山茶籽对去卵巢大鼠子宫和相关激素水平的影响

李 海 陈建海 王金花 黄海玲 黎 飚 (右江民族医学院组织胚胎学教研室，广西 百色 533000)

衰老致性腺分泌性激素减少是导致老年性疾病重要原因之一。雌激素在中老年妇女疾病防治和保健方面广泛应用，甚至滥用，其副作用和并发症日益显现，人们希望用安全有效的植物性雌激素来替代雌激素。山茶籽榨油后的茶麸富含植物性雌激素〔1～3〕，本文观察其对大鼠卵巢、子宫和相关激素影响。

1 材料与方法

1.1 材料及设备 选用80只6月龄健康雌性大鼠(广西医科大学实验动物中心提供，合格证号SCXK桂2009-0102)，山茶籽醇提取物为广西巴马县山茶籽榨油后的茶麸用石油醚脱脂三次，再用95%乙醇回流提取剩余物三次合并浓缩至浓度为8.6 g生药/g，灭菌后2～5℃密封冰箱保存，用药时用蒸馏水稀释成5 g生药/g。北京瑞利分析仪器公司的WFX-IE2型原子吸收分光光度计，上海分析仪器厂生产半自动生化仪器测定;德国Reichert-Jung公司的820-Ⅱ轮式组织切片机;厦门麦克奥迪公司生产的摄像光学显微镜。

1.2 方法

1.2.1 动物编号和分组 按体重编号，手术前将80只大鼠随机分成4组(n=20)。(1)假手术(sham)组;(2)去卵巢模型组(OVX);(3)山茶籽+去卵巢(Ts+OVX)组;(4)山茶籽+假手术(Ts+sham)组。各组大鼠在二级动物室给予分笼饲养，标准饲料，温度(25±1)℃，自由饮水，饲养环境条件相同。

1.2.2 去卵巢动物模型(OVX)的建立 随机取两组大白鼠用10 g/L戊巴比妥钠溶液腹腔麻醉(3.0 mg/kg)，无菌条件下经腹部单切口进入腹腔，切除双侧卵巢，切口分层缝合。切下的卵巢经组织学鉴定确认。术后用硫酸庆大霉素注射3 d，防止伤口感染，1 w后用药组开始用药。sham组手术方法与去卵巢动物模型组的手术方法相同，只切除卵巢旁的一小块脂肪垫，不切除卵巢。术后用硫酸庆大霉素注射3 d，防止伤口感染，1 w后用药组开始用药。

1.2.3 2个治疗组用药 ①Ts+OVX组，山茶籽醇提物水溶液灌胃，10 ml·kg－1·d－1(5 g 生药/g);②Ts+sham 组，山茶籽醇提物溶液灌胃，10 ml·kg－1·d－1(5 g生药/g)。两组均连续用药12 w。

1.2.4 观察的指标 ①光镜下子宫组织形态结构;②体重、子宫湿重、子宫系数;③血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡激素(FSH)和黄体生成素(LH)含量。

1.2.5 观察时间和方法 在实验第12周每只大鼠称重后，用10 g/L戊巴比妥钠溶液腹腔麻醉(3.0 mg/kg)取左心血5 ml，再处死取子宫(包括子宫颈和双侧子宫)。细心分离清除子宫周围的组织后精确称重，再计算子宫系数。称重后，新鲜的子宫甲醛固定，截取Y型子宫交叉处上方段约1 cm的子宫，常规脱水、浸蜡、包埋，切片和HE染色，显微镜下观察各组大鼠子宫壁三层组织结构的变化。血液通过1-15PK离心机4 000 r/min，离心10 min分离血清，保存于-20℃冰箱待测。血清E2、P、FSH和LH含量均用放免测试盒测定。

2 结果

2.1 光镜下子宫组织形态结构 sham组子宫大小正常，组织切片光镜下子宫内膜、肌层和外膜的三层结构清楚，内膜较厚。子宫腺发达丰富，腺体长而弯曲，腺腔较大。子宫基质细胞丰富。OVX组的子宫明显萎缩变小，组织切片光镜下子宫内膜、肌层和外膜的三层均变薄，内膜最为明显。子宫腺很少，腺体短而直，腺腔较小，子宫基质细胞分布稀疏。与OVX比较，Ts+OVX组切片光镜下子宫内膜、肌层和外膜的三层均变厚。子宫腺变多，腺体增长，腺腔增大。与sham组比较，Ts+sham组子宫光镜下切片组织形态结构没有明显的改变。见图1。

图1 各组子宫横切面组织形态结构(HE，×40)

2.2 各实验组的体重、子宫湿重、子宫系数测量结果 与sham组比较，OVX组子宫重量明显减轻(P＜0.01)，子宫系数显著变小(P＜0.01);与OVX组比较，Ts+OVX组的子宫增重明显(P＜0.01)，子宫系数明显变大(P＜0.01);与sham组比较，Ts+sham组的子宫重量、子宫系数变化没有显著性(P＞0.05)。见表1。

表1 各组大鼠体重、子宫湿重、子宫系数比较(±s，n=20)

表1 各组大鼠体重、子宫湿重、子宫系数比较(±s，n=20)

