电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠血清白蛋白水平影响的实验研究*

樊 云 张晓明 吴 淼 陈邦国

（1.湖北中医药大学针灸骨伤学院，湖北 武汉 430061；2.湖北省中医院，湖北 武汉 430061）

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠血清白蛋白水平影响的实验研究*

樊 云1张晓明1吴 淼2陈邦国1

（1.湖北中医药大学针灸骨伤学院，湖北 武汉 430061；2.湖北省中医院，湖北 武汉 430061）

目的 观察脑缺血/再灌注后，电针百会、水沟、足三里穴对局灶性脑缺血再灌注大鼠外周血清白蛋白浓度水平的影响。方法 采用改良线栓大鼠大脑中动脉法制作局灶性脑缺血再灌注模型，运用溴甲酚氯法，观察脑缺血/再灌注后大鼠外周血清白蛋白水平变化。结果 正常对照组大鼠血清白蛋白水平稳定；与正常对照组比较，假手术组大鼠血清白蛋白水平除在缺血/再灌注24 h时间点有轻度下降外，其余时间段无明显变化，与正常对照组十分接近；模型组和电针组大鼠血清白蛋白水平在整个观察时间窗内都呈现明显下降趋势，特别是模型组大鼠血清白蛋白水平，在各个时间点与正常对照组和假手术组比较，均具有非常显著差异；电针组大鼠血清白蛋白水平与模型组比较，在各个时间点均具有显著差异；电针组大鼠血清白蛋白水平在各个时间点与正常对照组、假手术组比较，均有明显差异。结论 脑缺血再灌注后电针内源性提高实验动物鼠血清白蛋白水平的能力十分有限，不足以抵消其明显的下降趋势。

电针 脑缺血再灌注 血清白蛋白

临床研究［1-3］显示缺血性脑损伤发生后，患者血清白蛋白含量立即明显下降，而血清白蛋白水平与临床预后成负性相关。有实验研究［4］发现局灶性脑缺血后大鼠血清白蛋白浓度水平的维持能够明显改善中动脉缺血大鼠的神经功能评分。电针能激活机体多种内在的保护机制，形成内源性补充。笔者决定采用改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，电针百会、水沟、足三里穴，观察其对局灶性脑缺血再灌注大鼠血清白蛋白浓度水平的影响，试图从血清白蛋白角度去探讨电针治疗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的机制机理。

1 材料与方法

1.1 动物雄性清洁级健康SD大鼠，2～3月龄，体质量 180～220 g，合格证书编号：SCXK（鄂）2010-0007，购自华中科技大学同济医学院实验动物中心。

1.2 试剂与仪器日本东芝 （TOSHIBA）TBA-120RF型全自动血生化分析仪；HANS-200A型韩式穴位神经刺激仪 （南京济生医疗科技有限公司）；932型电热烧灼器（上海医疗电子仪器厂）；BS110S型Sartorius分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）；华佗牌针灸针（苏州医疗用品厂，32 号，0.5 寸，13 mm）；2.0～2.5 号单尼龙鱼线 （东阳市阿里郎钓具厂）；1000 mL装白蛋白检测试剂（日本第一化学药品株式会社）

1.3 模型制备实验大鼠饲养在专门动物室，室温稳定控制在20～25℃，相对湿度40%～60%，12 h明暗循环，动物食用普通饲料和自由饮水，适应性喂养1周。参照文献中 Zea longa［5］报道的线栓法，稍作改进，制备大鼠MCAO缺血再灌注模型。动物模型参考Zea longa 5级评分标准评分。0分：无任何神经缺损症状；1分：左侧前肢不能完全伸展，为轻度神经功能缺损；2分：无法直行，向前行走时身体不断向左侧转圈，为中度神经功能缺损；3分：不能站立，站立时向左侧倾倒，为重度神经功能缺损；4分：不能自发行走，意识丧失。造模失败，舍弃实验动物的标准：无明显神经功能缺损表现或Zea-longa评分低于1分；手术时出血较多、呼吸困难、症状很重不能坚持实验的动物；伤口大量出血、蛛网膜下腔出血、大脑中动脉起始部或其附近的Willis环动脉有凝血块的大鼠；未能存活到规定时间点而死亡的大鼠。死亡大鼠通过随机原则补齐动物数并重新造模。

