maspin和Ets-1在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

徐韶杰，尚培中，李 伟，蔡大伟，韩雪梅，王静波

宫颈鳞状细胞癌是妇科常见的上皮来源恶性肿瘤，近年来发病率呈上升趋势［1-2］。目前手术切除是其主要的治疗方式，放疗或化疗是重要的辅助手段。尽管如此，不少患者在治疗期间出现癌细胞的扩散、转移，导致预后不良。近年研究表明，抑癌基因maspin和转录因子Ets-1在肿瘤侵袭和转移过程中发挥了重要作用。本研究应用免疫组化EnVisionTM法对原发性宫颈鳞状细胞癌组织进行maspin和Ets-1检测，旨在探讨两者在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其相关性，为判断预后、指导临床治疗提供客观参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集解放军316医院和解放军251医院2006年1月4日—2012年10月25日原发性宫颈鳞状细胞癌根治性手术切除标本70例，年龄42～81岁，平均58岁，≥58岁45例，＜58岁25例。肿瘤最大径2.5～4.5 cm，平均3 cm，≥3 cm 47例，＜3 cm 23例。同时选取距肿瘤0.3 cm处癌旁组织标本30例作为对照。病例均无其他严重内科疾病或其他恶性肿瘤，术前均未行化疗、放疗及免疫治疗。

1.2 方法 浓缩型maspin鼠抗人单克隆抗体及即用型Ets-1兔抗人多克隆抗体均由福州迈新生物技术开发有限公司提供，其中浓缩型maspin按1:150作为工作浓度。免疫组化染色采用EnVisionTM法，操作步骤参照相应的说明书进行。阳性对照切片由提供试剂公司提供，PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断标准［3］背景染色清晰，阳性反应呈黄色或棕黄色颗粒。结果判读由两位病理科医师在10个高倍视野下观察阳性细胞所占的比率，规定阳性细胞率＜20%为阴性，≥20%为阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS 17.0软件包进行统计学分析，计数资料组间比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman检验，α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 maspin和Ets-1在宫颈鳞状细胞癌及癌旁组织中的表达 maspin和Ets-1在宫颈鳞状细胞癌及癌旁组织中阳性反应主要定位于细胞质，见图1、2。maspin阳性表达率在宫颈鳞状细胞癌组织中为37.14%(26/70)，在癌旁组织中为70.00%(21/30)，差异有统计学意义(χ2=9.10，P ＜0.05)。Ets-1阳性表达率在宫颈鳞状细胞癌组织中为64.28%(45/70)，在癌旁组织中为 13.33%(4/30)，差异有统计学意义(χ2=21.82，P ＜0.05)。

2.2 maspin和Ets-1表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理指标的关系 maspin表达阳性率在年龄及淋巴结有无转移间差异无统计学意义(P＞0.05)，但在肿瘤大小、组织学分级、TNM分期及增殖活性Ki-67间，差异有统计学意义(P＜0.05);Ets-1表达阳性率在年龄及肿瘤大小间，差异无统计学意义(P＞0.05)，但在组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及增殖活性Ki-67间差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

图1 maspin在宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织中的表达(EnVisionTM法×100)

图2 Ets-1在宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织中的表达(En-VisionTM法×100)

表1 maspin和Ets-1表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理指标的关系

2.3 maspin和Ets-1在宫颈鳞状细胞癌组织中表达的相关性 70例宫颈鳞状细胞癌组织中，maspin和Ets-1表达同时阳性者11例，同时阴性者10例，maspin阳性、Ets-1阴性者15例，maspin阴性、Ets-1阳性者34例，两者呈显著负相关(r=－0.35，P＜0.05)。

