正交设计优选芪归通络口服液纯化工艺

★ 范宋玲 熊带水 张建军 麦炳明（广东省第二中医院 广州 510095）

芪归通络口服液为我院神经内科临床经验方，由黄芪、当归、三七等八味药物组成，具有益气养血，活血化瘀通络之功，主治中风病气虚血瘀证，临床疗效确切。为进一步提高本品的澄清度和稳定性，使其质量更稳定，疗效更可靠，本文采用正交试验对其水提液醇沉工艺参数进行了优选，为批量生产提供科学合理的纯化工艺。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（Agillent1100）二级管阵列检测器；电子分析天平（Sartorius德国）恒温水浴锅（HWS26）；甲醇为色谱纯；重蒸水；其他试剂均为分析纯；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736-200630）；黄芪等8味中药饮片：由广东省第二中医院提供，由张诚光主任中药师鉴定为药典及地方标准里收载的正品。

2 方法与结果

2.1 因素水平

中药复方提取液中常含有大量的糖类、无机盐、黏液质等成分，这些成分对制剂的稳定性影响较大，因此，对提取液进行除杂处理是必须的。影响醇沉除杂工艺的主要因素包括药液浓缩比、乙醇浓度、搅拌速度、pH值、醇沉温度等因素。本实验选取乙醇浓度、药液浓缩比、醇沉pH值为考察因素，采用L8（4×24）正交表安排实验，因素水平表见表1。

表1 因素水平表

2.2 固形物的收率测定

取各正交试验号浓缩液20mL，加乙醇至含醇量为80%，静置过夜，取上清液于干燥蒸发皿中水浴蒸干，105℃烘箱干燥至恒重，取出，干燥器中放冷，精密称重，即得。

2.3 含量测定

参照高效液相色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥD）测定。

2.3.1 色谱条件 色谱柱：phenomenex C18柱（4.6×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（34.5：65.5）；检测波长：230nm；流速：1mL/分；柱温：30℃。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品21.36mg置50mL容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，精密吸取5.0mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1mL含芍药苷85.44μg）。

2.3.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品溶液5mL，加于聚酰胺柱（30-60目，3g）上，用水洗脱，准确收集洗脱液50mL，摇匀，精密吸取10mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

2.3.4 阴性样品溶液的制备 为了考察芍药苷含量测定有无干扰，需制备阴性样品。称取除赤芍外的药材加9倍量水，煎煮2次，80分钟/次，药液滤过，合并滤液，浓缩并定容至250mL，取5mL浓缩液，自供试品溶液的制备项下“取样品溶液5mL”起同法操作，制得阴性样品溶液。

2.3.5 标准曲线的绘制 精密量取芍药苷对照品溶液1，2，4，8，12，16μL进样，记录色谱图，测定其峰面积，回归方程：Y=1134.23X+13.94，r=0.9999。结果表明：在0.085-1.367μg范围内，芍药苷峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.3.6 阴性干扰的判断 吸取上述对照品、供试品及阴性对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果显示，阴性对照图谱与对照品、供试品图谱中芍药苷相应的保留时间无其他峰干扰，表明选择性良好，阴性无干扰。

2.3.7 样品含量测定 精密吸取各正交实验供试品溶液各10μL进样，记录色谱图，根据供试品吸收度积分值与对照品积分值，外标两点法计算即得。

2.4 正交试验安排及结果

按处方比例称取处方量的黄芪、赤芍等药材按提取工艺提取，提取完成后，滤过，合并滤液，分成8份，按正交试验设计的方法进行纯化，滤过，滤液减压浓缩，定容至250mL，备用，分别测定固形物的收率和芍药苷转移率。以芍药苷的转移率为考察指标之一（转移率越高越好），权重系数定为0.6；作为除杂效果的直接表征，以总固形物收率为指标（收率越低越好），权重系数定为0.4，进行综合评分。

对评分结果作直观分析和方差分析，以判断各因素对纯化效果的影响程度，筛选出在该试验条件下最优的纯化条件，试验安排及结果见表2，方差分析结果见表3。

表2 试验安排及结果

表3 方差分析结果

结果分析：由直观分析可知，影响醇沉效果的因素顺序为：乙醇浓度（A）＞药液浓缩比（B）＞药液pH值（C），由此得出的最佳工艺组合为A4B1C2。经过方差分析，三个因素对醇沉结果均具有显著性影响。综合考虑到缩短生产周期，降低生产成本等综合因素，选择醇浓度70%，药液浓缩比为1：1，醇沉pH值为4.5作为本工艺的醇沉浓度。

2.5 验证试验

为确定该工艺的优劣和稳定性，据所筛选的条件，既醇浓度70%，药液浓缩比为1：1，醇沉pH值为4.5，验证3批，结果芍药苷平均转移率为78.76%，80%醇浸出物平均为26.86%，验证试验结果与正交试验优选结果吻合，说明正交试验选出的工艺条件合理，工艺条件稳定可行。

3 讨论

3.1 在运用各种除杂技术使药液达到澄清的同时应保证成品质量的有效性。本文以固形物收率、芍药苷保留率作为工艺筛选的考察指标，采用水提醇沉法对本品进行纯化。纯化后大大增加制剂的稳定性，同时减小制剂的服用量，克服传统中成药“粗、大、黑”的缺点。经中试放大表明，本试验纯化条件易于控制，稳定性好，适于工业化生产。

3.2 中药口服液的澄明度受pH值影响显著，药液碱性较强，生物碱易析出；酸性较强时，则部分皂苷易沉淀析出，它们各自有最适pH值。另外由于口服液制剂需高温灭菌，高温灭菌前后PH值易发生变化，造成灭菌前澄清的口服液，在灭菌后澄明度发生改变，沉淀重新析出。控制好口服液的PH值，对提高制剂的澄明度和稳定性，确保制剂疗效具有重要意义。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2]郑琴，徐德生，冯怡.改善中药口服液澄明度的思路[J].中成药，2006，28（10）：1 502.