1.4 动物分组84只SD大鼠按照数字表随机分为4组，分别为正常对照组12只（不予处理，正常饲养）；假手术组12只 （仅分离颈总动脉及颈内动脉至翼腭动脉，不插线栓）；模型组30只（改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，按照缺血/再灌注24、48、72 h又分为3个亚组，每亚组10只）；电针组30只（改良线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型，按照缺血/再灌注24、48、72 h又分为3个亚组，每亚组10只，加电针治疗）。

1.5 电针治疗电针组大鼠穿自制鼠衣固定，使用HANS-200A型韩式穴位神经剌激仪，采用疏密波（频率2 Hz/15 Hz），电流强度约1 mA，以引起局部肌肉稍稍颤动为度，刺激百会、水沟及足三里穴，每次持续刺激30 min，缺血再灌注2 h后行第1次电针刺激，每隔12小时再电针刺激1次。取穴标准及针刺深度根据新世纪全国高等中医药院校规划教材《实验针灸学》大鼠针灸穴位定位方法及拟人比照法定位［6］，百会取穴在顶骨正中，平刺2 mm；水沟取穴在唇裂正中、鼻尖下1 mm处，向上斜刺2 mm；足三里取穴在后肢膝关节外下方当腓骨小头下约5 mm处，直刺7 mm。假手术组和模型组大鼠不做针刺治疗，但以同样的方式抓取和固定。正常对照组不做任何处理。

1.6 标本采集与检测在不同时间点 （缺血/再灌注24、48、72 h），剪去大鼠眼眶周围较长的毛，眼眶及周围用碘伏消毒后，摘除眼球，直接眶动静脉取血。将用肝素钠处理过的毛细玻璃试管管口置于大鼠动静脉血滴出的正下方2～3 cm处并倾斜45°，接住流出的新鲜血液1～2 mL。把装有血液标本的试管放入离心机中以4000 r/min转速离心10 min，小心取出试管后，将位于试管上层的血清用吸管慢慢吸出，装入ependorf管中密封，保存在-20℃冰箱中。以溴甲酚氯法检测血清白蛋白。

1.7 统计学处理应用SPSS13.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组内比较采用t检验，组间比较采用One-Way ANOVA分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

见表1。结果示正常对照组大鼠血清白蛋白水平稳定。与正常对照组比较，假手术组大鼠血清白蛋白水平除在I/R 24 h时间点有轻度下降（P＞0.05）外，其余时间段无明显变化，与正常对照组十分接近，考虑可能是轻度应激反应所致。模型组和电针组大鼠血清白蛋白水平在整个观察时间窗内都呈现明显下降趋势，可能表明体内白蛋白分解消耗或合成障碍明显。特别是模型组大鼠血清白蛋白水平，在各个时间点与正常对照组和假手术组比较，均有明显差异（P＜0.01）。电针组大鼠血清白蛋白水平与模型组比较，在各个时间点差异均具有统计学意义（P＜0.05），表明电针可以一定程度内源性提高缺血再灌注后实验动物血清白蛋白水平。电针组大鼠血清白蛋白水平在各个时间点与正常对照组、假手术组比较，均有明显差异（P＜0.05），表示电针内源性提高缺血再灌注后实验动物血清白蛋白水平作用十分有限，不足以抵消其明显的下降趋势。由于受到本实验设定观察时间窗的限制，缺血再灌注后更长时间内实验大鼠血清白蛋白水平变化的情况未能监测。

