CD7、CD56、CD19在AML预后及MRD监测中的意义

孔令环，韩 梅，肖中平，陈 琳

（吉林省人民医院 血液风湿科，吉林 长春130021）

利用流式细胞术（FCM）对白血病病人进行免疫分型和微小残留病检测的应用越来越广泛，其中AML伴淋系交叉表达者有独特的生物学特点。本文总结我院86例急性髓系白血病病人的临床资料，探讨伴CD7、CD56、CD19表达的AML病例的临床特点、预后以及在微小残留病（MRD）监测中的意义。

1 材料

1.1 临床资料

选择2008年1月至2012年1月初治急性髓系白血病86例，男52例，女34例，年龄10－80岁。按FAB分型，M11例，M233例，M318例，M414例，M518例，M72例。以上病例根据FAB分型、免疫学分型及遗传学分析均符合诊断。

1.2 主要试剂

抗体：购自法国Immunotech公司。20种四色荧光（PE、FITC、ECD、PE－CY5）标记的单抗如下：髓系：CD33、CD117、CD13、CD14、CD15、cMPO、CD11b；T 淋系：cCD3、CD5、CD7；B 淋系：CD10、CD19、CD20、CD23、cCD79a；NK 细胞：CD56；非特异性早期标志：CD34、HLA－DR、CD38和CD45。

2 实验方法

2.1 标本的采集

取白血病病人骨髓为标本，涂片6－8张作为形态学分析，同时采集6ml骨髓用肝素抗凝，并在2小时内进行流式细胞学数据采集；并送染色体、融合基因检测。

2.2 标本的标记

利用四色荧光（PE、FITC、ECD、PE－CY5）直接标记法标记。每个试管分别加入待测荧光标记抗体20μl、骨髓细胞悬液100μl，混匀。室温遮光孵育15min，加入溶血剂混匀，避光10min，加入PBS洗涤，以1 500rpm／min离心5分钟，弃上清，即可上机检测。

2.3 流式细胞仪分析

采用美国贝克曼库尔特公司EPICS－XL型流式细胞仪采集数据，激光波长为488nm，EXP3.2V1.2B软件程序对获得的数据进行多重设门颜色示踪法分析。免疫分型以CD45／SSC设门，收集20000个细胞检测。分析时以幼稚细胞群中抗原表达细胞大于20%作为阳性。

2.4 MRD分析

采 用 CD45CD34CD33CD7、CD45CD34CD13CD7、CD45CD34CD33CD56、CD45CD34CD13CD56、CD45CD34 CD13CD19、CD45CD34CD33CD19六种抗体组合方案进行MRD监测。正常对照及MRD检测收集500000个细胞。如果在筛选时白血病细胞出现的区域有细胞存在，以这些残存的细胞占骨髓单个核细胞总数的比例作为MRD值。多个抗体组合以数值最大者为MRD值。参考值以 MRD≥10－4为阳性，MRD＜10－4为阴性。

2.5 统计学方法

采用SPSS 17.0软件包进行χ2检验或Fisher确切概率法检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 交叉表达CD抗原在AML各亚型中的表达

见表1。

表1 86例AML患者CD抗原交叉表达情况

Ly＋－AML占 AML（非 M3）47.1%；Ly＋－AML常见表达CD56、CD7、CD19，其出现频率在 M2、M4、M5亚型中分别为48.5%、21.4%、55.6%；M3型仅1例交叉表达CD56；在非M3髓系白血病中CD7占22.1%，CD56占17.6%，CD19占7.4%；CD56在M2中表达最高占21.2%，CD7在M5中表达最高占33.3%；CD19在各亚型中表达均低。

3.2 交叉免疫表型与治疗效果的关系

68例非M3髓系白血病首次化疗形态学完全缓解率为76.5%（52／68），首次化疗未达CR者16例，其中14例有交叉免疫标记，其中6例伴CD56阳性、6例伴CD7阳性、2例CD19阳性。首次化疗形态学CR率Ly＋－AML 56.3%（18／32）低于Ly－－AML 88.9%（32／36），差异有统计学意义（P＜0.05）。生存期低于2年者43例，其中28例AML伴淋系交叉表达，2年死亡率 Ly＋－AML87.5%（28／32）高于 Ly－－AML41.7% （15／36），差 异 有 统 计 学 意 义 （P＜0.05）。

3.3 与MRD的关系

68例（非 M3）AML 分成4组：CD7＋AML，CD56＋AML，CD19＋AML，Ly－－AML。观察与首次诱导治疗后MRD阳性表达之间的关系（见表2）。

表2 68例AML与首次诱导治疗后MRD阳性表达之间的关系（χ2 检验）

在 MRD阳性检出率方面，CD7＋AML组与Ly－－AML组之间差异有统计学意义（P1＜0.05），CD56＋AML组与Ly－－AML组之间差异有统计学意义（P2＜0.05），CD19＋AML组与Ly－－AML组之间差异无统计学意义（P3＞0.05）。

4 讨论

髓系白血病伴淋系交叉表达现象很普遍，本研究中47.1%的AML（非M3）初发时存在跨系列异常免疫表型，常见交叉表达CD7、CD56、CD19，出现频率 在 AML 亚 型 中 依 次 为 M5（55.6%）、M2（48.5%）、M4（21.4%），由于交叉表达现象在 AML各亚型的分布不同，其化疗效果及预后也不同。

