维生素D对人脂肪细胞脂联素、瘦素表达的影响

于海芳高 捷*

（1 河北联合大学2010级研究生，河北 唐山 063000；2 河北联合大学附属医院儿科，河北 唐山 063000)

维生素D对人脂肪细胞脂联素、瘦素表达的影响

于海芳1高 捷*2

（1 河北联合大学2010级研究生，河北 唐山 063000；2 河北联合大学附属医院儿科，河北 唐山 063000)

目的研究1，25二羟维生素D对人脂肪细胞脂联素、瘦素表达的影响。方法原代分离培养人大网膜前脂肪细胞：前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞：应用免疫组化法检测脂联素、瘦素的表达。结果成功培养人前脂肪细胞并诱导人前脂肪细胞分化为脂肪细胞。分化组脂联素及瘦素表达水平高于未分化组，而1，25二羟维生素D对脂肪细胞脂联素及瘦素表达水平均具有影响，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论1，25二羟维生素D对人脂肪细胞脂联素、瘦素的表达有抑制作用。

维生素D；脂联素；脂肪细胞；瘦素

近年来，随着生活水平的提高，儿童肥胖患儿逐年增多，肥胖是指由脂肪细胞的数目增多和体积增大引起。脂肪细胞不仅是脂质贮存库，它还是一个分泌器官，可以分泌多种激素类物质如瘦素、脂联素和抵抗素等[1]。维生素D是一组具有生物活性的脂溶性类固醇衍生物，它可以调节体内钙、磷代谢，近年来研究表明，它还可以影响多个器官的功能，如神经、内分泌、免疫、生殖、上皮及毛发生长等。维生素D与肥胖及脂肪细胞的关系目前说法不一。

1 材料与方法

1.1 材料

胰酶（中科院血研所）；DMEM（中科院血研所（Gibco））；二甲基亚砜（DMSO）；胎牛血清及牛血清白蛋白（中科院血研所）；维生素D3（上海基星（Solarbio））；地塞米松（上海基星（Solarbio））；胰岛素（上海基星（Becton））；转铁蛋白（上海基星（Solarbio））；异丙醇（上海基星（Solarbio））；油红O（上海基星（Solarbio））。

1.2 方法

1.2.1 人大网膜前脂肪细胞的原代培养

组织取材于产科剖腹产孕妇，要求无任何疾病及服药史。①超净台内取新鲜切除的大网膜脂肪组织；②充分剪碎脂肪组织；③加入0.2%的I型胶原酶，振荡；④加入DMEM，吹打混匀后筛网过滤；⑤离心10min；⑥加入完全DMEM吹打混匀，分瓶于CO2培养箱中培养。取增殖分化的第四代细胞进行实验。

1.2.2 大网膜脂肪细胞形态观察

①制作细胞爬片[2]；②多聚甲醛固定细胞爬片；③HE染色，然后镜下观察；④油红O染色，封片，立即拍照。⑤显微镜下观察细胞形态学改变包括细胞内脂滴产生情况。

1.2.3 脂联素、瘦素的表达

①制作细胞爬片置于培养箱中；②按照实验设计分组：未分化组、诱导分化组、分化+10-4维生素D3组、分化+10-6维生素D3组、分化+10-8维生素D3组、分化+10-10维生素D3；③诱导分化后多聚甲醛固定细胞爬片；④0.1% TritonX-100孵育15min；⑤3%过氧化氢孵育15min；⑥滴加脂联素、瘦素一抗（稀释浓度为1∶100）；⑦滴加二抗，37℃孵育20min；⑧苏木素复染，酒精脱水，树胶封片，镜下观察；⑨每张细胞爬片随机选取5个200倍的显微镜视野。

2 结 果

2.1 维生素D3对人大网膜脂肪细胞分化过程的抑制作用

对分化过程细胞行油红O染色，在显微镜下观察，观察正在分化细胞脂滴的变化。脂肪细胞在分化过程中，成熟脂肪细胞的形态由梭形或三角形变成椭圆形，其内充满脂滴。第7d的细胞，脂滴被油红O着色而呈红色，细胞质不着色，维生素D3是以剂量依赖的方式抑制人脂肪细胞脂联素、瘦素的表达。

2.2 不同浓度维生素D对脂肪细胞脂联素表达的影响

见表1。

2.3 不同浓度维生素D对脂肪细胞瘦素表达的影响

见表2。

3 讨 论

瘦素是与体质密切相关的一种激素，下丘脑的瘦素受体与瘦素相结合，通过激活Janus酪氨酸蛋白激酶进行信号转导，从而影响多种神经内分泌激素分泌，进而引起食欲降低及机体能量消耗增加，减轻体质量。瘦素还有一种功能，就是增加交感神经活性，使外周血液去甲肾上腺素的增加，激活脂肪细胞膜上的肾上腺素能的特异性受体，从而达到增加能量消耗，降低体质量的目的。脂联素是近年来才发现的一种脂肪细胞因子，可以特异性表达在脂肪细胞中，具有使葡萄糖摄取量提高、脂肪酸氧化能力增加、抗动脉粥样硬化以及抗炎等作用[3]。瘦素主要是由脂肪细胞分泌的一种重要激素[4]。1，25-二羟维生素D是维生素D的活性的代谢产物。既往有研究报道：活性维生素D可以调控猪或鼠脂肪细胞的分化[5]。本研究结果显示脂联素主要表达在人脂肪细胞胞浆内。分化组脂肪细胞脂联素表达水平明显高于未分化组，而10-4维生素D3、10-6维生素D3、10-8维生素D3、10-10维生素D3对分化的脂肪细胞脂联素表达水平具均有抑制作用。瘦素的表达主要在细胞浆内，10-4维生素D3、10-6维生素D3、10-8维生素D3、10-10维生素D3对分化的脂肪细胞瘦素表达水平均具有抑制作用。基于以上研究在临床上我们可以给予肥胖儿童安全量的维生素D，从而有望控制肥胖儿童体质量并改善儿童脂代谢水平。

表1 不同浓度维生素D对脂肪细胞脂联素表达的影响

表2 不同浓度维生素D对脂肪细胞瘦素表达的影响

[1] Elabd C,Chiellini C,Carmona M,et al.Human multipotent adiposederived stem cells differentiate into functional brown adipocytes [J].Stem Cells,2009,27(11):2753-2760.

[2] 徐洪,宋旭东,李莹,等.贴壁细胞在载玻片上爬片的新方法[J].中国应用生理学杂志,2009,25(2):283-285.

[3] Ozturk ZG,Ekmekci H,Ekmekci OB,et al.Nontraditional risk factors in carotid artery disease[J].Clin Appl Thromb Hemost, 2010,16(5):554-558.

[4] 巫国辉,赵锋,袁铿,等.瘦素对脂肪细胞的直接调节作用[J].中国美容医学,2007,16(10):1346-1349.

[5] Lenders CM,Feldman HA,Von Scheven E,et al.Relation of body fat indexes to vitamin D status and deficiency among obese adolescents[J].Am J Clin Nutr,2009,90(3):459.

R589.2

B

1671-8194（2013）11-0072-02

*通讯作者