气相色谱－质谱法测定硫酸亚铁缓释片中邻苯二甲酸二辛酯含量

黄朝辉，桑旭峰

(浙江省宁波市药品检验所，浙江 宁波 315048)

塑化剂是一种人工合成的化学物质，主要用于工业生产，添加在塑胶中可增加柔软度、延展性。塑化剂的分子结构类似激素，被称为“环境荷尔蒙”，若长期食用可能引起生殖系统异常，甚至造成畸胎、癌症的危险[1－2]。2011年4月，台湾卫生部门例行抽验食品时，在一款“净元益生菌”粉末中发现含有邻苯二甲酸二辛酯(DOP)，浓度高达600×10－6。塑化剂的阴影不仅仅存在于食品、保健品之中，在药品中亦可能普遍存在。为使药物成分能均匀地混悬在兑水稀释后的药液中，不影响药效，就需要使用药用辅料如塑化剂等。此外，在使用肠包衣的片剂类、乳剂类和缓释类药品中，塑化剂的使用也相对广泛。而药用辅料，如用塑料做的包装材料和药瓶中，也有塑化剂。我国2010年颁布的新版《中华人民共和国药典》，只收载了邻苯二甲酸二乙酯(DEP)[3]。2011年6月，经中国食品药品检定研究院检验，在葛兰素史克公司生产的阿莫西林克拉维酸钾干混悬剂中检出邻苯二甲酸二异癸酯(DIDP)。检测DOP的方法有气相色谱－质谱联用(GC－MS)法[4]、液相色谱－质谱联用(LC－MS)法[5－6]等。本研究中建立了检测硫酸亚铁缓释片中DOP含量的GC－MS法。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 7890－5975C型气相色谱－四级杆质谱联用仪 (美国Agilent公司);SB－5200DTN型超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);R 200 D型电子分析天平(德国赛多利斯公司);CH80－2型台式低速离心机(上海优浦科学仪器有限公司)。甲醇(HPLC级，默克公司);DOP对照品(中国药品生物制品检定研究院，药品中塑化剂监测用对照物质);硫酸亚铁缓释片(批号分别为 20101101，20110101，20100604，吉林精优长白山药业有限公司);硫酸亚铁片(批号分别为101118，110210，广西梧州三箭制药有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱－质谱条件

采用Agilent7890－5975C型气相色谱－四级杆质谱联用仪，HP－5MS型色谱柱(30m ×0.25mm，0.25μm)，流速 1.0mL/min，不分流。程序升温:起始温度为60℃，保持1min，20℃ /min升温至220℃，保持1min，再5℃ /min升温至300℃，保持7min。接口温度280℃;离子源温度230℃，电离方式EI+;四级杆温度150℃，扫描质量范围:45～500 amu。在上述条件下，DOP的色谱峰见图1。

图1 DOP气相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取DOP对照品19.75mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取1.0mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密吸取对照品储备液，用甲醇稀释制成约1.58μg/mL的溶液作为对照品溶液。取供试品约1 g，研细，精密称定，置20mL锥形瓶中，精密加入甲醇 5mL，超声 30min，离心 5min(3 000 r/min)，吸取上清液，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品储备液 1，2，4，6，8，10mL，分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成质量浓度为0.79～7.9μg/mL 的系列对照品溶液。取 1μL，注入气相色谱仪，按上述色谱条件，以各对照品总离子流峰面积对进样量进行回归，计算回归方程为 Y=3×106X+99 132(r=0.998 1)。结果表明，DOP 进样量线性范围是 0.79 ～7.9 ng。

定量限及检测限测定:用甲醇将质量浓度为0.79μg/mL的对照品溶液逐步稀释，依法测定。DOP的 S/N=3时的检出限为0.018 ng，S/N=10 时的定量限为 0.082 ng。

精密度试验:精密吸取对照品溶液(质量浓度为1.58μg/mL)1μL，按2.1项色谱质谱条件，连续进样5次，测定DOP色谱峰峰面积。结果的 RSD为1.8%(n=5)。

稳定性试验:精密量取对照品溶液(质量浓度为1.58μg/mL)1 μL，分别于制备后 0，2，4，6，8，12 h 进样，测定 DOP 的色谱峰峰面积。结果的 RSD为1.9%(n=6)，表明溶液在室温放置12 h内基本稳定。

加样回收试验:取样品6份，每份约1 g，精密称定，分别置20mL锥形瓶中，再分别精密加入DOP对照品储备液(质量浓度为7.9μg/mL)适量，照2.2项下方法制得供试品溶液，分别精密吸取1μL，注入气相色谱仪，测定色谱峰峰面积，计算DOP的平均回收率为 95.0%，RSD 为 2.3%(n=6)。

2.4 样品含量测定

取硫酸亚铁缓释片，研细，取细粉约1 g(共5批)，精密称定，置20mL锥形瓶中，按2.2项下方法制得供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各1μL，注入液相色谱仪，测定DOP的总离子流峰面积，按外标法计算样品中DOP浓度，进一步换算为固体样品中DOP的含量(μg/g)。结果见表1。

表1 样品含量测定结果(μg/g，n=3)

3 讨论

由于塑化剂广泛存在于塑料制品中，因此配制样品时不能使用塑料制品，而是全部采用玻璃容器。美国食品与药物管理局认为，DOP可耐受的日摄入量为600μg/kg。试验结果表明，5批硫酸亚铁缓释片中DOP的含量均很小，按照药品说明书的要求使用，摄入的DOP量对人体几乎无害。

[1]Sonia H，Allen A，Katherine E.Medications as a potential source of exposure to phthalate in U.S.population[J].Environ Health Perspect，2009，117(2):185－189.

[2]Eve M.Russell cc，Paul MD.Male reproductive tractmalformations in rats following gestational and lactational exposure to di(n－butyl)phthalate:an antiandrogenicmechanism[J].Toxicol Sci，1998，43(1):47 －48.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:1 198.

[4]杨科峰，厉曙光，蔡智明.食用油及其加热产物中酞酸酯类增塑剂的分析[J].环境与职业医学，2002，19(1):37 －38.

[5]刘红河，黄晓群，王 晖.高效液相色谱－串联质谱法测定食品中联苯二甲酸酯[J].现代预防医学，2008，35(1):119－121.

[6]熊梅谨，费小凡，陈 聪.LC－MS/MS测定注射用聚氯乙烯袋中注射液的联苯二甲酸二异辛酯[J].华西药学杂志，2008，23(1):92－93.