盐酸地芬尼多杂质烯化合物的制备及结构确证

曹凤习，刘 晖 ，靳茂礼 ，周建敏，刘 珠

(1.河北省石家庄市食品药品检验所，河北 石家庄 050031;2.石药集团新诺威制药股份有限公司，河北 石家庄 050031)

盐酸地芬尼多(difenidol hydrochloride)是临床常用的抗晕止吐药，用于治疗高血压、美尼尔氏综合征等引起的眩晕症，口服吸收迅速，疗效确切。盐酸地芬尼多化学名为α，α－二苯基－1－哌啶丁醇盐酸盐，系由1，3－氯溴丙烷为原料，经烷基化、格式反应、水解、成盐而得[1－2]。在其生产过程中极易产生1个主要杂质，该杂质是生产过程中因酸性介质而产生的盐酸地芬尼多的脱水产物，依据1990年版《中国药典(二部)》药典注释[2]及相关文献[3]，可判定其主要杂质为1，1－二苯基－4－哌啶－1－丁烯盐酸盐(简称烯化合物)。为了更好地控制产品质量，拟对该杂质进行定量测定。由于目前没有杂质对照品，笔者参考文献[3]制备出烯化合物精制品，并通过红外、紫外、高效液相色谱、质谱等确证其结构，结果与文献[3，5]基本一致;并对制备出的烯化合物精制品进行标定，以此作为烯化合物对照品，可用于盐酸地芬尼多原料及其制剂有关物质检查中杂质烯化合物的定量测定[6]。

1 仪器与试药

ABI3200型LC－MS(美国AB公司);LC－20AD型高效液相色谱仪(日本岛津公司)。盐酸地芬尼多原料(湖南湘江千金药业有限公司，批号为080206);甲醇、三乙胺为色谱纯(进口)，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 制备

取盐酸地芬尼多原料2 g，加乙醇20 mL使溶解，再加2 mol/L的盐酸溶液10 mL，置60℃水浴中加热15 min，取出，蒸干，得酸化产物;加二氯乙烷40 mL，温热使溶解，边摇边滴入石油醚(沸程90～120℃)至微显混浊，待溶剂自然挥散，析出结晶;再重结晶，得无色片状结晶，即烯化合物。干燥后测其熔点为173.2～173.9 ℃。

2.2 结构确证

2.2.1 检测条件

液相色谱部分:色谱柱为VP－ODS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为甲醇 －0.5%三乙胺溶液(用冰醋酸调节 pH至 4.0)－ 甲醇(44 ∶56);流速为 1.0 mL/min;柱温 30 ℃ ;进样量 5 μL。

质谱部分:电喷雾离子化正离子检测方式(ESI+);质核比范围 200～400;离子源电压 5 000 V;雾化气流速 10 L/min(高纯氮气)，加热辅助气流速10 L/min(高纯氮气)，气帘气流速10 L/min(压缩空气);离子源温度400℃。锥孔电压10 V，去簇电压65 V，碰撞能量25 eV，检测方式为全扫描一级质谱、选择离子二级全扫描质谱检测方式。

2.2.2 溶液配制

精密称取烯化合物精制品适量，加甲醇溶解并稀释成每1mL中含烯化物0.5 μg的溶液，作为对照品溶液。取本品25 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加甲醇适量，振摇使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 烯化合物精制品色谱、光谱及质谱行为

采用正离子检测方式对杂质烯化物精制品溶液进行高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)和二级串联质谱(MS/MS)分析，保留时间为14.27 min，准分子离子[M+H]+峰 m/z为 292;对 m/z为292进行二级全扫描质谱分析，产生的主要碎片离子有 m/z 129，91，推测其质谱裂解途径如图1至图5所示。

2.2.4 供试品定性检测

在相同的色谱及质谱条件下，对供试品溶液进行HPLC、MS和MS/MS分析，检测到在保留时间为14.27 min，准分子离子[M+H]+峰 m/z为292;对 m/z为292进行二级全扫描质谱分析，产生与烯化合物精制品相同的碎片离子，且紫外光谱、保留时间均与烯化合物精制品相同，紫外图谱及液相色谱图见图6和图7。结合紫外光谱、液相色谱保留时间及准分子离子和二级质谱裂解碎片等几方面的信息，可以证明供试品溶液产生的主要杂质(即保留时间为14.27 min的色谱峰)与通过将盐酸地芬尼多酸化得到的烯化物精制品一致。

2.2.5 红外光谱定性

取烯化合物结晶在红外分光光度计上检测、分析，红外光谱图见图 8。可见，3 030，3 053，3 077 cm－1(υC=C－H)，2 397 ～2 601 cm－1(υ+NH)，1 638 cm－1(υC=C)，1 600 ～1 440 cm－1(υ苯环骨架)，762，697 cm－1(δ苯环相邻5H);与文献[3]基本一致。结合紫外光谱、红外光谱、液相色谱保留时间及准分子离子和二级质谱裂解碎片等几方面的信息，可以进一步证明将盐酸地芬尼多酸化得到的结晶即为烯化合物，供试液中产生的主要杂质即为烯化合物。

2.3 标定

色谱条件同盐酸地芬尼多有关物质检查[4]，采用VP－ODS C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，以 0.5%三乙胺溶液(用磷酸调PH 至 4.0)－甲醇(44∶56)为流动相，流速为 0.8 mL/min;检测波长为210 nm，柱温30℃。取烯化合物精制品25 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液;精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算烯化合物的含量。结果样品含量为99.96%，表明该烯化合物精制品纯度很高，可以作为对照品使用。

3 讨论

在反相HPLC法测定盐酸地芬尼多原料的有关物质研究中发现，在将原料进行酸破坏时，酸化过头，液相色谱图中盐酸地芬尼多主峰几乎全部转化为其主要杂质。由此结合文献，采用盐酸地芬尼多原料经酸化处理，再提取得到结晶，经结构确证，此结晶即为烯化合物，与盐酸地芬尼多产生的主要杂质保留时间一致，故确定盐酸地芬尼多产生的主要杂质为烯化合物。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:490.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典1990年版二部药典注释[M].北京:化学工业出版社，1990:513－515.

[3]汪文涛.眩晕停中的杂质及其检定[J].药物分析杂志，1984，4(1):8－12.

[4]曹凤习，姜建国，刘红莉.RP－HPLC测定盐酸地芬尼多原料的有关物质[J].中国现代应用药学，2009，26(8):661 －664.

[5]张茜茹，曹凤习，姜建国.高效液相色谱－电喷雾电离－质谱法分析盐酸地芬尼多的相关物质[J].中国药业，2010，19(10):41－42.

[6]曹凤习，刘红莉.高效液相色谱法测定盐酸地芬尼多原料中杂质烯化合物的含量[J].中国药业，2011，20(5):19－20.