无菌药物生产环境中微生物的检测及控制

张虎 宋丽丽 封春香 路华美

【摘 要】 无菌室是进行无菌药物生产的主要场所，有效控制及检测无菌药物生产环境微生物含量是保障产品质量的一项重要指标。本文对无菌室微生物的种类及检测以及如何对无菌环境灭菌消毒进行了综述说明。

【关键词】 微生物检测；沉降菌；浮游菌；人员菌

【中图分类号】 R95 【文献标识码】 A

Aseptic pharmaceutical production environment microbial

detection and control

Zhang Hu Song LIli Feng Chunxiang Lu Huamei

（Shandong Luoxin Pharmaceutical Co.，Ltd. ，Linyi ，Shandong ，27600）

【Abstract】 Sterile room is the main place for aseptic drug production， Effective control and to detect the contents of sterile drug production environment microorganism is an important indicator to safeguard the quality of products .In this paper， the sterile room types and sterile environment and how to detection of disinfection were summarized.

【Keywords】 Microbial detection；Settlement of bacteria；Planktonic bacteria；Personnel bacteria

无菌是指不含存活微生物的状态，在实际使用中的含义是当使用微生物生长培养试验时，无任何细菌生长，无菌药品系指不含任何活的微生物的药品。然而绝对无菌状态是无法实现的，在药物生产过程中，非最终灭菌制剂成品染菌率不超过千分之一，最终灭菌制剂成品染菌率不超过百万分之一，即可认为是无菌药物。无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应当最大限度降低微生物的存在。

伴随医药行业的迅猛发展，药品的质量控制标准变得越来越严格，新版GMP标准的推出对无菌药物的生产进行了更要级别的要求，GMP内容几乎完全与欧盟GMP标准接轨，不仅对无菌生产洁净级别提高了要求，同时对人员管理，生产质量管理等多方面进行要求。为此，本文主要对无菌室内微生物的控制和检测进行描述，为正确维持无菌室的环境提供参考与借鉴。

1 微生物的种类及检测

按照微生物检测内容可将无菌室微生物分为沉降菌、浮游菌、人员菌。在新版GMP要求下不同级别的洁净区域内微生物检测的限度标准如下：

1.1 沉降菌检测 通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿（一般多采用90mm直径硼硅酸玻璃培养皿，俗称沉降碟），经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。（1）采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖上盖后倒置，置32.5℃士2.5℃培养48h，取出检查。（2）采样点的布置：工作区采样点位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。沉降菌的检测位点筛选要具有随机性和代表性，其检测结果能够普遍反映无菌室内环境的情况，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。对关键操作点可以采取设置多个取样位点来反映该位点的无菌状态。

1.2 浮游菌检测 浮游菌即悬浮在空气中的活微生物粒子。本方法采用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。常用采集仪器有“浮游菌空气采样器”。采样方法及采样点布置：采样人员严格按照浮游菌空气采样器的操作规程进行采样。工作区测点位置离地0.8m～1.5m左右；送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。为防止交叉污染，在不同级别的环境下建议配备专门的空气采样器，并定期用无尘抹布和消毒剂对空气采样器表面进行擦拭，保证期检测数据真实可靠；在使用空气采样器采集浮游菌时，采集人员不要在仪器前走动，以免影响结果。安装培养皿时手要在侧面，不能放在培养皿的前方。

1.3 人员菌的检测 人员菌的检测主要为无菌室的工作人员进行更衣验证及离开无菌室的工作人员进行的微生物检测，即手部及洁净服的不同部位进行取点检测，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，并由菌落数量来反映工作人员在正常工作状态下所携带的微生物数量。采样方法及采样位点：对无菌室工作的人员进行更衣验证，取样位点头部、眼罩、腰部、手部、肘部、小腿等。手部检测时，受测人员用手指轻按培养皿停留5秒钟（五指平均分布于培养皿区域），双手都要取样；洁净服的取样点取样时停留时间同样要停留5秒钟，然后押迅速盖上平皿，送化验室培养。

