醇溶液加热回流提取含量相同，高于甲醇回流提取含量，故选择1%氢氧化钠甲醇溶液加热回流提取。

根据10批样品含量测定结果，结合《中国药典》2010年版一部黄芪中黄芪甲苷的含量限度及其制剂有效成分的转移率，考虑大生产的实际情况，笔者认为，本品每袋(12 g/袋，相当于黄芪生药0.423×12 g)含黄芪以黄芪甲苷计不得少于2.5 mg为宜。

采用HPLC测定舒筋通络颗粒中黄芪甲苷的含量，处理方法简单，所测结果重现性好、精密度好，适用于多种中药配伍使用的黄芪甲苷的定量分析。

[1] 雒晓东，梁德，刘金文，等.舒筋通络颗粒治疗神经根型和椎动脉型颈椎病2期临床研究[J].中国中医骨伤科杂志，2006，14(4)：48-50.

[2] 黄可儿，赵敏，王建华.黄芪总苷的药理研究进展[J].中药新药与临床药理，2005，16(6)：461-463.

[3] 国家食品药品监督管理局.舒筋通络颗粒标准[S].YBZ23662005-2009Z.

[4] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：283-284.

[5] 夏广萍，刘鹏.不同处理方法和不同产地黄芪药材中黄芪甲苷的含量测定[J].中药材，2008，31(3)：385-387.

AstragalosideⅣinShujintongluoGranulesDeterminationbyHPLC-ELSD

CHEN Guang-hui，ZHAO Zhi-qiang*，ZHANG Jiu-sheng，CHEN Jin-qian，PENG xin-hua

(ShinewayPharmaceuticalCo.，Ltd.，Shijiazhuang051430，China)

Objective：To establish a method for determining astragaloside Ⅳ in Shujintongluo Granules.Methods：The sample was separated on DIONEX C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)with acetonitrile-water(38∶62)as mobile phase，flow rate 1.0 mL·min-1，column temperature 30 ℃，the gas flow rate 2.5 L·min-1and drift tube temperature 105 ℃.Results：The linear range of astragaloside Ⅳwas 0.968 8～9.688 μg(r=0.999 5).The average recovery was 98.9%(RSD=1.2%).Conclusion：The method is sensitive，accurate，and has good repeatability.It can be used for Shujintongluo granules quality control.

HPLC-ELSD；Shujintongluo granules；Astragaloside Ⅳ；Determination

2013-04-27)

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赵志强，工程师，研究方向：药品质量控制；E-mail：13613304779@163.com