老年乳腺癌组织中cortactin和FASCIN的表达及相关性

江朝娜 (海南医学院形态学实验室，海南 海口 570102)

乳腺癌发生发展与生物学行为密切相关，由于肿瘤是多因素作用的结果，因此研究蛋白的表达有重要意义〔1〕。cortactin是一种微丝肌动蛋白结合蛋白，在细胞足突和板状伪足的形成，膜胞输送，细胞内吞噬和肿瘤的形成及侵袭等方面有重要的作用〔2，3〕。FASCIN蛋白是一种结构独特的细胞骨架蛋白，其高表达时能促使活性细胞膜突起，增加细胞运动性，并改变细胞与细胞、细胞与细胞外基质的黏附性〔4〕。本实验应用流式细胞术检测老年乳腺癌组织中cortactin和FASCIN的表达情况，探讨其临床价值。

1 材料与方法

1.1 材料 我院2007年11月至2010年11月老年乳腺癌手术后的冻存新鲜标本作为观察组95例，均为女性，年龄60～75岁，平均66.7岁。标本均再次行HE染色并由病理医师进行判读，纳入均符合2008年(WHO)的诊断标准。患者术前均未进行放疗和化疗。同时选取部分老年患者乳腺其他象限的正常乳腺组织55例作为对照组，年龄60～69(平均63.9)岁。

1.2 cortactin和FASCIN蛋白检测 兔抗人cortactin及FASCIN蛋白的浓缩液均购自武汉博士德生物技术有限公司。cortactin及FASCIN蛋白的表达均采用流式细胞术进行检测，上机前制备好单细胞悬液，取1 ml并严格按实验步骤操作后上机检测〔5〕，应用美国BC公司的流式细胞仪进行检测，做好质量控制，应用系统自带的软件进行数据分析。

1.3 cortactin和FASCIN蛋白的判断标准 以荧光指数(FI)表示cortactin和FASCIN蛋白的半定量表达。FI=(cortactin或FASCIN蛋白表达的荧光强度-对照样品平均荧光强度)÷对照样品平均荧光强度。

1.4 统计学处理 应用SAS6.12软件，应用t检验、相关分析及生存分析。

2 结果

2.1 两组中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表达 观察组中cortactin和FASCIN的表达量明显高于对照组(P＜0.000 1)。见表1。

表1 两组中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表达(±s)

表1 两组中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表达(±s)

组别 n cortactin t值 P值 FASCIN t值 P值对照组 95 1.32±0.31 13.87 ＜0.000 1 1.42±0.39 18.27 ＜0.000 1观察组55 1.00±0.35 1.00±0.29

2.2 观察组中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表达与乳腺癌临床病理特征的关系 观察组中cortactin及FASCIN的表达与肿瘤的淋巴结转移、脉管浸润、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达密切相关。见表2。

2.3 观察组中cortactin及FASCIN表达的相关性 经线性相关分析显示，观察组中cortactin及FASCIN的表达呈正相关性(r=-0.46，P=0.012 5)。

2.4 观察组中cortactin及FASCIN的表达及生存的相关性 随访时间为8～60个月，平均29.7个月。经生存分析显示观察组中cortactin(P=0.021 8)及FASCIN(P=0.013 0)的表达与生存时间相关，即cortactin和FASCIN高表达的患者预后差。

表2 观察组中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表达与乳腺癌临床病理特征的关系(±s)

表2 观察组中cortactin及FASCIN蛋白的半定量表达与乳腺癌临床病理特征的关系(±s)

临床病理特征n cortactin t值 P值 FASCIN t值 P值脉管浸润无 55 1.23±0.24 7.65 0.019 2 1.31±0.37 7.12 0.024 1有 40 1.44±0.31 1.57±0.35淋巴结转移无 53 1.21±0.23 7.13 0.018 2 1.32±0.29 7.46 0.019 9有 42 1.46±0.19 1.55±0.38 ER+ 50 1.25±0.23 6.57 0.020 1 1.33±0.37 5.43 0.039 2- 45 1.40±0.25 1.50±0.35 PR+ 52 1.23±0.27 6.86 0.023 1 1.21±0.31 9.85 0.009 2- 43 1.43±0.25 1.54±0.34

3 讨论

Cortactin的结构有特殊性，cortactin的NTA区域可与肌动蛋白相关蛋白(ARP)复合物形成相互作用，中间的序列参与ARP复合物的激活，羟基端SH3区域在大多数细胞内与细胞膜的微线网络关系密切〔6〕。Cortactin可以引起细胞骨架的改变。Cortactin的过表达时，可以有效增加细胞的运动和迁移能力，对肿瘤的侵袭有重要影响。Cortactin突变时，可以引起细胞形态和运动状态的改变，如细胞变圆、细胞发生堆叠，此时cortactin可以引起微丝组装活动的改变〔7〕。也有观点认为cortactin的表达能针对肿瘤细胞的发展过程，此时主要影响分裂增殖和侵袭转移〔8，9〕。Cortactin及相关肌动蛋白骨架在卵母细胞分裂过程中发挥作用，此机制与纺锤体定位有关。Cortactin在卵母细胞核内的纺锤体的突起与肌动蛋白结合而形成帽状结构，引起染色质向细胞周围移动，有效地实现细胞的分裂〔10，11〕。FASCIN基因编码的FASCIN蛋白是一种肌动蛋白结合蛋白，可以通过增加细胞膜突起、改变细胞与细胞外基质的黏附作用以及通过细胞信号转导通路促进肿瘤的侵袭和转移。FASCIN在正常的乳腺上皮中低表达，在肿瘤进展时表达增强。有研究显示FASCIN蛋白表达的增加，细胞膜表面突起增多、细胞分化程度降低、细胞增生能力增强、肌动蛋白的骨架重建，细胞的运动功能增强，即FASCIN通过参与细胞突起形成来促进肿瘤细胞的进展〔12〕。也有观察认为FASCIN是一种潜在的肿瘤转移促进基因，可能与其强效地促进肿瘤细胞的迁移有关〔1〕。

本实验提示cortactin和FASCIN对肿瘤的发生具有明显的促进作用，FASCIN对肿瘤的作用与可能与促进增殖有关〔13〕。cortactin和FASCIN二者可能具有协同作用。cortactin和FASCIN的协同作用与二者同为细胞骨架相关蛋白有关，也与二者共同促进肿瘤细胞的迁移有关〔14〕。cortactin和FASCIN均有促进肿瘤细胞外基质降解的作用，使限制肿瘤细胞迁移的屏障丢失，为肿瘤细胞转移提供直接的条件。cortactin和FASCIN高表达也可能是通过影响细胞支架结构和整合素介导的信号传递，参与的血管发生的激活阶段有关。cortactin和FASCIN高表达时提示肿瘤进展，尤其是提示肿瘤的活动性增强、转移能力增强。由于淋巴结转移、脉管浸润、ER、PR的表达在常规病理诊断及临床观察中均为与预后相关的密切指标，因此联合检测cortactin和FASCIN的表达可能和乳腺癌的预后相关，而生存分析直接证实了此结论。

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