益肾方干预慢性肾衰竭营养不良的机理研究

张晓菊等

【摘 要】目的：探讨益肾方干预慢性肾衰竭营养不良的作用机制。方法：采用二步5/6肾切除法复制大鼠慢性肾衰竭模型，随机分为正常组、模型组、尿毒清组、开同组及益肾方高、低剂量组。给药6周，观察血BUN、Scr、ALB、Hgb、EPO及Leptin水平；分析Leptin与EPO表达的相关性。结果：模型组大鼠BUN、Scr及leptin水平较正常组显著升高，ALB、Hgb及EPO水平显著降低。与模型组比较，益肾方组BUN、Scr及Leptin水平显著降低（P<0.01），ALB、Hgb及EPO水平显著升高（P<0.01）；Leptin与EPO之间存在着显著的负相关（r=-0.681，P<0.05和r=-0.676，P<0.05）。结论：益肾方干预CRF营养不良提高血清白蛋白的机制可能与：降低氮质潴留，减轻毒素对蛋白合成的抑制有关；与改善肾功能，促进Leptin的排泄有关；与升高血清EPO水平，从而降低Leptin的分泌有关。

【关键词】益肾保真方；慢性肾衰竭营养不良；促红细胞生成素；瘦素

营养不良是慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）患者临床常见的重要并发症，普遍存在于CRF人群中。据报道65%以上的终末期肾病（End stage renal disease，ESRD）患者发生营养不良[1]。目前认为营养不良的发病主要与机体蛋白合成下降、攝入不足、丢失增多、分解加快等有关。研究发现，瘦素（Leptin）可通过抑制食欲、减少能量摄取，抑制脂肪的合成等[2-4]机制引发营养不良，而肾脏是清除leptin的主要器官，且近乎100%从肾脏清除[5]，故CRF时肾脏清除leptin能力下降，导致高瘦素血症的发生；同时促红细胞生成素（EPO）减少又能反馈性引起脂肪细胞分泌瘦素增多[6]。故探讨Letin、EPO与CRF营养不良的作用机制具有一定的临床应用价值。

中医药在CRF营养不良的治疗中具有明显优势，大量文献报道，采用补肾健脾、益气固精、化瘀降浊诸法辩证治疗，取得良好临床疗效，多年来我们采用益肾方治疗慢性肾脏病获良好疗效，本研究旨在通过5/6肾切除大鼠慢性肾衰竭模型，进一步探讨该方干预CRF营养不良的作用机制，为临床科学用药提供理论依据。

1材料与方法

1.1实验动物 SD大鼠，70只，雌雄各半，体重200±20g，清洁级，西安交通大学医学院实验动物中心提供。

1.2药物制备 益肾方由仙灵脾、黄芪、人参、当归、大黄、莪术等组成，生药水煎，浓缩成所需浓度待用，由西安交通大学第一附属医院中医科提供。复方ɑ-酮酸片（开同）0.63g/片，北京费森尤斯卡比医药有限公司生产，尿毒清颗粒5g/袋，广州康臣制药公司生产。

1.3模型制作、分组及给药方法 动物购入适应性喂养1周，于实验第2周，随机抽取10只作为正常组，余60只参考文献[7]采用二步5/6肾切除法复制CRF营养不良模型。随机分为模型组、尿毒清组（2.5 g/kg·d）、开同组（0.78g/kg·d）、益肾保真方高剂量组（46.5 g/kg·d），益肾保真方低剂量组（15.6 g/kg·d）。于实验第4周开始分别灌胃给药，每日1次，每次2ml，连续6周，正常组及模型组给予等容积的蒸馏水。

1.4 .观察项目：实验期间，大鼠自由进饮食，于实验第9周末，禁食24h后腹主静脉采血检测血BUN、Scr、ALB、Hgb水平，放免法检测血清EPO及Leptin水平。

1.5 统计学处理 运用SPSS13.0软件处理数据，资料的结果用 表示。计量资料比较用多组间比较的单因素方差分析，相关性检验采用Pearson两变量的相关性分析方法，P<0.05为有统计学意义。

2结果

2.1 各组给药大鼠BUN、Scr的比较 与正常组比较，模型组显著升高（P<0.01）；益肾保真方高、低剂量组与模型组比较显著降低（P<0.01），与尿毒清组、开同组比较，则无显著性差异（P>0.05）；益肾保真方组间比较亦无统计学差异（P>0.05）。说明该方有降低BUN、Scr，保护肾功能作用，其疗效与尿毒清、开同相当（表1）。

2.2 各组给药大鼠ALB、Hgb、EPO及leptin的比较 与正常组比较，模型组ALB显著降低（P<0.01）；益肾保真方高、低剂量组显著高于模型组及尿毒清组（P<0.01），而与开同组比较无显著性差异（P>0.05）；组间比较无统计学意义（P>0.05）。说明该方能升高血清白蛋白，其疗效优于尿毒清，与开同相当。

