氨苄西林钠舒巴坦钠混合粉中的残留溶剂检测

奚剑英，厉守权

(浙江普洛康裕天然药物有公司，浙江 金华 321017)

药品中的残留溶剂是指在合成原料、辅料或制剂生产过程中使用或产生的挥发性有机化学物质，其在生产过程中未能被全部清除，服用后对人体有毒性和致癌作用，近年来日益引起了多方重视[1－4]。氨苄西林钠舒巴坦钠是目前临床上应用最广泛的抗生素之一，根据工艺路线，氨苄西林钠合成过程中使用了二氯甲烷和乙腈，舒巴坦合成过程中使用了乙醇、乙酸乙酯和丙酮。按照目前新药审批和中国药典的要求，必须对这些残留溶剂进行控制。笔者根据2010年版《中国药典(二部)》附录残留溶剂检查法[5]和ICH的要求，建立了测定氨苄西林钠舒巴坦钠混合粉中残留溶剂的顶空毛细管气相色谱法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent6890型气相色谱仪及7694E型顶空进样器。二氯甲烷、无水乙醇、乙酸乙酯和丙酮(分析纯)，乙腈(色谱纯)，水(重蒸水);样品(上虞京新药业股份有限公司，批号为060401，060402，060403)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Innowax PEG－20M毛细管色谱柱(30.0m×0.32mm，0.25 μm);柱温:40 ℃;进样口温度:200 ℃;检测器温度:250℃;FID 检测。柱流速:1.0mL/min;分流比:1∶1。顶空进样，平衡温度为80℃，平衡时间为20min;进样体积为1.0mL。

2.2 溶液配制

称取乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷和乙腈各适量，精密称定，加水制成每 1mL 分别约含 0.2mg，0.2mg，0.2mg，0.024mg和0.016mg的混合溶液，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液5mL，置顶空取样瓶。称取本品约0.2 g，精密称定，置顶空瓶中，精密加水5mL使溶解，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:取含丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈的对照品混合溶液，按拟订的色谱条件进样。结果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈的理论板数分别为45 403，52 215，58 532，38 808，51 839，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈间的分离度分别为 10.2，8.8，1.7，16.7;空白溶剂水对测定无干扰(见图 1)。

图1 气相色谱图

重复性试验:取丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈的对照品混合溶液6份，按拟订的色谱条件进样测定。结果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈峰面积的 RSD分别为1.3%，0.9%，3.0% ，0.6%，1.4%(n=6)。

线性关系考察:分别精密称取丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈各适量，加水溶解并稀释，制成一系列质量浓度的对照品溶液。分别精密量取5mL，置顶空进样瓶，按拟订的色谱条件进样测定，结果见表1。可见色谱峰面积(A)与质量浓度(C)呈良好的线性关系。

表1 线性关系试验结果

回收率试验:精密称取已测定残留溶剂含量的样品9份，分别精密加入丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈对照品溶液适量，按拟订的色谱条件进样测定。设计3个不同的质量浓度进行测定，共9个测定结果，计算回收率。结果见表2，平均回收率均在80% ～120%之内，符合残留溶剂测定准确度的要求。

表2 回收率试验结果

稳定性试验:取对照品混合溶液，按拟订的测定方法，于0，1，2，8 h时测定。结果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈峰面积变化的 RSD 分别为 1.4% ，1.0%，2.5%，1.2% ，2.0%，表明溶液基本稳定。

最低检出质量浓度确定:通过逐级降低对照品混合溶液的质量浓度，依法进样测定，确定检测限，信噪比为3∶1。结果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈最低检测质量浓度分别为0.04，0.04，0.04，0.2，3.9 μg/mL。

2.4 样品中残留量测定

将盛有对照品溶液及供试品溶液的顶空进样瓶，置顶空进样器80℃加热20min，在拟订的色谱条件下进样，记录色谱图，量取峰面积，按外标法以峰面积计算含量。结果见表3。

表3 样品中丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈残留量测定结果(%)

3 讨论

样品检测结果表明，3批样品中均有二氯甲烷、乙醇残留，丙酮、乙酸乙酯和乙腈未检出。氨苄西林钠舒巴坦钠混合粉中的二氯甲烷残留来自氨苄西林钠，乙醇残留来自舒巴坦钠。本试验建立的方法能有效检出和控制氨苄西林钠舒巴坦钠混合粉中的残留溶剂。2010年版《中国药典(二部)》中注射用氨苄西林钠舒巴坦钠质量标准未列该项检查，氨苄西林钠舒巴坦钠混合粉进口注册标准JX20050187列有该项检查。根据3批样品中残留溶剂的实测结果，可将此项检查列入质量标准，限度按2010年版《中国药典(二部)》附录ⅧP的规定。

采用顶空进样法测定药品中残留溶剂，测定干扰小，对仪器污染少，因此检测低沸点的二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、乙腈和丙酮，首选顶空进样。通过系列柱温(40，50℃)的试验，结果柱温为50℃时二氯甲烷和乙醇间分离不佳，柱温为40℃时二氯甲烷和乙醇可完全分离，因此选择柱温为40℃。氨苄西林钠舒巴坦钠混合粉为水溶性药物，因此首选水作为溶剂，干扰小，灵敏度高。方法学考察结果表明，被测物均能得到很好的分离，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，精密度和回收率良好。因此，该法可用于氨苄西林钠舒巴坦钠混合粉原料药中残留溶剂的检测。

[1]刘津爱，朱 梅.毛细管柱顶空气相色谱法测定培美曲赛二钠中有机溶剂残留量[J].中国药业，2011，20(19):25.

[2]秦 立.顶空气相色谱法测定药品中残留溶剂的影响因素考察[J].药物分析杂志，2005，25(7):823.

[3]魏 玲.顶空毛细管气相色谱法测定阿奇霉素中的残留溶剂[J].药物分析杂志，2005，25(11):1 357.

[4]张雅军.气相色谱法测定阿德福韦酯中的10种残留溶剂[J].药物分析杂志，2005，25(6):660.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2010:附录ⅧP.