新疆维吾尔族群体色氨酸羟化酶 1基因 T3804A位点多态性与抑郁症的关联

赵宗峰 张艳君 王慧琴 依布拉音

抑郁症是常见精神性疾病,具有高发病、高复发、高致残和高自杀率的特点[1]。遗传学发现 5-羟色胺(5-HT)以及参与其代谢和转运物质的某些基因多态性与抑郁症存在相关性[2],TPH1是 5-HT合成的限速酶,可能参与情感障碍的起病[3]。TPH1T3804A(rs623580)多态性位点距离外显子 1C有 3个单核苷酸,T-A的变异可影响 TPH1转录活性,导致5-HT的浓度下降,因此可能引发抑郁症[4]。目前国内对于此位点乃至位点民族差异的研究仍不多见,本研究旨在探讨新疆维吾尔族群体 TPH1基因 rs623580位点单核苷酸多态性与抑郁症的关系。

1 对象与方法

1.1 对象 104例维吾尔族抑郁症患者 (男性 43例,女性 61例)来自我院临床心理科,90例维吾尔族正常体检者(男性 37例,女性 53例)来自我院体检中心,正常对照组与研究组男女比例相近。抑郁症的诊断标准同时符合《中国精神障碍分类与诊断标准 (第 3版 )》(CCMD-3)和《美国精神障碍诊断与统计手册(第 4版 )》(DSM-Ⅳ ),既往无精神病史,排除严重躯体疾病和其他精神疾病等情况。对照组样本二系三代无精神疾病家族史。入组成员对研究知情同意。104例研究组年龄 19～ 61岁 ,平均 (37.62± 8.92)岁 ,病程 1～ 37月 ,90例对照组年龄 18～ 61岁,平均(36.14± 8.21)岁,两组年龄差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 基因组 DN A的提取及特定片段的 PCR扩增 采集空腹外周静脉血 3～ 4ml,放置于 5ml的 EDTANa2抗凝管中,-80℃冰箱储存。用 TIANGEN血液基因组 DNA提取试剂盒提取样本 DN A。PCR引物序列由北京鼎国生物技术工程有限责任公司合成,上游引物为 5’-TAAT TATCCTCCCTCCAAGT-3’,下 游 引 物 为 5’-CT TACCCATTCA ATTACCAC-3’。 PCR反应总体系为40μL,反应液为:10xbuffer(含 Mg2+,20μM/μL)4μL,dNT P(10 μM/μL)1 μL,TaqDNA 聚合 酶 (2U/μL)1μL,模板 DNA 1μL,上下游引物各 1μL(10μM/μL),加 ddH2O至 40μL,在PTC-100 PCR扩增仪上扩增。反应程序:95℃预变性 5min,进入循环,95℃变性 45s,51℃退火 1min,72℃延伸 45s,共 30个循环;72℃延伸 10min,4℃保存。反应结束后取 5 μL扩增产物于 1?TAE缓冲液中用 1%琼脂糖凝胶电泳 20min(恒压150V),电泳结果在凝胶成像系统下拍照并保存。

1.2.2 测序分型 扩增产物由北京鼎国生物技术工程有限责任公司进行目的片段测序,结果返回后对相应位点分型并记录。

1.3 统计处理 应用拟合优度检验,计算基因型分布是否符合 Hardy-Weinberg平衡。应用 SPSS10.0分析基因型以及等位基因频率的分布差异。

2 结 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡检验 研究组 (i2=1.710,P=0.425)与对照组 (i2=1.662,P=0.436)的 rs623580位点基因型频率分布符合 Hardy-Weinberg平衡法则。按性别分亚组后,男性研究组 (i2=0.071,P=0.965)与对照组(i2=0.078,P=0.962)的 rs623580位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡法则。女性研究组(i2=2.212,P=0.331)与对照组 (i2=2.258,P=0.323)的 rs623580位点基因型频率分布亦符合 Hardy-Weinberg平衡法则。

