RhD阴性女性妊娠期意外抗体筛选的回顾性研究

陈舒 洪小珍 许先国 蓝小飞 马开荣 刘瑛 何吉 吕杭军

RhD阴性女性妊娠期意外抗体筛选的回顾性研究

陈舒 洪小珍 许先国 蓝小飞 马开荣 刘瑛 何吉 吕杭军

目的 分析RhD阴性女性妊娠期的意外抗体筛选情况。 方法 利用盐水介质法、聚凝胺法和抗人球蛋白法对376例Rh阴性妊娠期女性进行了意外抗体筛查和抗体效价的测定，并对结果进行回顾性分析。结果 33例检出意外抗体，检出率为8.8%（33/376）。检出抗体为抗D 24例（72.7%），抗D+C 2例（6.1%），抗E 2例（6.1%），抗Fyb 1例（3.0%），抗M 1例（3.0%）和抗P 11例（3.0%），2例未能鉴定出抗体特性。376例Rh阴性受检者中78例筛查2次以上，其中10例第1次筛查阳性而在随后定期检测抗体滴度呈现变化，包括8例呈现上升趋势和2例下降趋势；4例保持不变；3例第1次筛查阴性而在随后的定期检测呈阳性，61例第1次筛查阴性而在随后的检测中未发现意外抗体。 结论 RhD阴性妊娠期女性中存在一定比例的意外抗体，定期筛查抗体有助于指导临床及时采用干预措施。

RhD阴性 妊娠期女性 意外抗体筛查

新生儿溶血病（hemolytic disease of newborn，HDN）是一种常见于胎儿和新生儿的与溶血相关的自限性免疫综合征,常由母婴血型不合引起，主要见于ABO血型系统和Rh血型系统。RhD-HDN主要发生于母亲RhD阴性而胎儿阳性，严重者可出现自然流产或不足月死胎[1-2]。对妊娠女性常规检测Rh血型和不规则抗体，可以及早发现胎儿溶血风险以便采取相应措施。本文系统回顾性分析了Rh阴性女性妊娠期意外抗体的筛查情况，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 2007-07—2012-10来血液中心筛查的376例RhD阴性妊娠期女性，年龄19～39岁。

1.2 试剂 凝聚胺介质试剂（台资珠海贝索生物技术有限公司），NOVACLONETMAnti-IgG抗人球蛋白试剂（美国Immucor公司），O型混合细胞（本实验室自制），Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞（上海血液生物医药有限责任公司），谱细胞（上海血液生物医药有限责任公司或美国Immucor公司）。

1.3 方法

1.3.1 意外抗体筛选 取试管3支，各加受检血清2滴，再分别加筛选细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各1滴，混匀后1 000g离心20s，肉眼和显微镜观察。加低离子溶液0.7ml，混匀后加凝聚胺溶液2滴，1 000g离心10s，倾去上清液，管底残留约0.1ml液体。轻轻摇动试管，肉眼观察红细胞有无凝集，如无凝集则必须重作；加2滴悬浮液，摇动试管并轻轻混匀，1min内肉眼和显微镜观察结果。无凝集则表示血清中无意外抗体；有凝集现象，则需进一步采用谱细胞来进行意外抗体鉴定。

1.3.2 意外抗体鉴定

1.3.2.1 盐水介质法 加受检者血清2滴于标记的试管中，加2%～5%谱细胞悬液1滴于每个试管中，混匀，1 000g离心15s，观察溶血和凝集反应并记录结果，溶血和凝集都是阳性结果。

1.3.2.2 抗人球蛋白试验 取受检者血清3滴于标记的小试管中，加2%～5%谱细胞悬液1滴，加低离子溶液3滴，混匀，37℃水浴孵育15min，用0.9%氯化钠溶液洗涤3次后，加抗球蛋白试剂2滴，混匀，1 000g离心15s，肉眼观察溶血和凝集。如结果为阴性，再加IgG致敏的细胞1滴，离心后应出现凝集结果，否则试验无效。

1.3.3 血清抗体效价测定 取10支小试管，按顺序编号，每管加0.9%氯化钠溶液100μl。第1管中加入100μl受检者的血清，从该管起做倍比稀释至第10管。第10管去掉100μl。每管加入相应血型抗原的2%～5%谱细胞悬液50μl混匀，置37℃水浴30min。每管用0.9%氯化钠溶液洗涤3次后，加抗球蛋白试剂2滴，摇匀，1 000g离心15s，肉眼观察凝集结果。