与sham组比较:1)P﹤0.01;与OVX组比较:2)P﹤0.01;下表同

组别 体重(g) 子宫湿重(g) 子宫系数(%)360.04±15.14 0.714±0.125 0.208±0.023 OVX组 371.15±14.38 0.128±0.0451) 0.035±0.0141)Ts+OVX组 349.45±21.74 0.571±0.1022) 0.163±0.0212)Ts+sham组sham组368.30±17.34 0.684±0.148 0.186±0.019

2.3 各实验组大鼠血清相关激素测量结果 与sham组比较，OVX组的血清E2和P含量明显减少(P﹤0.01)，而血清FSH和LH含量明显升高(P﹤0.01);与OVX组比较，Ts+OVX组血清E2和P含量明显升高(P﹤0.01)，而血清FSH和LH含量明显降低(P﹤0.01);与sham组比较，Ts+sham组的血清E2、P、FSH和LH含量没有明显变化(P＞0.05)。见表2。

表2 各组大鼠血清相关激素结果(±s，n=20)

表2 各组大鼠血清相关激素结果(±s，n=20)

组别 E2(ng/L) P(μg/L) FSH(U/L) LH(U/L)20.78±3.25 19.43±2.02 3.01±0.64 3.62±0.85 OVX组 2.39±0.821)10.24±1.731)5.84±1.161)7.89±2.121)Ts+OVX组13.32±2.502)14.56±2.112)4.16±0.522)5.46±1.032)Ts+sham组sham组19.45±4.22 20.12±1.87 2.97±0.61 3.35±1.10

3 讨论

卵巢是雌激素和孕激素主要分泌器官，摘除卵巢雌激素和孕激素分泌减少，其血液所含水平明显下降，引起生长期的子宫停止生长，成熟期子宫新陈代谢降低。随着时间的延长，子宫萎缩变小，子宫重量减轻。雌激素对子宫增重作用还受到子宫的功能状态、年龄、剂量等多种因素的影响。

本文结果显示与sham组比较，Ts+sham组的子宫重量、子宫系数没有显著性变化，究其原因可能有两方面的因素。一方面，所用的实验大鼠属于成年期，子宫已发育成熟，所以雌激素对子宫增重作用不明显;第二方面，山茶籽醇提物主要含有异黄酮，属于植物性雌激素，其有别于体内的雌激素，有双向调节作用。当体内雌激素缺乏时，它可转化为有活性雌激素;当体内雌激素充足时，它有可以与雌激素受体结合并起到抑制雌激素作用〔6，7〕。OVX组的雌激素和孕激素血液所含水平明显下降是因为卵巢没有雌激素和孕激素主要来源。而OVX组的血清FSH和LH含量明显升高是因为血液雌激素和孕激素含量的下降，其对垂体反馈抑制减弱，从而垂体分泌更多的FSH和LH升高〔8〕。

本文结果说明山茶籽所含的植物性雌激素在提可转化为体内的雌激素(E2)，而且植物性雌激素可促进体内其他组织合成和分泌孕激素。另一方面，雌激素和孕激素血液水平升高，其对垂体反馈抑制增强，导致垂体分泌FSH和LH减少，所以Ts+OVX组的FSH和LH比OVX组明显降低。

本结果说明山茶籽所含的植物性雌激素在体内的双向调节作用。因为Ts+sham组的大鼠体内雌激素并不缺乏，植物性雌激素进入体内没有转化为有活性体内雌激素，对下丘脑-垂体-卵巢调节轴影响不明显。因为这种药理作用，植物性雌激素在临床上应用会大大减少雌激素的副作用。人们有理由期待山茶籽这种榨油后的资源丰富且经济的茶麸所含植物性雌激素在妇女雌激素缺乏所致的疾病和保健方面发挥重要作用。

1 唐 玲，冯宝民，史丽颍，等.山茶属植物的抗骨质疏松作用〔J〕.中药材，2008;31(10):1540-4.

2 吴小娟，李 剑，刘 芸，等.重组雌激素受体基因酵母法对南山茶子抗骨质疏松活性部位的研究〔J〕.辽宁中医杂志，2008;35(7):1060-1.

3 吴小娟，林红景，唐 玲，等.山茶种子抗骨质疏松有效部位群化学成分的含量测定〔J〕.中南医学，2007;5(2):107-10.

4 刘爱军，关 铮，张卓梅，等.雌激素受体不同亚型在卵巢子宫内膜异位症在位内膜与异位内膜中的表达及其意义〔J〕.中华病理学杂志，2008;37(9):584-8.

5 Xue Q，Lin Z，Cheng YH，et al.Promoter methylation regulates estrogen receptor2 in human endometrium and endometriosis〔J〕.Biol Reprod，2007;77(4):681-7.

6 牛建昭，赵丕文，王继峰，等.补骨脂等5种中药植物雌激素活性的实验研究〔J〕.北京中医药大学学报，2008;31(10):676-81.

7 赵丕文，王大伟，王玲巧，等.用小鼠子宫增重法筛选淫羊藿等10种中药雌激素样作用的实验研究〔J〕.北京中医药大学学报，2006;29(10):686-9.

8 张兆强，刘浩宇，刘锡仪.尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨元素代谢和相关激素含量的影响〔J〕.中国应用生理学杂志，2009;25(1):129-32.