分光光度法评价氧化铝对白花檵木浸膏脱色效果的研究*

★ 管 成 董德刚 王曼莹* 裘 梁 乔贝贝（江西中医学院生物技术研发中心 南昌 330006）

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白花檵木（Loropetalum chinense Oliv.）为金缕梅科（Hamamelidaeeae）檵木属（Loropetalv R.Br.）植物，分布在我国中部、南部、西南等各省，是一种常见的灌木。近些年来，白花檵木的药用价值愈来愈受到重视。其根、叶、花、果均可入药，具有清热解毒、通经活络，止咳，消炎，镇痛，止血等功能；可用于治疗咳嗽，咯血，痢疾，紫斑病，烧伤，子宫出血，外伤出血等病症[1]。本实验选取白花檵木叶作为研究对象，黄酮为其主要有效成分[2]。本文采取超声提取法对总黄酮进行提取，以比色法测定含量。以总黄酮脱色前后的含量为指标，分析活性氧化铝对檵木浸膏进行脱色后其有效成分的回收率，为白花檵木有效成分提取提供高质量高纯度的原料。

2 实验部分

2.1 仪器和试剂

分析天平（北京赛多利斯天平有限公司），离心机（飞鸽牌系列离心机TGL-16G），UV1102紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司），超声波清洗器（上海天美科学仪器有限公司），六两装高速万能粉碎机（浙江屹立工贸有限公司220V，1500W）；芦丁标样（上海市松江区生工生物公司），亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、石油醚、95%无水乙醇、正丁醇、乙酸乙酯均为国产分析纯，氧化铝（上海市松江区生工生物公司），活性炭（上海市松江区生工生物公司），白花檵木购于江西省宜黄县。

2.2 白花檵木浸膏的制备

将清洗干净的白花檵木嫩叶用粉碎机碾磨成粉末状，再用乙醇索氏回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，55℃真空干燥，将白花檵木叶浸膏制备成2g/1mL的水悬浮液。

2.3 总黄酮的测定

2.3.1 标准样品的制备 精密称取120℃干燥至恒重的芦丁25mg，60%乙醇热溶解后冷却并定容至50mL，得到浓度为0.5mg/mL的芦丁标准液备用。

2.3.2 测定波长的选择 精密量取1mL芦丁标准液加1mL5%亚硝酸钠摇匀后放置6分钟左右，加1mL10%硝酸铝摇匀后放置6分钟左右，加5mL1.5mol/L氢氧化钠放置10分钟，再加60%乙醇定容至10mL摇匀，显色10分钟后，进行200-600nm扫描，在467nm处有最大吸收，故选择467nm为测定波长。

2.3.3 标准曲线的制作 精密量取芦丁标准液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，参照波长测定中的显色程序操作，测定各显色液在最大吸收波长下的吸光度值，以各显色液的吸光度为纵坐标，对应的芦丁浓度为横坐标，计算芦丁浓度-吸光度直线回归方程。

2.4 白花檵木浸膏的脱色

2.4.1 定性研究 用氧化铝对檵木浸膏脱色做定性研究，观察氧化铝对檵木浸膏脱色效果。取10mL檵木浸膏水悬浮液置于烧杯中添加5g活性氧化铝，震荡吸附约5分钟后，抽滤获得滤液，与原液进行比较，观察其对浸膏脱色效果。

2.4.2 脱色试验的优化 各取15mL檵木浸膏水悬浮液于A、B、C 3个烧杯中，分别加入10、15、20 g氧化铝于檵木原液中，搅拌静置一段时间，抽滤观察其脱色效果。

2.4.3 脱色前后总黄酮的测定 取檵木浸膏20mL加入20g氧化铝，脱色一段时间后抽滤得滤液。各取脱色前后的檵木浸膏液1mL于离心机中离心。取脱色后并经离心的檵木浸膏液100μL，加入900μL蒸馏水（即将檵木浸膏液稀释10倍）；取离心的檵木浸膏原液100μL，加入900μL蒸馏水（即将檵木浸膏原液稀释10倍），按照芦丁标准曲线制作的显色程序各取3份进行平行测定，最大吸收波长处测定其吸光度，代入标准曲线方程计算出脱色前后檵木浸膏中总黄酮的含量，计算出总黄酮的回收率R。

其中W1为脱色后溶液所含总黄酮的质量，W2为脱色前溶液所含总黄酮的质量。

3 结果

3.1 标准曲线制备

以吸光值（Y）与浓度（X）绘制标准曲线，回归方程为Y=0.3762X+0.0142，r=0.9993，说明芦丁在此浓度范围内呈现良好的线性关系。

3.2 白花檵木浸膏脱色

定性研究表明，氧化铝对檵木浸膏脱色效果明显；当加入15 g氧化铝时，即物料比为1：1时，脱色效果较为明显，继续加入氧化铝，颜色并没有太大改变。故选用1：1的物料比对檵木浸膏进行脱色。

3.3 脱色前后总黄酮的测定

脱色前后檵木浸膏溶液测定吸光值，均值分别为0.923和0.514。由标准曲线计算脱色前原液总黄酮含量W2为24.16 mg/mL，脱色后的总黄酮含量W1为13.29mg/mL，总黄酮的回收率R为55.01%。在脱色过程中，总黄酮并没有大量流失，氧化铝可作为白花檵木浸膏的脱色剂。

4 结论

在进行檵木浸膏的脱色过程中，曾用活性炭和氧化铝两种脱色剂进行对比。虽然用活性炭脱色后颜色也变得较浅，但是由于活性炭本身就是黑色的细小颗粒，在脱去檵木浸膏色素的同时又加入了自身的颜色，掺入了新的杂质。故综合分析后，决定采用氧化铝作为檵木浸膏的脱色剂。

为定量分析活性氧化铝对浸膏脱色效果，本文通过分光光度法比较脱色前后的总黄酮含量来评价。实验表明，总黄酮的回收率为55.01%，在脱色过程中，总黄酮并没有大量流失。本实验为使用氧化铝法对中药浸膏脱色提供了相关数据，在今后的实验中可重点研究如何提高总黄酮的回收率。

[1]中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则[M].北京：中国医药科技出版社，2002：139-143.

[2]魏希颖，何悦，蒋立锋，等.泡桐花体外抑菌作用及黄酮含量的测定[J].天然产物研究与开发，2OO6，（18）：401-404.