精制狗皮膏药皮肤过敏试验研究

王 震

(咸宁市中医医院，湖北 咸宁 437100)

中国狗皮膏药有着悠久的历史，是中医药重要组成部分，外治法之一，其功用很多，可以舒筋、活血、散寒、止痛。用于筋骨痛、急性挫伤、扭伤、风湿痛、关节痛、胁痛及肌肉疼痛等症，并且使用方便、卫生、快捷。然而当前膏药迅猛发展，其种类及生产厂家日渐增多，为了保证临床使用的安全性，检测是否有致敏作用成为评价精制狗皮膏安全性的重要内容。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 实验动物

豚鼠30 只，白色，雌雄各半，体重250～300g，由武汉市新洲区金耀动物养殖厂提供，许可证号:SCXK(鄂)2004-0006。

1.1.2 饲养管理

实验为盒养，5 只为1 盒;基础饲料为实验豚鼠全价颗粒饲料，由湖北省实验动物研究中心全价营养颗粒饲料加工厂提供，饮用水为自来水，实验室温度为21～28℃，湿度为55%～85%。光照12h 的明暗周期。实验动物使用许可证号SYXK(鄂)2004-0024。

1.1.3 受试药物及制备

精制狗皮膏。性状:淡黄色片状橡胶膏;规格:9cm×11cm/片，每片中含生药1.49 克，批号:20040401，湖北省黄石卫生材料药业有限公司生产;试验前制成4.5cm×2.2cm。

1.1.4 阳性致敏物和激发物

1% 2、4-二硝基氯苯(由1g 2、4-二硝基氯苯加100ml 无水乙醇制成)，0.1% 2、4-二硝基氯苯(0.1g 2、4-二硝基氯苯加100ml 无水乙醇制成)。

1.1.5 空白对照物

空白橡胶膏，制备同供试药物，湖北省黄石卫生材料药业有限公司提供。

1.2 方法

将豚鼠按体质量、性别随机分为3组:受试药物组、空白对照组、阳性对照组，每组10 只。

1.2.1 致敏接触

豚鼠在给药前24h，背部右侧脱毛，面积为3.5cm×5cm。受试药物组粘贴精制狗皮膏(4.5cm×2.2cm)，阳性对照组涂擦1% 2、4-二硝基氯苯0.1ml/只，空白对照组粘贴空白橡胶膏(4.5cm×2.2cm)。涂药后上盖二层医用纱布加一层塑料纸，用医用胶带固定包扎。6h 后拆去固定胶带、塑料纸与医用纱布，用温水洗净擦干。在第7d、第14 d 以同样的方法各重复1次，共计3次。

1.2.2 激发接触

于末次给受试物致敏后第13d 将豚鼠背部左侧脱毛，面积为3.5cm×5cm，次日按组别不同分别进行激发接触，即受试药物组(4.5cm×2.2cm)、阳性对照组(0.1% 2、4-二硝基氯苯0.1ml/只)、空白对照组(空白橡胶膏4.5cm×2.2cm)。给药方法同致敏接触，擦干后立即观察，然后于24、48、72h 观察皮肤过敏反应情况，记录各时间过敏反应的分值及致敏率。

1.3 评价标准

皮肤过敏反应程度的评分标准。红斑形成:无红斑0分;轻度红斑，勉强可见1分;中度红斑，明显可见2分;重度红斑3分，紫红色红斑并有焦痂形成4分。水肿形成:无水肿0分;轻度水肿，勉强可见1分;中度水肿，明显可见(边缘高出周围皮肤)2分;重度水肿，皮肤隆起1mm，轮廓清楚3分;严重水肿，皮肤隆起1mm 以上并有扩大或有水疱或破裂4分;总积分8分。反应平均值=(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计动物数。

皮肤致敏性评价标准:致敏率0%～10%为无致敏性，11%～30%为轻度致敏性，31%～60%为中度致敏性，61%～80% 为高度致敏性，81%～100%为极度致敏性;致敏率=出现水肿或红斑的动物例数/供试动物总数。

2 结 果

所有试验豚鼠(30 只)均无哮喘、站立不稳或休克等严重的全身性过敏反应;全部豚鼠在试验区期间无不良反应，一般情况良好，体重增加，见表1。

受试药物组在0h 观察发现皮肤均有中度红斑，明显可见，反应平均值为2.1，致敏率为100%;在24h 观察皮肤6 只有轻度红斑，勉强可见，反应平均值为0.6，致敏率为60%;48h 观察只有2 只豚鼠有轻度红斑，反应平均值为0.2，致敏率为20%，程度比24h 有所减轻;72h 反应平均值为0，致敏率为0，均恢复正常同，无水肿的现象。

表1 精制狗皮膏对豚鼠体重的影响(，n=10)(体重单位:g)

空白对照组在0h 观察发现皮肤5 只豚鼠有中度红斑，5 只豚鼠有轻度红斑，反应平均值为1.5，致敏率为100%;在24h 观察皮肤4 只有轻度红斑，勉强可见，反应平均值为0.4，程度比0h 有所减轻，致敏率为40%;48h 观察只有1 只豚鼠有勉强可见轻度红斑，反应平均值为0.1，致敏率为10%;72h 反应平均值为0，致敏率为0，均恢复正常，见表2、3。

表2 对豚鼠皮肤的激发试验各时段反应平均值(n=10)

阳性对照组在0h 观察到有明显皮肤过敏反应，10 只豚鼠均出现程度不同红斑，9 只豚鼠出现程度不同水肿，反应平均值为3.9，反应程度比受试药物组明显，致敏率为100%;24h10 只豚鼠均有红斑，9 只豚鼠出现程度不同水肿，反应平均值为3.6，致敏率为100%;48h 有5 只焦痂，其余5只有程度不同的红斑，1 只豚鼠有轻度水肿，勉强可见，反应平均值为3.1，致敏率为100%;72h 有3 只焦痂，5 只勉强可见红斑，2 只明显可见，反应平均值为2.1，致敏率为100%，但均未发现水肿，为极度致敏性，见表2、3。

表3 精制狗膏对豚鼠皮肤各时段激发试验致敏率(n=10)

3 讨论

本品(精制狗皮膏，批号:20040401)通过豚鼠皮肤重复接触，观察机体免疫系统在皮肤上的反应。结果受试药物有即时的极度致敏性，但过敏反应程度明显轻于阳性对照，与空白对照比较基本一致;24h 过敏反应程度及致敏率明显降低;48h 后基本恢复正常;72h 完全恢复正常。未见水肿及全身性过敏反应体重增加，表明本品对局部皮肤有一过性过敏反应。