铁皮石斛茎乙醇提取物正丁醇溶性部分化学成分研究

魏泽元，陆静金，金传山，夏宏*

(1.安徽医科大学 附属省立医院，安徽 合肥 230001； 2.安徽中医药大学，安徽 合肥 230031)

铁皮石斛茎乙醇提取物正丁醇溶性部分化学成分研究

魏泽元1，陆静金2，金传山2，夏宏1*

(1.安徽医科大学 附属省立医院，安徽 合肥 230001； 2.安徽中医药大学，安徽 合肥 230031)

目的：研究铁皮石斛茎乙醇提取物的正丁醇溶性部分的化学成分。方法：利用硅胶、凝胶及反相硅胶等色谱方法对正丁醇溶性部分进行分离，根据质谱、核磁共振等波谱技术对分离的单体化合物进行结构鉴定。结果：从铁皮石斛的正丁醇部位分离得到7个糖苷类化合物，分别鉴定为：芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(1)，枸橼苦素C(2)，3，5-二甲氧基-4-羟基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)，7-甲氧基香豆素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)，淫羊藿醇A2-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)，灯盏花素2(6)，(+)-丁香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)。结论：化合物1，2，4均为首次从铁皮石斛中分离得到。

铁皮石斛；正丁醇部分；化学成分；结构鉴定

铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimura et Migo为兰科石斛属名贵药用植物，具有很高的药用价值，为《中国药典》2010年版收载品种，具有益胃生津，滋阴清热功能。用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软。现代药理活性研究表明其具有增强人体免疫力、抗氧化、抑制肿瘤细胞增殖等活性[1]。野生铁皮石斛生于海拔100～3 000 m的山地半阴湿岩石、树皮上，喜温暖湿润气候和半阴湿的环境，不耐寒[2]。由于铁皮石斛生长条件的特殊性和分布的局限性，又经长期采挖，自然资源濒临枯竭，市场供应紧缺，价格昂贵。目前，国内评定铁皮石斛质量的指标主要以性状和粗多糖为标准[3]，然而这种质量控制方法不完善，迄今仍没有确定一个化学成分作为铁皮石斛的质量控制标准。笔者通过初步的提取分离，发现铁皮石斛的正丁醇部分浸膏含量远高于乙酸乙酯溶性部分。为探明铁皮石斛的药效物质基础，并为其质量控制提供依据，开展了铁皮石斛正丁醇部分的化学成分研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Brucker AM-400型超导核磁共振仪，四甲基硅烷为内标；Xevo TQ-S超高压液相色谱三重四极杆串联质谱联用仪。

1.2 材料

柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂，100～200目，200～300目)；薄层色谱硅胶(烟台汇友硅胶开发有限公司，GF254型)；反相材料RP-18(Merck公司)；Sephadex LH-20(北京化工厂)。显色剂为10%浓H2SO4-乙醇溶液。

1.3 药材来源

新鲜的铁皮石斛茎，购自浙江省中药材市场，自然风干，由安徽中医药大学药学院副院长金传山副教授鉴定为铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimura et Migo的干燥茎。

2 提取与分离

取铁皮石斛干燥茎3 kg，粉碎后用80%乙醇回流提取，回收乙醇得浸膏289 g。加适量水形成混悬物，依次按极性从小到大的顺序，采用乙酸乙酯、水饱和正丁醇分步萃取，分别合并萃取液，减压浓缩得到各个萃取部分，分为乙酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分和水溶性部分。