2.2 研究组与对照组 rs623580位点基因型与等位基因频率分布的比较 研究组 104例中,3种基因型分别为 21(20.2%)例、 51(49.0%)例、 32(30.8%)例。对照组 90例中 ,3种基因型分别为 33(36.7%)例、36(40.0%)例、21(23.3%)例。两组 rs623580多态性的各基因型和等位基因频率差异具有统计学意义(i2=6.560,P=0.038和i2=5.517,P=0.019)。研究组 A/A基因型频率及 A等位基因频率均高于对照组,见表 1。

表1 两组 rs623580位点基因型与等位基因频率分布的比较[n(%)]

2.3 女性、男性研究组与对照组 rs623580位点基因型与等位基因频率分布的比较 研究组与对照组按性别分亚组,分别比较 rs623580位点基因型与等位基因频率,结果显示,女性研究组与女性对照组基因型频率差异(i2=8.026,P=0.018)和等位基因频率差异(i2=7.154,P=0.007)具有统计学意义。女性研究组 A/A基因型频率及 A等位基因频率均高于女性对照组。男性研究组与男性对照组基因型频率差异和等位基因频率差异不具有统计学意义,见表 2。

表2 女性、男性研究组与对照组 rs623580位点基因型与等位基因频率分布的比较[n(%)]

3 讨 论

TPH基因在 5-HT的新陈代谢中具有重要作用[5],是 5-HT合成的限速酶,T PH的生理活性和表达水平正常与否影响着 5-HT的血浓度,通过增强或减弱 5-HT及其代谢物的作用强度,进而影响它在中枢神经系统的功能,可能引发抑郁症。本研究所选择的多态性位点 T3804A,位于 TPH1上1B内含子嘧啶富足区,rs623580位点发生 T-A的突变后,可形成 AA、AT、TT3种基因型。本实验的研究结果表明,研究组与对照组 TPH1基因 rs623580位点的基因型频率差异和等位基因频率差异具有统计学意义。同时,在研究组中 AA基因型频率高于对照组的频率,等位基因 A的频率也明显高于对照组的频率,此与王兵[6]Jiajun Shi[7]等人的研究一致。研究组与对照组按性别分亚组,女性研究组与对照组基因型频率差异和等位基因频率差异具有统计学意义。男性研究组与对照组基因型频率差异和等位基因频率差异不具有统计学意义。女性研究组中的 AA基因型频率高于女性对照组的频率,女性研究组中等位基因 A的频率也明显高于女性对照组的频率。因此推测 TPH1基因 T3804A位点与抑郁症的发病可能具有关联性,A等位基因可能是抑郁症的易感基因。考虑到抑郁症是一种多基因遗传疾病,并且研究的结果会受到样本容量、地区差异、种族差异、环境因素与遗传因素的相互作用等方面的影响,仍需进一步探讨该基因与抑郁症的关联性。

[1]闵文蛟,孙学礼.抑郁症致病相关基因的遗传学研究 [J].华西医学,2007,22(4):904-905

[2]陈鹏宇,胡泽卿.5-羟色胺能系统在抑郁症中的研究进展 [J].神经疾病与精神卫生,2008,8(4):325-327

[3]杨福中,禹顺英,施慎逊.国内抑郁症遗传学研究 [J].上海精神医学,2008,20(4):245-248

[4]Paoloni- Giacobino A, Mouthon D, LambercyC, etal.Identification and analysis of new sequence variants in the human tryptophan hydroxylase(T PH)gene[J].Mol Psychiatry,2000,5(1):49-55

[5]Te- Jen Lai,Chia- Yen Wu,Hsu- Wen Tsai,et a1.Polymorphism screening and haplotype analysis of the tryptophan hydrox ylase gene(TPH1)and association with bipolar affective disorder in Taiwan[J].BM C Medical Genetics,2005,6(14):1-10

[6]王兵.色氨酸羟化酶基因 T3792A位点遗传多态性与抑郁症的相关性及法医学意义[D].沈阳:中国医科大学,2008

[7]Jiajun Shi,Judith A.Badner,Eiji H attori,et al.Neurotransmission and bipolar disorder: A systematic family based association study[J].Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet,2008,147B(7):1270-1277