2 无菌环境微生物数量的控制方法

2.1 规范人员的卫生操作规程 人员是无菌环境中最大的污染源，据有相关调查表明，在无菌药品生产过程中，有70%的污染来自于人员。人体携带微生物的数目十分惊人，在没有消毒的情况下，手部大约有1000～6000个微生物/cm2 ，一个喷嚏可以射出100000～1000000个微生物；健康人群站立不动也可以每分钟向环境中散步100000个颗粒，移动时微粒数量会迅猛增加。

为控制人员对无菌室的环境产生的影响，所有人员都应当接受卫生要求的培训，企业应当建立人员卫生操作规程，最大限度地降低人员对药品生产造成污染的风险。人员卫生操作规程应当包括与健康、卫生习惯及人员着装相关的内容[1]。人员进入无菌室要求人员不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得吃东西、嚼口香糖。严格按照进入无菌室的穿衣规程穿戴洁净服。生产过程中出现人员菌检测不合格的工作人员应取消其进入无菌室的资格，并对其进行再次培训，直到无菌检测合格后方可恢复进入无菌室的资格；另外，要严格按照新版GMP对人员的要求，有效控制无菌室人员数量，并尽量避免人员在无菌室不必要的活动，减少人员对环境的污染。

2.2 合理使用消毒剂 无菌室内最普遍使用的消毒剂是75%的乙醇，另外常见的消毒剂还有70%异丙醇，酸性苯酚，碱性苯酚，杀孢子剂，新洁尔灭等，75%乙醇和70%异丙醇常作为人员及设备表面的消毒使用，碱性苯酚、酸性苯酚及杀孢子剂通常用于无菌环境地面的消毒。为防止微生物产生抗耐受性，通常将消毒剂周期性的交替使用，并保证其使用时限，例如在单周使用75%乙醇和酸性苯酚，而双周则使用70%异丙醇和碱性苯酚。为减少人员菌的数量，工作人员要按照规定间歇性的对手掌用消毒剂消毒。

2.3 无菌室的日常管理 建立安全卫生值日制度，定期对无菌环境进行清洁，当设备和地面出现散落的药物粉末或无菌水时，要及时用清理，并用消毒剂擦拭。一旦发现通风系统、墙壁、天花板、地面、门窗及公用介质系统等设施有损坏现象，要及时报告并采取相应的修复措施，并保存记录及时归档。从洁净室（无菌室）环境中检测到的微生物应能鉴别至属或种，保留鉴别实验原始记录及菌种，作为无菌生产、无菌检查洁净室环境质量、消毒剂有效性评估及污染源调查的依据，并且也是为无菌检查阳性结果的调查提供第一手资料。

2.4 无菌环境消毒及设备的灭菌 无菌环境的消毒常采用甲醛熏蒸的方法，为获得最佳的消毒效果，在熏蒸前对无菌室喷洒适量的水以增加环境的空气湿度，同时将无菌室内的物品以一定的空间角度摆放，以增加其表面积而使消毒更加彻底。设备灭菌使用高压蒸汽灭菌法（121℃、30min），对反应釜设备多次脉动式抽真空，由于反应釜设备较大，一般会存在冷点（灭菌时反应釜温度最低的位点），所以需要对反应釜设备安装多个温度探头来确定灭菌温度。设备冷点处温度超过122℃并维持30分钟蒸汽灭菌，保证设备灭菌效果。

3 结语

微生物检测是反映无菌环境无菌性的重要指标，但无菌环境的微生物数量控制绝不能依赖检测，产品的无菌或其它质量特性也不能依赖于任何形式的检验及检测结果，而是应该改善无菌环境卫生及工作人员的操作规范，将微生物的数量控制在根源处，从根本上提高无菌药物的质量。

参考文献

[1] 药品生产质量管理规范（2010年修订）[S].卫生部令第79号，2010.