漆 萍,钟方才,万小涛,邓文英,吴垚林
(1.内江市中心血站;2.内江第一人民医院,四川 内江 641000)
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丙氨酸氨基转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)是临床评价肝功能的常用指标[1],卫生部将ALT 作为采供血机构筛查献血者必检项目之一[2]。但是ALT 是非特异性的指标,在饮酒、运动、药物以及标本溶血等情况下也会使ALT 升高[3-5]。据文献[6-9]报道ALT 检测的预期效果低,许多假阳性导致正常血液被处理,对于血液资源是较严重的浪费。核酸扩增技术(nucleic acid amplification techniques,NAT)主要是直接检测病毒DNA 或RNA,具有较高的灵敏度和特异性。本文研究探讨ALT 作为血液质量判断指标的价值,以及利用NAT 检测其是否携带病毒,评价NAT 的筛选价值。
选择2012 年7 月至8 月通过体格检查与血液HBsAg(金标法)初筛合格的无偿献血者标本3 675份,选出ALT >40 U/L 的标本397 份。
日本日立7600 全自动生化分析仪;瑞士Mcrolab STAR 全自动加样系统;瑞士ML-FAME2420 全自动酶免操作系统;达安DA-7600PCR 扩增仪。HBsAg 初筛采用HBsAg 金标法(艾康生物技术有限公司,批号201112196/3.3),复检标本ALT 检测使用速率法(四川迈克,批号0912151)。HBsAg、抗-HCV 均采用酶免法: HBsAg (厦门新创,批号2012085119;Murex,批号D107810);抗-HCV(北京万泰,批号C20120712; Murex,批号V907120)。HBV-DNA(达安基因有限公司,批号2012016)、HCV-RNA(达安基因有限公司,批号2012005)。所有的试剂均有批检,并在有效期内使用。
在采集献血者的血液时同时留取ELISA 检测管和核酸检测管。将对经过初筛合格且使用速率法检测ALT >40 U/L 的397 份标本使用上述两种不同厂家的试剂检测HBsAg、抗-HCV,其方法按照试剂盒说明书进行。同时对397 份标本采用NAT 进行HBV-DNA 和HCV-RNA 的检测,按照操作说明书进行。每次检测均设置阴、阳性对照,严格按试剂说明书的要求判定结果。
3 675 份无偿献血者标本中筛选出397 份ALT>40 U/L,其血液的不合格率为10.80%。在397份ALT 升高的献血者标本中,有389 份(97.99%)标本的HBsAg 和抗-HCV 定性均为阴性,HBV-DNA和HCV-RNA 定量均<1.0 ×103IU/mL;有3 份标本HBsAg 定性为阳性,HBV-DNA 定量呈现高拷贝数;有4 份标本抗-HCV 定性为阳性,HCV-RNA 定量呈现高拷贝数;有1 份标本的HBV-DNA 定量呈现高拷贝数,但是HBsAg 和抗-HCV 定性均为阴性。其具体结果,见表1。
表1 8 份NAT 阳性标本的结果
ALT 主要存在于肝脏组织中,其次为肾脏、心等。ALT 是肝脏损伤的敏感指标,尤其是病毒性肝炎的重要标志。但是饮食不规律、抽烟嗜酒等都可能导致ALT 升高,Morisco 等[10]研究报道在没有病毒携带的人导致ALT 升高的主要原因是身体质量指数的超标。且有文献[3]报道在所有献血者血液报废的原因分析中ALT 不合格是血液报废的首要原因。本研究中3 675 份无偿献血者标本筛选出397 份ALT >40 U/L,其血液的不合格率为10.80%。与文献[11]报道的ALT 报废率为1.99%相比,本研究中的比例要高很多。因此我们更应对ALT 作为血液质量判断指标的价值进行评价。
ELISA 方法的试剂灵敏度偏低且检测献血者的HBsAg 或抗-HCV 受被检者是否处于感染窗口期及感染后抗原或抗体滴度的影响。据文献[12]报道HBV 血清转换前窗口期与隐匿性HBV 感染献血者是导致HBsAg 筛查后输血传播感染HBV 残余风险的主要原因。NAT 主要是直接检测病毒DNA 或RNA 具有高灵敏度和高特异性。有文献[13]报道采用高灵敏度的NAT 筛查献血者血液中的HBV 和HCV,有助于提高输血及血液安全。
本文研究的是在ALT 升高的献血者中利用ELISA 检测HBsAg 和抗-HCV,利用NAT 检测HBVDNA 和HCV-RNA。其结果显示在397 份ALT 升高的献血者标本中有389 份(97.99%)标本的HBsAg和抗-HCV 定性均为阴性且定量结果HBV-DNA 和HCV-RNA 均<1.0 ×103IU/mL。可见我们研究的标本中ALT 升高大部分都不是由于感染病毒所导致。在全国血源如此紧张的情况下,如果我们将这一批血源视为不合格,这将是很大的资源浪费。本研究中的222 号标本是在HBsAg 和抗-HCV 定性均为阴性的情况下检出HBV-DNA 的拷贝数为4.34 ×107IU/mL,与文献[5]报道的采用ELISA 不能完全确保血液的安全性其观点较一致。Shang 等[14]报道他们利用NAT 技术在2 例HBsAg 定性阴性的献血者中检出HBV-DNA 定量的拷贝数分别为1.12 ×107IU/mL、2.75 ×107IU/mL,这表明用NAT 来检测献血者病毒含量有着极其重要的作用。
由于诸多因素可导致血液的ALT 升高,若将ALT 升高作为判断献血者血液质量指标,必将造成大量可用血液被报废、献血者供血期延长、血液资源进一步紧张。因此,ALT 作为判断血液质量指标的价值可信度低,实用性差,科学性不强。我们推荐使用特异性和灵敏度较高的NAT 作为献血者血液质量检测,以期更能真实的判断血液质量,保证有限的血源不被浪费。
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