浅谈生化全自动分析仪项目间试剂交叉污染及其解决方法

李金英　张慧蓉

【摘 要】目前生化试剂种类繁多，如何正确合理的使用，充分提高检验结果的准确性，以便更好地为临床诊断服务。

【关键词】全自动生化分析仪；试剂；防止污染

在生化试剂的应用过程中我们往往会碰到交叉污染的问题，从而导致结果的偏离，影响临床结果的报告和临床病情的诊断。所以正确认识交叉污染问题及有效排除显得尤为重要。

交叉污染简单分析是生化仪使用过程中永恒的话题，从仪器角度分析交叉污染的来源主要包括样本针携带污染 ，试剂针携带污染 ，搅拌棒携带污染， 清洗系统携带污染 ，比色杯污染。主要原因 1. 样品针，试剂针弯曲，特富龙涂层剥落，针堵塞，冲洗水冲洗不充分 。2，搅拌棒特富龙涂层剥落，搅拌棒表面有顽固性污渍，冲洗水冲洗不完全。3.比色杯划痕较多，冲洗水冲洗不完全。4.干燥棒携带污染。

那如何鉴别交叉污染的类型从而及时排除？

1. 样品针携带污染：同一血清分为五份，分别测定蛋白项目，重复性差。

2. 试剂针携带污染：① 部分试剂极易变质，可通过肉眼观察发现 ② 以蒸馏水为样本， 重复测定以下项目组合 10 次以上：AST 、 ALT （前）+ LDH （后）； TCHO（前）+TBA（后），后者测定结果偏高但重复性较好。

3. 搅拌棒携带污染：对同一份血清标本重复测定GGT 或 ALT或AST 20次以上，结果重复性较差且有走高趋势。

4. 清洗系统携带污染：①在样本测定过程中，加做室内质控，部分项目测定异常或者失控 ②在样本测定过程中以蒸馏水为样本，多次测 定LDH、P、Mg、TBA，结果重复性不好。

5. 比色杯污染：在每日早晨刚开机时对所有项目做试剂空白测定，试剂空白吸光度或者试剂空白吸光度变化率结果变高，TBA（循环酶速率法）经常出现负值，蛋白项目、血脂项目结果偏高，胆红素（钒酸盐法）易出现异常值。

解决办法：

①定期进行仪器的维护保养。②按要求及时更换零部件。③定期对仪器进行校准。④全自动生化分析标本和试剂用量少，残存少量即会影响测试结果，每天应用无水乙醇擦洗并定期更换干燥棒，保证比色杯清洗后不留残液，避免比色杯的交叉污染。⑤可使用生化分析仪的试剂针、比色杯清洗程序，对试剂针、比色杯进行2次或多次清洗。用碱性清洗液或酸性清洗液冲洗试剂针可以有效地避免携带污染。⑥合理设置实验项目的排列顺序，避免试剂交叉污染。ALT 、AST、 TBIL、 DBIL 、TBA、ALP、GGT 、CHE 、TP、 Alb、Urea、 UA 、Cr、 CK 、CK-MB、α–HBDH 、LD、 TG 、TC、 HDL-C、 LDL-C、APOAI、APOB、 Amy 、CO2 、Glu、P 、 Fe、Ca、 Mg。 （仅供参考）⑦每个实验项目所需的样本量、试剂量不要随意同比例降低，以保证反应液保持较大的缓冲能力。

从试剂角度分析交叉污染的原因主要以下几种：

1.试剂成分的直接污染：上一个测定试剂中含有下一个测试所要测定的物质，直接干扰下一测试的测定结果。如：淀粉酶（AMY）试剂中含有较高浓度的钙（Ca2+）；碱性磷酸酶（ALP）（IFCC法）、肌酸激酶（CK）（NAC法）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）（NAC法）、二氧化碳（CO2）（PEPC法）、AMY（EPS法）、三酰甘油（TG）等试剂中含有镁（Mg2+）；葡萄糖（GLU）（氧化酶法）、总蛋白（TP）与酸性磷酸酶（ACP）试剂中含有较高浓度的钾（K+）； 胆碱酯酶（ChE）、总胆固醇（CHOL）、GLU （GOD法）、尿酸（UA）（尿酸酶法）、乳酸脱氢酶（LD）（IFCC法）、羟丁酸脱氢酶（HBDH）（DGKC法）等试剂中可能含有磷酸缓冲液；CHOL、TG试剂及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂中可能含有胆酸钠；丙氨酸氨基转移酶（ALT）（IFCC法）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）（IFCC法）试剂中含有高活性的LD；以上试剂的交叉污染就分别会对Ca2+、Mg2+、K+（紫外酶法）、磷（P）、总胆汁酸（TBA）及LD的测定结果造成干扰。