将正丁醇萃取部分193 g与0.4 kg硅胶(100～200目)拌样，1.9 kg硅胶干法装柱，三氯甲烷-甲醇(15∶1～1∶1)梯度洗脱，得到7个组分，组分1同乙酸乙酯萃取部分(留样)进行TLC对照，多个点重叠，故未进一步分离。组分2经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇(20∶1～1∶1)梯度洗脱，经Sephadex LH-20柱再纯化，得到化合物1(23 mg)和5(8 mg)。组分3经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇(15∶1～1∶1)梯度洗脱，再经RP-18(40%甲醇水梯度洗脱)和Sephadex LH-20柱色谱再纯化，得到化合物3(10 mg)。组分4经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脱，再经Sephadex LH-20柱色谱纯化，得到化合物4(7 mg)。组分5经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇(20∶1～1∶1)梯度洗脱，再依次经RP-18柱色谱(30%～100%甲醇水梯度洗脱)、硅胶制备薄层色谱和Sephadex LH-20柱色谱纯化，得到化合物2(5 mg)和6(8 mg)。组分6经硅胶柱色谱，三氯甲烷-甲醇(15∶1)等度洗脱，再经Sephadex LH-20柱色谱纯化，得到化合物7(16 mg)。最后1个组分经TLC显色，呈灰色和浅黄色条带，成点性差，未进行进一步分离。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末；C21H20O10，ESI-MS显示准分子离子峰m/z：431[M-H]-；1H-NMR (500 MHz，CD3OD)δ：7.79 (2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′)，7.52 (2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，7.02 (1H，s，H-6)，6.98 (1H，s，H-3)，6.87 (1H，s，H-8)，5.86 (1H，d，J=6.9 GlcH-1″)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ：182.3 (s，C-4)，164.7 (s，C-9)，164.0 (s，C-7)，163.0 (s，C-5)，162.5 (s，C-4′)，158.0 (s，C-10)，129.0 (d，C-2′，6′)，122.4 (s，C-1′)，116.0 (d，C-3′，5′)，106.6 (s，C-2)，104.1 (d，C-6)，100.7 (d，C-8)，95.4 (d，C-3)，102.0 (d，C-1″)，79.0 (d，C-3″)，78.7 (d，C-5″)，75.0 (d，C-2″)，71.3 (d，C-4″)，62.5 (t，C-6″)。以上数据与文献报道相符[4]，故鉴定化合物1为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，首次从铁皮石斛中分离得到。化学结构见图1。

化合物2：白色粉末；C16H22O7，ESI-MS显示准分子离子峰m/z：327[M-H]-；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.10 (1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，6.85 (1H，s，H-2)，6，77 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，5.98 (1H，m，H-8)，5.10 (2H，m，H-9)，4.87 (1H，d，J=7.0 Hz，H-1′)，3.90 (3H，s，H-3-OMe)，3.50 (2H，brd，J=7.6 Hz，H-7)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ：150.8 (s，C-3)，146.3 (s，C-4)，138.9 (d，C-8)，136.7 (s，C-4)，122.0 (d，C-5)，118.3 (d，C-6)，116.0 (t，C-9)，114.4 (d，C-2)，102.3 (d，C-1′)，78.2 (d，C-3′)，77.8 (d，C-5′)，75.1 (d，C-2′)，71.3 (d，C-4′)，62.5 (t，C-6′)，56.9 (q，C-OMe)，41.0 (t，C-7)。以上数据与文献报道相符[5]，故鉴定化合物2为枸橼苦素C，首次从铁皮石斛中分离得到。化学结构见图1。

化合物3：白色粉末；C14H20O9，ESI-MS 显示准分子离子峰m/z：355[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.12(2H，s，H-3，5)，4.83(1H，d，J=6.9 Hz，H-1′)，3.86(6H，s，H-2，6-OMe)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ：150.0(s，C-4)，148.2(s，C-2，6)，130.0(s，C-1)，94，7(s，C-3，5)，102.0 (d，C-1′)，78.2 (d，C-3′)，77.8 (d，C-5′)，75.7 (d，C-2′)，71.4 (d，C-4′)，62.7 (t，C-6′)，56.8(q，C-2，6-OMe)，40.7 (t，C-7)。以上数据与文献报道相符[6]，故鉴定化合物3为3，5-二甲氧基-4-羟基苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。化学结构见图1。

化合物4：白色粉末；C16H18O9，ESI-MS 显示准分子离子峰m/z：377[M+Na]+;1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：7.90(1H，d，J=9.6 Hz，H-4)，7.20 (1H，s，H-8)，7.17 (1H，s，H-5)， 6.30 (1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，5.07 (2H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.89 (3H，s，H-7-OMe)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD) δ：162.9 (s，C-2)，151.8 (s，C-7)，150.6 (s，C-9)，148.3 (s，C-6)，145.6 (d，C-4)，114.1 (d，C-3)，112.8 (s，C-10)，110.0 (d，C-5)，102.0 (d，C-8)，105.1 (d，C-1′)，78.7 (d，C-3′)，77.8 (d，C-5′)，75.0 (d，C-2′)，71.7 (d，C-4′)，62.8 (t，C-6′)，56.7 (q，C-OMe)。以上数据与文献报道相符[7]，故鉴定化合物4为7-甲氧基香豆素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，首次从铁皮石斛中分离得到。化学结构见图1。

