HPLC法测定菊明降压片中蒙花苷的含量

陈雨 郭磊 李俊广

【摘 要】 目的：建立菊明降压片中蒙花苷的含量测定方法。方法：色谱柱：Hypersil ODS2（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈-0.5%磷酸溶液（30：70）；检测波长：334nm；流速：0.6ml/min；进样20μl。结果：蒙花苷在3-30μg/ml范围内，峰面积与其浓度呈良好线性关系（r=0.9994），平均回收率为93.61%，RSD为1.15%（n=4）。结论：该方法简便、准确、重复性好，可用于测定菊明降压片中蒙花苷的含量。

【关键词】 菊明降压片；蒙花苷；HPLC

【中图分类号】 R286 【文献标识码】 B

Determination the Content of Buddleoside in Juming Jiangya

Tablet by HPLC

Chen Yu Guo Lei Li Junguang

（Pharmaceutical Co.， Ltd. Shandong Luoxin，Linyi，Shandong， 276017）

【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for analysis the content of buddleoside in Juming Jiangya Tablet by HPLC . Method The separation was performed on C18 Column （250mm×4.6mm） with the mobile phase consisted of acetonitrile-0.5% Phosphoric acid （30：70，V/V）.The flow rate was 0.6ml/min，the injection volume was 20μl， and the detection wave length was 334nm and the column temperature was room temperature. Result Linearity of buddleoside was good at 3-30μg/ml（r=0.9994）.The average recovery of buddleoside was 93.61% with RSD=1.15%（n=4）.Conclusion The method is simple，accurate and repeatable，which can be applied in determination the content of buddleoside in Juming Jiangya tablet.

【Keywords】 Juming Jiangya Tablet； buddleoside； HPLC

菊明降压片，是野菊花和决明子以4：1的比例经提取制得的复方制剂。性状为棕褐色，味苦、涩。菊明降压片对原发性高血压，慢性肾炎性高血压等的治疗有很好的疗效。

野菊花为菊科多年生草本植物野菊等的头状花序，全国各地均产[1]。野菊花，味苦、辛，性凉，清热解毒，疏风平肝，用于疔疮、痈肿、丹毒，风热感冒、咽喉肿痛、高血压眩晕、头痛等病症。野菊花含有挥发油、黄酮、绿原酸等多种有效化学成分，其中蒙花苷是野菊花中重要的黄酮类化合物，具有明显的抗菌活性等多种作用[2，3]。蒙花苷（Buddleoside ，别名Linarin）是从菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L.的头状花序中提取的化合物，为白色粉末，分子式为C28H32O14，分子量为592.5468，属黄酮类药物，具有抗衰老、抗缺氧、抗不良刺激、抗疲劳、抑制血糖升高和对机体双向调节作用，对学习记忆也有影响，一般将其作为野菊花的指标成分。

菊明降压片收载在《卫生部药品标准》中，其质量标准中没有含量测定项[4]，不利于产品质量的控制，因此，建立测定菊明降压片含量的方法，对控制该品种质量有重要意义。本实验拟以蒙花苷为指标成分[5-7]，建立HPLC法测定菊明降压片中的蒙花苷的含量的方法，以实现该品种的含量控制，方法未见报道。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器 高效液相色谱仪（UV Detector 2500紫外检测器、Manager 5000混合器、Pump 1000泵）：德国KNAUER公司；色谱柱（250mm×4.6mm Hypersil-ODS2 5μm）：大连依利特公司；微量注射器：50μl；流动相过滤器（AL-01，XINZHOU）：天津特纳公司；电子天平（JA5003）：上海恒平科学仪器有限公司；紫外分光光度计（TU-1810）：北京普析通用仪器有限责任公司；HH-S型数显恒温水浴箱：金坛市医疗仪器厂；SHB-B95型循环水式多用真空泵：郑州长城科工贸有限公司；

1.1.2 试药 菊明降压片：河南省宛西制药股份有限公司；蒙花苷对照品：纯度≥98%，中国药品生物制品检定所；三氯甲烷、无水乙醇、乙酸乙酯、盐酸、磷酸为分析纯；甲醇为色谱纯；水为蒸馏水。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS2色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；检测波长：334nm；流速：0.6ml/min；进样20μl[8，9]；流动相：乙腈-0.5%磷酸溶液[10]（30：70）。柱温为室温[11，12]。0.5%磷酸溶液用分析纯的磷酸溶液配制，用流动相过滤器过滤。

1.2.2 对照品溶液的制备 称取蒙花苷对照品10mg，置于100mL容量瓶中用甲醇定容至刻度，得0.1mg/mL对照品储备液[13].取12.0mL储备液稀释至50mL，得24.0μg/mL的对照品溶液。

1.2.3 供试品溶液的制备 取本品10片，精密称定，研细，精密称取0.42g，置圆底烧瓶中，加入100ml甲醇，加热回流30分钟，称重，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过[14]。续滤液微孔滤膜过滤，取续滤液得供试品溶液。

1.2.4 测定法 分别取对照品、供试品溶液20ul供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定，记录数据，图谱。外标法[15]计算含量。

