非小细胞肺癌中MMP－14和VEGF－D表达关系及对淋巴管生成的作用

王 虎 郝安林 王卫杰 (安阳市肿瘤医院胸二科，河南 安阳 455000)

淋巴管生成的影响因素对恶性肿瘤进展有重要作用〔1〕。基质金属蛋白酶(MMP)-14是MMP家族的重要成员，对细胞外基质的降解作用强，近来相关研究认为其表达与脉管生成有关〔2〕。血管内皮生长因子(VEGF)-D是经典的淋巴管内皮生长因子，可以促进肿瘤中淋巴管生成，使肿瘤细胞进入淋巴道的途径更直接〔3〕。D2-40是最特异的淋巴管内皮标志物。本实验探讨非小细胞肺癌患者MMP-14和VEGF-D对D2-40阳性的微淋巴管密度(MLVD)的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 2010年1月至2011年12月我院非小细胞肺癌手术后的标本87例作为观察组，纳入均符合WHO关于非小细胞肺癌的诊断标准，并由两位病理医师再次阅片证实。其中男性47例，女性40例，年龄55～78(平均62.3)岁，其中鳞癌41例，腺癌46例。术前均未进行放、化疗。收集距肿瘤＞5 cm的切端正常的肺组织60例作为对照组，男、女各30例，年龄56～79(平均62.1)岁。两组在一般临床特征的比较中，无明显差别，具有可比性。

1.2 MMP-14、VEGF-D和D2-40蛋白的检测方法 实验用MMP-14、VEGF-D和D2-40抗体均购自福州迈新生物技术有限公司。检测应用免疫组织化学染色采用S-P法，严格按实验步骤操作，并均由同一病理主管技师完成，严格质控。

1.3 MMP-14、VEGF-D和D2-40结果的判读标准 MMP-14和VEGF-D蛋白的阳性部位主要定位于细胞质，以细胞质中染成棕黄色的颗粒为阳性表达，按阳性细胞的百分比计算阳性率。以阳性细胞≥25%为阳性，以阳性细胞＜25%为阴性。MLVD的计数方法:先在低倍镜(100×)下观察肿瘤细胞或正常肺上皮细胞染色的最典型区，然后在高倍镜(400×)下计数，以阳性的内皮细胞簇或阳性的小脉管视作1个微淋巴管。每例计数5个高倍视野，取其平均值。

1.4 统计学处理措施 应用SAS统计软件，两组间比较采用χ2检验或t检验和线性相关分析。

2 结果

2.1 两组中MMP-14、VEGF-D和MLVD表达的比较 观察组中MMP-14和VEGF-D蛋白表达的阳性率明显高于对照组(P均＜0.0 001)，观察组中MLVD的表达量明显高于对照组(P＜0.000 1)。见表1。

2.2 观察组不同临床特征中MMP-14、VEGF-D和MLVD的表达 MMP-14、VEGF-D和MLVD与肿瘤体积、胸膜侵犯、淋巴结转移、临床分期均密切相关，见表2。

2.3 观察组中MMP-14、VEGF-D和MLVD的相关性分析MMP-14和 VEGF-D(r=0.45，P=0.032 4)、MMP-14 和 MLVD(r=0.47，P=0.023 1)、VEGF-D 和 MLVD(r=0.42，P=0.018 7)的表达均呈正相关性。

表1 两组中MMP-14、VEGF-D阳性表达和MLVD水平的比较

表2 观察组中MMP-14、VEGF-D阳性表达和MLVD在不同临床病理特征中的比较

3 讨论

非小细胞肺癌的转移方式以淋巴道转移最常见，也是预后不良的重要指标。D2-40最初是从胎儿睾丸的生殖细胞中提取和分离出来的唾液酸糖蛋白，比VEGFR3和Podoplanin等抗体对新生淋巴管的选择性强〔4〕。VEGF-D被认为是淋巴管生成的促进因子，与VEGF-C有较多的同源性，对淋巴管生成作用明显，同时其高表达时可能提示肿瘤患者的预后不良〔5〕。当MMP-14发挥作用时能够在细胞的表面对家族的其他成员，如MMP-2等进行有效激活，激活后的MMP-2又可以引起MMP-14的分泌增多，使组织和血清中MMP-14表达明显增高，形成环式循环〔6，7〕。MMP-14大量生成后发挥对细胞外基质的降解作用。近年人们发现MMP-14在降解细胞外基质的同时，可以促进肿瘤新生脉管的增生和繁殖〔8，9〕。本实验结果提示 MMP-14、VEGF-D和D2-40均参与了肿瘤的生长、浸润和侵袭。由于以上因素均为判断肿瘤生物学行为和预后的重要指标，因此联合检测三种蛋白的表达可能为判断预后提供支持。MMP-14对淋巴管的生成作用明显，其可以直接启动激活D2-40的表达发挥淋巴管生成的作用，可能通过促进VEGF-D的表达间接发挥淋巴管生成的作用。此MMP-14是较强的淋巴管生长因子，也反映出淋巴管生成机制中的关系复杂。MMP-14与淋巴管生成有关，当MMP-14引起VEGF-D被激活后，促进肿瘤内及肿瘤周边淋巴管的新生，加速肿瘤的转移〔10〕。淋巴管的生成为肿瘤细胞进入淋巴道提供了最直接、最便捷的途径，为淋巴道转移提供了最直接条件。

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10 Taras D，Blanc JF，Rullier A，et al.Pravastatin reduces lung metastasis of rat hepatocellular carcinoma via a coordinated decrease of MMP expression and activity〔J〕.Hepatology，2007;46(1):69-76.