3 讨论

maspin基因是一种肿瘤抑制基因，位于染色体18q21.3，由6个内含子和7个外显子构成。第1个外显子不编码蛋白质，其启动区无TATA盒，但富含GC［4］。maspin蛋白属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一种，相对分子量为42 000，其C端位点环为主要的反应部位，该区域高度保守，如其变异可影响maspin蛋白功能;其N端有识别靶蛋白和结合胶原作用的P1残端。maspin蛋白在人体正常甲状腺、乳腺及前列腺等组织中呈高水平表达，通过降低肿瘤细胞运动侵袭能力、抑制新生血管形成等多种途径发挥抑制肿瘤的作用。在乳腺癌、非小细胞肺癌和卵巢癌等肿瘤中，maspin呈低表达或表达缺失，表明其异常表达参与了多种肿瘤的发生、发展［5-7］。本实验表明，maspin在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达明显低于癌旁组织，推测maspin在良性病变或正常组织中呈高水平表达，而在恶性病变组织中呈低水平表达，这与张远起等［3］研究结论相符。分析maspin与宫颈鳞状细胞癌临床病理指标之间的关系时发现，其表达与患者年龄及淋巴结转移无关，这与maspin具有抑制癌细胞的浸润转移结论［8］不符。说明maspin在不同组织中的功能表现不尽相同，可能与其C端活性位点环功能有关。成少华等［9］研究了胃癌组织中maspin的表达，结果显示在高、中分化组高于低分化组、TNMⅠ～Ⅱ期高于Ⅲ～Ⅳ期。本实验显示，maspin与肿瘤大小、组织学分级及TNM分期有关，且分化程度越高，其表达水平相对亦高，显示maspin可在一定程度上反映肿瘤的恶性程度。Ki-67是一种核增殖标志物，其表达与细胞的增殖活性密切相关。Ki-67在多种恶性肿瘤中呈高表达，其表达水平越高，肿瘤细胞增殖就越快，也就更易于发生侵袭、转移［10-11］。实验发现，maspin在Ki-67高表达者中的阳性率低于Ki-67低表达者，推测maspin具有与Ki-67相反的功能。

Ets(E26 transformation-specific)家族转录因子主要包括Ets-1和Ets-2，其结构均有一特异的DNA结合序列，影响着Ets-1和Ets-2的活性［12］。Ets-1基因位于染色体11q23，其编码的蛋白质相对分子量为54 000。Ets-1能够调节一系列与细胞外基质重建有关的基因表达，如尿激酶型纤维蛋白溶酶原活化物(uPA)，基质金属蛋白酶(MMP)-1、3、9，整合素β-2等，这些物质可降解细胞外基质，使细胞黏附能力降低，有利于肿瘤细胞的游走、浸润生长和转移。Ets-1在肺癌、胃癌、结直肠癌等多种实体肿瘤中呈高表达［13-15］。本实验结果显示，Ets-1在宫颈鳞状细胞癌组织中呈高表达，且明显高于癌旁组织，这与郑丽娟等［16］研究结论相符。Ets-1在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达与患者年龄及肿瘤大小无关，而与组织学分级、TNM分期及淋巴结转移有关，且在增殖活性Ki-67表达越高的患者中其表达亦越高，因而推测Ets-1的高表达预示着宫颈鳞状细胞癌恶性度高、预后不良。这与Ets-1在肿瘤浸润过程中主要参与细胞外基质重塑、降解有关［17］。

对一些肿瘤标志物的免疫组化研究，有助于预测宫颈鳞状细胞癌对放疗的敏感性，作为新辅助化疗疗效的预测指标，也为分子靶向治疗带来了新的曙光［18-21］。本研究结果显示maspin与Ets-1之间呈显著负相关，可见两者之间存在信号传导进而相互调节，其机制可能与maspin的结构有关，在maspin启动子区域存在多个重要转录因子结合点，其中就包括Ets-1［8］。资料显示，maspin能够直接抑制培养基中血管内皮细胞向碱性纤维生长因子和血管内皮生长因子的运动，抑制有丝分裂和血管的生成［22］。然而，有丝分裂信号可以改变Ets-1的磷酸化状态，使其磷酸化，进而抑制其DNA结合能力，由此可知，有丝分裂信号可抑制Ets-1活性［12］。

综上所述，在宫颈鳞状细胞癌组织中，maspin表达下调，而Ets-1表达上调，前者与肿瘤大小、组织学分级、TNM分期及增殖活性Ki-67显著相关，后者与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及增殖活性Ki-67显著相关。两者表达呈负相关，共同参与了宫颈鳞状细胞癌的发生、发展。探讨它们的生物学功能及其相关作用机制，有利于对宫颈鳞状细胞癌的综合治疗和预后评估。

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