化合物5：白色粉末；C28H38O14，ESI-MS 显示准分子离子峰m/z：621[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.79 (2H，s，H-2，6)，6.70 (2H，s，H-2′，6′)，4.96 (1H，d，J=7.6 Hz，H-7)，4.93 (1H，d，J=8.0 Hz，H-7′)，4.82 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，3.83 (6H，s，H-3′，5′-OMe)，3.82 (6H，s，H-3，5-OMe)，2.24(2H，m，H-8，8′)。以上数据与文献[8]报道相符，故鉴定化合物5为淫羊藿醇A2-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。化学结构见图1。

化合物6：白色粉末；C17H24O8，ESI-MS显示准分子离子峰m/z：379[M+Na]+；1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δ：6.52 (2H，s，H-2，6)，5.94 (1H，m，H-8)，5.11 (2H，m，H-9)，4.81 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.82 (6H，s，H-3，5-OMe)，3.48 (2H，d，J=7.5 Hz，H-7)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD) δ：154.1 (s，C-3，5)，138.6 (s，C-1)，138.3 (d，C-8)，116.0 (t，C-9)，107.4 (d，C-2，6)，105.5 (s，C-1′)，78.2 (d，C-3′)，77.8 (d，C-5′)，75.7 (d，C-2′)，71.3 (d，C-4′)，62.8 (t，C-6′)，56.9 (q，C-OMe)，41.5 (t，C-7)。以上数据与文献报道相符[9]，故鉴定化合物6为灯盏花素2。化学结构见图1。

化合物7：白色粉末；C28H36O13，ESI-MS 显示准分子离子峰m/z：603[M+Na]+；1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ：6.67(2H，s，H-2，6)，6.61 (2H，s，H-2′，6′)，4.84 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1″)，4.73 (1H，d，J=4.2 Hz，H-7)，4.66 (1H，d，J=4.1 Hz，H-7′)，4.23 (2H，m，Ha-9，9′)，3.87 (2H，m，Hb-9，9′)，3.79，3.72 (各6H，s，H-3，3′，5，5′-OMe)，3.07 (2H，m，H-8，8′)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD) δ：154.3 (s，C-3，5)，149.3 (s，C-3′，5′)，139.6 (s，C-4)，136.1 (s，C-4′)，132.9 (s，C-1′)，104.7 (d，C-2，6)，104.5 (d，C-2′，6′)，87.5 (d，C-7)，87.3 (d，C-7′)，105.3 (s，C-1″)，78.3 (d，C-3″)，77.8 (d，C-5″)，75.6 (d，C-2″)，71.2 (d，C-4″)，62.5 (t，C-6″)，56.9，56.7 (q，C-3，3′，5，5′-OMe)，55.5，55.4 (d，C-8，8′)。以上数据与文献报道相符[10]，故鉴定化合物7为(+)-丁香脂素-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。化学结构见图1。

图1 化合物1～7化学结构

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ChemicalConstituentsfromn-butanolExtractsofDendrobiumofficinale

WEI Ze-yuan1，LU Jing-jin2，JIN Chuanshan2，XIA Hong1*

(AnhuiMedicalUniversityAffiliatedProvincialHospital，Hefei230001，China； 2.AnhuiUniversityofChinesemedicine，Hefei230031，China)

Objective：To study the chemical constituents from n-butanol extracts ofDendrobumofficinale.Methods：A variety of chromatographic methods such as silica gel，Sephadex LH-20 and Pre PC18column were used.Compounds structures were determined by mass spectrometry and nuclear magnetic resonance(NMR)techniques.Results：Seven compounds of glycosides were isolated fromD.officinaleand identified as follows：apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside(1)，citrusin C(2)，3，5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl-1-O-β-D-glucopyranoside(3)，7- methoxy-coumarin-6-O-β-D-glucopyranoside(4)，icariol A2-4-O-β-D-glucopyranoside(5)，erigeside 2(6)，(+)syringaresinol- 4-O-β-D-monoglucoside(7).Conclusion：Compound1，2and4were isolated fromD.officinalefor the first time.

Dendrobiumofficinale；n-butanol extracts；Chemical constituents；Structural elucidation

2013-07-11)

*

夏宏，副主任药师，研究方向：医院药学；E-mail：bhxhong@sina.com