与正常组比较，模型组外周血Hgb显著降低（P<0.01）；益肾保真方高、低剂量组显著高于模型组、尿毒清组及开同组（P<0.01或P<0.05）；组间比较无显著性差异（P>0.05）。说明该方能升高血红蛋白，其疗效优于尿毒清及开同。

与正常组比较，模型组血清EPO值显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各治疗组明显升高（P<0.01或P<0.05）；与尿毒清组及开同组比较，益肾保真方高、低剂量组均显著升高（P<0.01或P<0.05）；组间比较无显著性差异（P>0.05）。说明该方能升高血清EPO，且疗效优于尿毒清、开同。

与正常组比较，模型组血清leptin水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各治疗组均下降（P<0.01或P<0.05）；与尿毒清组及开同组比较，益肾保真方低剂量组明显降低（P<0.01或P<0.05），高剂量组低于尿毒清组（P<0.05），而与开同组无显著性差异（P>0.05）；组间比较无显著性差异（P>0.05）。说明该方能降低血清leptin水平，以低剂量效果明显，其疗效优于尿毒清及开同（表2）。

2.3 EPO与Leptin相关性分析 对EPO和leptin的表达进行相关性分析。结果显示：益高组相关系数r=-0.676，P<0.05；益低组相关系数r=-0.681，P<0.05。结果提示这两组EPO与leptin存在着显著负相关。（见图1、图2）

3讨论

营养不良是慢性肾衰竭（CRF）的常见并发症，其发病率高达80%[1]。营养不良主要表现为疲乏无力、消瘦、皮下脂肪减少等。中医认为本病属“虚劳”“失精”范畴，为因虚致实，本虚标实之癥。本病以脾肾亏虚为本，湿瘀浊毒为标，治疗以补益脾肾、益气生血为主，辅以化瘀泻浊。益肾保真方由生黄芪、人参、仙灵脾、当归、大黄、莪术等组成。方中黄芪、人参健脾益气，使气旺血生；仙灵脾温肾助阳，益气养精；当归养血、活血；大黄泄热通腑，解毒降浊；莪术破血行气，活血化瘀。现代药理研究证实，人参、黄芪可促进蛋白合成[8，9]；大黄能降低肌酐、尿素氮，补充人体必需氨基酸[10]；仙灵脾可促进促红细胞生成素的分泌，改善贫血状态[11]。我们临床观察发现，该方对纳差、疲乏无力等症状有明显的改善作用，分析该方改善虚证症状的疗效与提高蛋白合成，促进造血、改善营养状况有关。

研究证明，蛋白合成减少，分解加快为CRF营养不良发生的主要机制，而尿毒症毒素蓄积抑制蛋白合成是CRF营养不良发生的重要机制。本研究发现，益肾保真方能降低BUN、Scr，升高ALB，推测其改善营养不良的机理可能与其降低了氮质潴留，减轻了毒素对蛋白质合成的抑制有关。

目前发现瘦素（leptin）与CRF营养不良的发生密切相关[12]。Leptin是具有激素样的蛋白，是ob基因的表达产物。其主要生理功能是感受机体的营养状况，通过调节食物摄入和能量代谢来调节体重。leptin与其受体结合后，减少了能促进食欲的神经肽Y的生物合成，导致食欲下降，食物摄入减少，最终结果是体重减轻和机体脂肪量减少。leptin还能增加交感神经活性，使机体能量消耗增加，亦导致体重减少[2-4]。

肾脏是leptin清除的主要器官。因此，临床中各种肾脏疾病造成的肾小球滤过功能减退或肾小管功能损伤均可导致leptin在体内清除下降，造成体内蕴积[13]。本研究发现益肾方能降低血清leptin水平，推测其作用机制与改善肾功能促进了leptin的排泄有关。

Leptin水平的升高，还与EPO水平降低密切相关。CRF时，EPO分泌减少，红细胞生成减少，EPO减少又能反馈性引起脂肪细胞分泌瘦素增多[6]，故EPO分泌减少是瘦素分泌增多的原因之一。研究还发现[14]，应用EPO治疗肾性贫血的同时，可明显降低血清leptin水平。其机制可能为：①EPO的增加降低了贫血对leptin合成或释放的刺激作用，从而导致血中leptin水平下降；②EPO对leptin的合成可能具有直接的抑制作用。本研究证实益肾方能显著升高CRF大鼠血清EPO水平，同时对EPO与Leptin表达的相关性分析表明，二者之间存在着显著负相关关系。由此推测，益肾方改善CRF营养不良的作用机制，可能与升高血清EPO水平，降低了leptin的分泌有关。

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