2 结果及讨论

2.1 样品测定的结果 样品测定结果及图谱如图1：

样品与对照品的图谱比较可知样品图谱中峰1为蒙花苷的峰。根据外标法计算，按每片药片中所含蒙花苷的毫克数记录结果：2.9518mg/片。

2.2 讨论

2.2.1 溶剂的选择 蒙花苷在甲醇中有良好的溶解度，所以选用甲醇为溶剂配制样品及标准品溶液。

2.2.2 检测波长的选择 24μg/ml的溶液，在紫外可见分光光度计上自400nm～200nm扫描，得到光谱扫描曲线。

由紫外吸收光谱的得知，样品溶液在波长为334nm处有较大光吸收度，故选择334nm为蒙花苷的测定波长。

2.2.3 线性关系考察 分别取储备液4.0ml、8.0ml、12.0 ml、16.0ml、20.0 ml、25.0 ml置于50 ml容量瓶中定容至刻度，得8.0μg/ml、16.0μg/ml、24.0μg/ml、32.0μg/ml、40.0μg/ml、50.0μg/ml 六种浓度的对照品溶液，分别用微孔滤膜过滤，得系列对照品溶液。分别取六种对照品溶液各进样20μl，按1.2.1的色谱条件进行测定。对照品溶液浓度与峰面积的数据记录如表3所示。

由以上数据计算得出回归方程：A=0.3677c+0.3680，r=0.9994。

结果表明，蒙花苷浓度在8.00～50.00μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.4 回收率试验 回收率试验取已知含量的样品10片，研细，各取粉末0.085g，共4份，分别精密称定，各置10ml容量瓶中，分别精密加入蒙花苷对照品储备液5 ml，加甲醇5ml按供试品溶液制备法制备，依法测定。回收率=（测得蒙花苷量-菊明降压片中蒙花苷量）/加入对照品量[16]。测得蒙花苷的回收率结果如表4。

结果蒙花苷的平均加样回收率为93.61%（n=4），RSD为1.15%。

2.2.5 重复性试验 取样品溶液，平行试验6次，按1.2.1项下条件测定峰面积，测得蒙花苷的平均含量为5.8934mg/g，RSD=1.14%。测定结果表明精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取供试品溶液分别于0，6，12，18，24h进行测定，即得。结果供试品中蒙花苷含量的RSD为0.41%，表明供试品溶液在24h内保持稳定。

2.2.7 蒙花苷限度的规定 取不同厂家不同批次的药品6批，照“1.2.3”项下方法制备供试品溶液，吸取供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，进行测定，以1片药中所含的蒙花苷微克数计，结果见表5。

6批药品中蒙花苷最低含量为2.5412mg/片，最高含量为3.2361mg/片。

2.2.8 需要进一步研究的问题 由于时间限制和仪器的问题，样品中蒙花苷峰与其他成分的峰分离效果不是十分理想，需要进一步优化分离条件。

3 结论

经方法学考察，采用HPLC法测定菊明降压片中蒙花苷的含量，其线性关系、回收率、精密度、重复性、样品稳定性，均符合含量测定的要求，可作为测定菊明降压片中含量的方法控制产品质量。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：219.

[2] 吴钉红，杨立伟，苏薇薇.野菊花化学成分及药理研究进展[J].中药材，2004，27（2）：142-144.

[3]阮俊，黄永林.野菊花总黄酮提取方法研究[J].中成药2004，2（26）：153-154

[4] 王京霞，许家鸾.决明子中大黄素和大黄酚含量的测定[J].中国中医药信息杂志，2005，12（6）：49-50.

[5] 郑芳，李鹏，李志浩，朱雪松，朱瑜.HPLC法测定神农香菊中蒙花苷的含量[J].中国药师，2010，（3）：366-367.

[6] 黄晓文，范华均，陈超光，卢绮雯，佘旭辉，董宇静，李丹涛.野菊花中蒙花苷的提取及其含量的测定[J].化学分析计量，2010，19（3）：39-41.

[7] 殷忠东，陈慕媛，魏刚.HPLC法测定双柏散中蒙花苷的含量[J].中药新药与临床药理，2010，21（3）：291-293.

[8] 侯坤，许浚，张铁军.HPLC同时测定小蓟中蒙花苷和绿原酸的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（13）：62-64.

[9] 郭凡岭，申凤菊，申海荣.HPLC法测定复方罗布麻片中绿原酸和蒙花苷的含量[J].中国药事，2010，24（5）：444-446.

[10] 魏娜，王强.野菊花及其相关制剂中蒙花苷的含量测定[J].药学与临床研究，2007，15（3）：221-223.

[11] 王伯涛，王锋，张同波，王惠民.反相高效液相色谱法测定野菊花中蒙花苷的含量[J].时珍国医国药，2009，20（1）：166-169.

[12] 周洪雷.高效液相色谱法测定野菊花中蒙花苷的含量[J].化学分析计量，2007，16（6）：27-28.

[13] 康建，阚全程，曾建伟，杜书章，李海燕.高效液相色谱法测定薄荷中蒙花苷含量[J].医药论坛杂志，2007，28（20）：6-9.

[14] 魏敏，单淑敏，许海鹏.高效液相色谱法测定菊蓝抗流感片中蒙花苷含量[J].辽东学院学报（自然科学版），2010，17（2）：96-97.

[15] 刘文英.药物分析[M].北京：人民卫生出版社，2007：41-42.

[16] 黄晓文，谢艳婷，冯嘉欣，谢銮凤.HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量[J].广东药学院学报，2008，24（3）：233-235.