CD56分子属于超免疫球蛋白家族的成员，是神经细胞黏附分子的异构体和自然杀伤淋巴细胞（NK）的标志，使肿瘤细胞易于浸润。有报道［1］，CD56表达与多药耐药蛋白P170高表达呈正相关，主要表现为髓外浸润和复发。

CD7抗原分子量为40kDa的单链糖蛋白，主要表达在所有胸腺细胞、大部分外周血T淋巴白血病细胞，CD7被认为是T淋巴细胞的特异性标志抗原。后来的研究认为CD7在髓系白血病的表达，可能是一种白血病干细胞标志［2，3］。

本组68例 AML（非 M3）中交叉表达CD7、CD56 、CD19 的 百 分 率 分 别 为 22.1%、17.6%、7.4%；CD7表达最高，与马云等报道［4，5］一致。本组病人首次化疗未达形态学CR者共16例，其中6例伴CD56阳性、6例伴CD7阳性；本组仅见1例M7同时表达CD7CD56，未缓解，放弃治疗；1例M1表达CD7，放弃治疗；32例Ly＋－AML病例中生存期大于2年的仅有4例；有资料报道［6－9］AML免疫标记中伴淋系抗原CD7、CD56阳性被认为是预后不良的免疫表型，与本组试验结果一致。另外还发现Ly＋－AML中 M5型最多（55.6%），其中CD7在 M5中也表达最高，因此M5预后最差，与临床表现相符。资料中18例M3仅见1例有交叉表达，表达CD56且同时表达CD34，病人未缓解，1个月内死亡；其他17例M3型CD34和CD7均呈阴性表达，治疗效果好，其微小残留病监测全部采用FISH查融合基因。

CD19是B淋巴细胞特异性标记，据报道［10］，CD19在正常造血干细胞、浆细胞、T细胞及其他组织中没有表达，而在B－ALL及非何杰金氏淋巴瘤中高表达，是B－ALL和B系淋巴瘤的理想治疗靶点。本组发现CD19在AML各亚型中表达均低于10%；在MRD阳性检出率方面，CD19＋AML组与Ly－－AML组之间差异无统计学意义（P3＞0.05），所以，CD19在MRD监测中的意义有待进一步观察。

本组共68例AML利用FCM做了MRD检测，发现在 MRD阳性检出率方面，CD7＋AML组与Ly－－AML组之间差异有统计学意义（P1＜0.05），CD56＋AML组与Ly－－AML组之间差异有统计学意义（P2＜0.05），即CD7＋AML病例或 CD56＋AML病例首次化疗后的MRD值多数大于10－4，证明伴CD7或CD56表达的AML病人对化疗药物不敏感，病人首次化疗后残留的白血病细胞数高，MRD检测结果阳性，预后不良。另一方面，可以选择CD7或CD56作为特异性标记进行MRD监测。当遇到不是初治病例或没有免疫分型的病例时，由于CD56在M2中表达最高，因此做MRD监测时M2型选择CD45CD34CD13CD56，CD45CD34CD33CD56；CD7在M5型表达高，因此在M5型监测 MRD时选择CD7，组成四色抗体组合动态监测MRD。

急性白血病跨系异常表达反映了白血病细胞的发育和分化异常，是白血病相关免疫表型，为白血病的预后判断提供了依据，也为临床靶向性药物的治疗提供了直接证据。因此，当AML病人免疫分型出现交叉表达CD56、CD7时，提示临床应调整化疗方案，强调个体化治疗，并选择特异性强的四色抗体组合进行MRD监测。

［1］干红灵，陈葆国，颜荣文，等.CD56在急性髓系白血病细胞上的表达及微小残留病分析［J］.检验医学2010，25（5）：360.

［2］曹 晖，王亚哲，吴红红，等.CD7和CD56阳性急性髓系白血病患者干细胞表性分析及在微量残留病检测中的意义［J］.中华血液学杂志，2008，29（1）：23.

［3］吴红红，曹 晖，王亚哲，等.CD7阳性急性髓系白血病骨髓干／祖细胞5个基因表达的研究［J］.中华血液学杂志，2009，17（2）：298

［4］马 云，白小川.急性髓系白血病的免疫分型及临床意义［J］.宁夏医科大学学报，2009，31（2）：55.

［5］梁建英，马勒芬 ，朱明请，等.伴淋系抗原表达的急性髓系白血病的临床及 MIC分型特征［J］.中华血液学杂志，2007，28（11）：776.

［6］李耀华，徐 娟，孙学静，等.CD7在成人急性髓系白血病的表达及其在微小残留病检测中的应用［J］.首都医科大学学报，2006，27（2）：233.

［7］柳彩凤，刘桂兰，程翼飞，等.急性粒细胞白血病患儿免疫表型及其临床意义［J］.实用儿科临床杂志，2007，22（3）：206.

［8］Kita K，Miwa H，Nakase K，et al.Clinical importance of CD7expression in acute myelocytic leukemia［J］.Blood，1993，81：2399.

［9］程 薇，马保根，翟亚萍，等.139例急性髓系白血病免疫分型特点分析［J］.肿瘤防治研究，2009，36（3）：235.

［10］Gomyo H，Shimoyama M，Minagawa K，etal.Morphologic flow cytometric and cytogenetic evaluation of bone marrow involvement in B－cell lymphoma［J］.Haematologica，2003，88（12）：1358.