3 讨 论

表1 各组大鼠外周血白蛋白水平比较（g/L，±s）

表1 各组大鼠外周血白蛋白水平比较（g/L，±s）

与模型组同时间段比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与正常对照组比较，▲P＜0.01。

组 别 n I/R 72 h I/R 24 h I/R 48 h正常对照组 4 23.06±0.28假手术组 4 22.45±0.42模型组 10 13.00±0.75▲23.00±0.13 23.14±0.34 21.85±0.31 22.33±0.26 18.62±0.52▲ 16.00±0.17▲电针组 10 17.40±0.12△△▲20.00±0.16△▲ 18.90±0.83△△▲

脑血管病（特别是急性脑血管病）发生后，必然引起炎症反应。导致低白蛋白血症［7］。 文献［8］报道，白蛋白＜40 g/L的患者血清白介素-6浓度显著高于白蛋＞40 g/L的患者。另外，脑血管病（特别是急性脑血管病）的发生作为机体的重大应激，也对血清白蛋白水平下降起到了巨大的作用［9］。应激所引起的神经内分泌反应导致交感神经兴奋，使得机体代谢率增高，增强了对糖异生和脂肪酸代谢供能的依赖性。缺血性脑卒中患者血清白蛋白降低的原因还可能与肾微小血管慢性病理变化导致的隐匿性蛋白尿和微小蛋白尿有关［10］。

在缺血性脑卒中实际治疗中，临床医师习惯性大剂量补充外源性白蛋白。但要注意的是，输入大量外源性白蛋白，不仅会有进一步加重脑组织水肿的风险［11］，还增加了脑代谢负荷［12］。 近年有文献报道［13］即便使用常规剂量白蛋白也可有效减轻脑血肿周围的水肿，促进中枢神经功能的恢复，这很值得关注。也有证据表明［14］，在急性缺血性脑卒中临床处置中作为液体治疗，HAS和晶体盐溶液相比并无明显益处。

有学者［15］发现中医虚证的发生可能与血清白蛋白降低有关。还有学者［16］研究认为血清白蛋白降低可能相当于中医的血虚、肝阴不足，或者广义正气虚。而血虚、肝阴不足或正气虚都是缺血性脑卒中的重要发病原因。

综上所述，虽然本实验的结果显示，脑缺血再灌注后电针内源性提高机体血清白蛋白水平的能力十分有限，但是，电针是否能与中医药的其他疗法配合使用，努力提高脑缺血再灌注后血清白蛋白水平以达到一定的治疗作用。以上问题有待进一步深入研究。

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chemia-reperfusion

FAN Yun1，ZHANG Xiao-ming1，WU Miao2，et al. 1 Acupuncture and Bone Injury College，Hubei University of Chinese Medicine，Hubei，Wuhan 430061，China；2 Hubei Provincial Hopsital of TCM，Hubei，Wuhan 430061，China

Objective：To observe the change of serum albumin level in MCAO rat′s bloods by electro-acupuncture the points including Baihui（DU20），Shuigou（DU26），Zusanli（ST36） after cerebral ischemia/reperfusion（I/R）.Methods:The MCAO rat′s model was modified suture the brain artery.These changes were determined in serum albumin through BCG by Electro-acupuncture the pionts.Results：The level of serum albumin of normal control group were stability.Compared with the normal control group，the level of serum albumin of sham group rat was almost unchanged except the slight decrease in I/R24 h which was no significant difference.The level of serum albumin of model group and EA group showed a clear downward trend with particularly significant difference，in particular the model group compared with normal control group and sham group during the entire observation period.The level of serum albumin of EA group rat compared with model group showed remarakble differences.But the level of serum albumin of of EA group rat compared with normal control group and sham-operation group showed no differences.Conclusion：It is limited and insufficient to offset the declining trend that cerebral ischemia reperfusion and electro-acupuncture of endogenous improve the ability of serum albumin level of animal experiment.

Electro-acupuncture；Cerebral ischemia/reperfusion；Serum albumin

R245.9+7

A

1004-745X（2013）06-0872-03

教育部高等学校博士学科点专项科研基金（200805070002）

Experiment on Effects of Electroacupuncture on Serum Albumin Level in Rats with Focal Cerebral Is-

2013-03-01）