老年肺结核患者血清血管活性肠肽的变化及临床意义

杨晓敏 董德琼 杨渝浩 (遵义医学院附属医院呼吸一科，贵州 遵义 563000)

肺结核的发生与机体细胞免疫功能失衡有关，Th1/Th2应答平衡对结核病的进展、恶化、控制和预防起着决定作用〔1〕。老年肺结核由于患病率高、菌阳率高、死亡率高而治愈率低，已成为我国结核病控制难题。已有研究表明血管活性肠肽(VIP)参与机体免疫功能调节，并在Th细胞分化调节方面起着相当重要的作用。本研究旨在探讨VIP在老年肺结核患者血清中的表达及其与Th1型细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)和Th2型细胞因子白细胞介素(IL)-4的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象 老年活动性肺结核患者40例，男性24例，女16例，年龄(66.5±11.7)岁，老年非活动性肺结核患者30例，男性16例，女14例，年龄(64.3±8.5)岁，中青年活动性肺结核患者30例，男性18例，女12例，年龄(40.5±10.7)岁，为2007年5月至2008年5月我院住院和门诊患者。老年活动性肺结核患者经胸部CT诊断病灶在2个肺野内患者23例，男性13例，女10例，年龄(65.3±9.8)岁，病灶超过2个肺野或有空洞形成患者17例，男性11例，女6例，年龄(67.4±12.3)岁。活动性肺结核患者均为初治继发型肺结核，诊断符合2001年中华医学会结核病学分会制定的诊断标准〔2〕，并除外心、肝、肾等脏器并发症及其感染，无糖尿病、肿瘤等免疫相关性或免疫性疾病，4个月内未用过糖皮质激素及免疫抑制剂，均抗结核治疗前采血。非活动性肺结核患者诊断符合以下标准:①无明显结核中毒症状;②CT显示病灶已消失或处于稳定状态;③痰抗酸染色涂片阴性3次以上。健康组，25例，为健康体检者，年龄(68.8±7.8)岁。本研究经遵义医学院附属医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法 抽空腹静脉血8 ml，低温以2 500 r/min离心15 min，分离血清放置-70℃保存，测定前取出复苏至室温。采用放射免疫分析(RIA)法测定VIP，试剂盒由第二军医大学神经生物学教研室提供，按照说明书的要求进行操作;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定IFN-γ和IL-4，试剂盒由美国ADL公司提供，按照说明书的要求进行操作。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，实验数据以±s表示，两组间比较采用t检验，多组间比较用方差分析，两组间相关性采用直线相关分析。

2 结果

2.1 老年肺结核患者血清VIP等细胞因子的测定结果 老年活动性肺结核组血清VIP、IL-4水平均明显高于老年非活动性肺结核组及健康组，IFN-γ水平低于健康组(P＜0.01，P＜0.05)，见表1。老年活动性肺结核组IFN-γ水平与老年非活动性肺结核组差异无统计学意义。

2.2 病情严重程度与血清中VIP等细胞因子的关系 病灶超过2个肺野或有空洞形成的患者血清VIP、IL-4水平高于病灶范围小的患者(均P＜0.05)，见表2。两组IFN-γ水平差异无统计学意义。

2.3 不同年龄患者血清中VIP等细胞因子的比较 老年活动性肺结核组血清VIP、IL-4及IFN-γ水平均稍高于中青年活动性肺结核组，差异无统计学意义(均P＞0.05)，见表3。

表1 老年肺结核患者血清中VIP、IFN-γ及IL-4含量(ng/L，±s)

表1 老年肺结核患者血清中VIP、IFN-γ及IL-4含量(ng/L，±s)

与健康组比较:1)P＜0.01，2)P＜0.05;与老年非活动性肺结核组比较:3)P＜0.01

组别 n VIP IL-4 IFN-γ老年活动性肺结核组 40 36.8±15.31)3)28.8±12.21)3)43.5±18.22)20 16.5±7.0 14.3±6.8 60.7±23.1老年非活动性肺结核组 30 20.6±10.2 15.7±7.9 54.7±19.8健康组

表2 不同病情程度患者血清VIP、IFN-γ、IL-4水平比较(ng/L，±s)

表2 不同病情程度患者血清VIP、IFN-γ、IL-4水平比较(ng/L，±s)

与病灶在2个肺野内组比较:1)P＜0.05

组别 n VIP IL-4 IFN-γ病灶超过2个肺野或有空洞形成38.5±13.2病灶在2个肺野内17 40.8±17.31) 31.8±14.21)23 28.6±14.2 21.7±8.9 45.7±15.8

表3 不同年龄患者血清中VIP、IFN-γ、IL-4 水平(ng/L，±s)

表3 不同年龄患者血清中VIP、IFN-γ、IL-4 水平(ng/L，±s)

组别 n VIP IL-4 IFN-γ 40 36.8±15.3 28.8±12.2 43.5±18.2中青年活动性肺结核组老年活动性肺结核组30 34.6±11.8 24.3±11.9 35.3±19.4