2.试剂成分参与反应：上一个试剂中含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而干扰下一反应的测定结果。如：（1）Mg2+测定试剂的络合剂亦能与铁（Fe）结合，影响铁与铁络合剂的结合；（2）直接胆红素（DBil）（重氮法）试剂含有EDTA，Mg2+试剂中含有EGTA，均能与Ca结合，从而影响Ca的测定；（3）以甘油作为酶保护剂的试剂，会对TG的测定带来干扰；（4）钙（MTB法）试剂对K+有负干扰；（5）CHOL试剂中含有胆固醇酯酶，可水解胆固醇酯形成游离胆固醇，而引起对游离胆固醇测定的干扰。

3.反应进程相同：上一个试剂所引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接的干扰，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。如：（1）当上一反应产物为H2O2时，则对以Trinder反应产生颜色的测定结果引起干扰。如UA对CHOL结果的影响；CHOL对肌酐（CREA）（酶法）测定结果的影响；GLU（氧化酶法）对CREA（酶法）测定结果的影响。（2）CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）试剂中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的己糖激酶（HK）反应过程，因此可能对GLU的测定带来干扰，尤其对GLU的HK法测定可能带来严重干扰。

4.影响反应条件：影响下一个项目的反应条件如pH等，从而改变反应速率。如：（1）DBil（钒酸盐氧化法）试剂中含有表面活性剂的酒石酸盐缓冲液会影响ALT活性，对测定结果有负干扰。（2）CREA（苦味酸速率法）反应条件为碱性，果糖胺（动力学法）反应条件为酸性，受到污染后反应速率会减慢。（3）CREA（酶法）试剂中含有抗坏血酸氧化酶，影响了氧化还原反应的进程，会对TBA（酶循环法）测定结果有影响。

解决方案：1.要求检验人员对仪器工作流程、试剂组成、测定原理要了如指掌，对试剂交叉污染的各种可能性加以考虑，合理设计程序。更换试剂时，应仔细研究说明书，发现和避免可能存在的试剂交叉污染.

2.合理安排检测项目的顺序，在有交叉污染的检测项目中间插入一个或两个非污染项目，最彻底的做法则是将被干扰项目置于干扰项目之前，以消除干扰发生的可能。

3..每个试验项目所需的样本量，试剂量不要随意同比例降低，以保证反应液有较大的缓冲能力；

4.项目编排顺序要与试剂瓶防止顺序相一致，试剂应尽量选用大容量瓶装载。

结语：除了一些高档的全自动生化仪为防止污染，采用洗涤加脱气装置或加超声洗涤装置外，一般随机组合式全自动生化仪可以通过增加洗涤的次数或改变吸取试剂的方式来消除这类污染。所以，由厂家提供给客户使用的仪器参数，项目的位置已经过反复论证，是最佳状态，建议不要随意改动。否则很容易造成测定结果不可靠。在实验工作中还发现，碱性条件下反应项目如肌酐苦味酸速率法、果糖胺动力法，受酸性试剂的影响反应速度减慢。同样观察到尿酸试剂受到强酸性试剂影响，结果明显偏低现象。说明这类污染还有多种表现，受影响的项目不少。根据经验，只要合理安排项目位置，就可有效避免这种现象。原则是将具有相同反应原理的放在一起；相同酸碱度反应的放在一起；试剂内含相同被测成分的和该项目相隔两个项目位置以上的放在一起；易污染项目测定前吸样针设置清洗2次以上的放在一起等。因此，要想获得正确、可靠结果，不但需要熟练掌握仪器操作，更需要了解反应原理、试剂组成等方面知识。

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