2.4 血清VIP与IL-4、IFN-γ水平的相关性 老年活动性肺结核患者治疗前VIP与IL-4呈正相关(r=0.672，P＜0.01)，与IFN-γ呈负相关(r=-0.406，P＜0.01)。老年非活动性肺结核组血清VIP与IL-4、IFN-γ之间均无相关性(r值分别为0.256、-0.240，均 P ＞0.05)，健康组血清 VIP 与 IL-4、IFN-γ 之间均无相关性(r值分别为0.204、-0.130，均P＞0.05)。

3 讨论

老年人因机体退行性病变出现胸腺萎缩、骨髓造血干细胞减少，外周血免疫细胞数量及功能下降，免疫细胞之间相互调节失去平衡，导致机体免疫功能紊乱与衰退，使得老年人成为结核杆菌的易感人群。其中淋巴细胞亚群的免疫变化，尤其是老年人感染结核分枝杆菌后T淋巴细胞介导的免疫杀伤作用减退，成为老年人结核病高发的重要原因之一。本研究提示老年肺结核患者确实存在Th1/Th2失衡，Th1保护性免疫反应减弱，Th2反应增强，继而出现迟发型变态反应，伴随免疫病理损伤。研究还显示病变范围大或出现空洞患者Th2优势表达明显，表明Th2反应优势使病灶趋于扩大和加重。

本研究结果显示，老年活动性肺结核患者血清VIP水平显著增高。VIP是体内重要的内分泌免疫调节肽，在特异性抗原刺激后优先由Th2细胞产生，通过作用于抗原递呈细胞和Th细胞本身，调节Th细胞分化及Th1/Th2应答反应。VIP可优先诱导抗原递呈细胞表面上的共刺激分子B7-2在静止巨噬细胞和未成熟树突状细胞的表达，促进Th2型免疫应答〔3，4〕，并可维持Th2效应细胞的存活和记忆性Th2细胞的产生，通过抑制颗粒酶及Fas1配体的表达使Th2型细胞免遭克隆清除〔5〕。另一方面，IL-12是Th1细胞分化的主要驱动因素，VIP通过抑制活化巨噬细胞分泌IL-12，并直接干涉T细胞IL-12的 JAK2/STAT4信号通路，抑制Th1分化〔6〕。在肺结核病变时Th2优势表达可能促进VIP的分泌，导致血清中VIP水平增高。

特异性的细胞因子在Th细胞分化过程中被认为是最主要的因素，VIP通过多种途径影响IFN-γ、IL-4等细胞因子的水平，以促进Th2细胞的分化，抑制Th1细胞增殖。Voice等〔7〕研究发现VIP通过血管活性肠肽受体2受体显著上调IL-4转录因子c-Maf和Junb水平，IL-4的高表达导致Th2细胞免疫的应答。VIP抑制Th1特异性转录因子T-bet，使IFN-γ基因转录失活，影响机体IFN-γ水平，Th细胞分化向Th2方向偏移〔8〕。本研究结果提示在老年活动性肺结核患者VIP水平可能是诱发IFN-γ降低而IL-4增高的重要因素，进而导致了机体的Th1/Th2失衡。

本研究结果提示不同年龄段活动性肺结核患者均可能存在Th1/Th2失衡，导致细胞免疫功能紊乱。老年活动性肺结核患者肺部病变越重，则细胞免疫功能改变越明显，VIP水平增高越显著。随着结核病变的控制好转，Th1/Th2失衡纠正，细胞免疫功能逐渐恢复。因此，对于老年肺结核患者血清VIP水平的检测可能对评价病变严重程度、活动性以及判断其转归具有一定的参考意义。

1 Hartmann P，Plum G.Immunological defense mechanisms in tuberculosis and MAC-infection〔J〕.Diagn Microbiol Infect Dis，1999;34(3):147-52.

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3 Ganea D，Rodriguez R，Delgado M.Vasoactive intestinal peptide and pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide:players in innate and adaptive immunity〔J〕.Cell Mol Biol(Noisy-le-grand)，2003;49(2):127-42.

4 Delgado M，Martinez C，Gomariz RP，et al.Vasoactive intestinal peptide and pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide stimulate the induction of Th2 response by up-regulating B7.2 expression〔J〕.J Immunol，1999;163(7):3629-35.

5 Sharma V，Delgado M，Ganea D.Granzyme B，a new player in activationinduced cell death，is down-regulated by vasoactive intestinal peptide in Th2 but not Th1 effectors〔J〕.J Immunol，2006;176(1):97-110.

6 Liu L，Yen JH，Ganea D.A novel VIP signaling pathway in T cells cAMP--＞ protein tyrosine phosphatase(SHP-2)-＞ JAK2/STAT4--＞Th1 differentiation〔J〕.Peptides，2007;28(9):1814-24.

7 Voice J，Donnelly S，Dorsam G，et al.C-Maf and JunB mediation of Th2 differentiation induced by the Type 2 G Protein-Coupled Receptor(VPAC2)for vasoactive intestinal peptide〔J〕.J Immunol，2004;172(12):7289-96.

8 Voice JK，Grinninger C，Kong Y，et al.Roles of vasoactive intestinal peptide(VIP)in the expression of different immune phenotypes by wild-type mice and T cell-targeted type Ⅱ VIP receptor transgenic mice〔J〕.J Immunol，2003;170(1):308-14.