2 结果

2.1 RhD阴性妊娠期女性血清意外抗体筛选情况 共检测Rh阴性女性376例，其中33例检出含有意外抗体，检出率8.8%（33/376）。检出的抗体有抗D 24例（72.7%），其中效价≤1的6例，效价2的3例，效价32的2例，效价64的3例，效价128的6例，效价256的3例，效价1 024的1例；抗D+C 2例（6.1%），其中抗D的效价分别为64和256，抗C的效价分别为64和8；抗E 2例（6.1%），效价分别是16和128；抗Fyb、抗M各1例（3.0%），效价分别是32和8；抗P1 1例，未能测出效价值。未能鉴定出抗体特性2例（6.1%）。

2.2 RhD阴性妊娠期女性血清意外抗体定期检测情况 376例Rh阴性受检者中78例有2次及以上筛查结果，检测次数为2～5次，间隔期为1～20周不等。其中10例样本第1次筛查阳性而在随后定期检测抗体滴度呈现变化，包括8例呈现上升趋势和2例下降趋势；有4例保持不变；3例样本第1次筛查阴性而在随后的定期检测呈阳性，61例（78.2%）标本第1次筛查阴性而在随后的检测中未发现意外抗体，见表1。

表1 两次以上受检者定期监测抗体效价情况

3 讨论

研究显示Rh血型系统抗原性强弱依次为D＞E＞C＞c＞e，而Rh溶血以RhD抗体最常见，其次为RhE[3]。本文结果显示RhD阴性孕妇存在一定比例的意外抗体，以抗D为主，另外存在抗C和抗E，与文献报道基本一致。除Rh系统抗体外，本研究中存在抗Fyb、抗M和抗P1。它们归属于三个不同的红细胞血型系统。抗-M大多为IgM，人群中可天然存在，它引起HDN很罕见[4]。抗-P1属于冷抗体，其临床意义有限，但偶有报道抗-P1发生免疫溶血[5]。抗-Fyb可由妊娠和输血刺激产生，已有报道抗-Fyb引起的HDN，但抗-Fyb是一个相对稀有的抗体[6]，因此其发生HDN的概率很低。

孕前或妊娠期筛查意外抗体对于优生具有重要的意义，本文结果显示RhD抗原阴性妊娠期妇女筛查次数从1～5次，两次筛查的间隔时间从1～20周，提示临床上已初步具备Rh阴性女性产前筛查意外抗体的理念，但是对于如何规范筛查频次尚缺乏统一的标准。本实验结果中首次筛查阴性大多数随后的检测仍是阴性，仅2例效价增加达到4倍，因此对于首次血清意外抗体筛查阴性的RhD阴性女性，可以在妊娠20、28和34周再进行筛查[7]，以避免不必要的检测。

意外抗体呈现阳性的受检者中90.9%在首次筛查即被检出，这可能与本实验的样本来源有关。本实验样本大多来源于医院意外抗体筛查阳性而送检的RhD抗原阴性孕妇，由于医院已初步筛选，因此可能造成受检者样本中意外抗体首次筛选阳性比例较高。本研究中意外抗体阳性受检者在定期监测中大多抗体效价呈上升趋势，这与文献报道一致[8-10]。随着妊娠时间的增加，抗体效价并非恒定不变。由于抗体效价的高低与HDN疾病程度密切相关，因此建议筛查阳性的Rh阴性女性妊娠期间定期监测抗体效价，以便指导临床采取适当的干预措施。

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[10]凌雅,高洁锦,陈香娟,等.120例Rh阴性孕妇产前抗体筛查及效价检测的意义[J].浙江实用医学,2010,15(5):380-382.

Retrospective study on screening of unexpected antibody in RhD-negative pregnant women

CHEN Shu,HONG Xiaozhen,XU Xianguo,

et al.Blood Centre of Zhejiang Province,Key Laboratory of Blood Safety Research,Ministry of Health,Hangzhou 310006,China

Objective To screen unexpected antibody in RhD-negative pregnant women. Methods Total 376 Rh-negative pregnant women were analyzed retrospectively.The screening of unexpected antibody and detection of antibody titer were conducted by salt medium,polyamine and antiglobulin methods. Results Unexpected antibodies were found in 33 cases accounting for 8.8%of total(33/376),including 24 cases with anti-D(72.7%),2 anti-D combined anti-C(6.1%),2 anti-E(6.1%),1 anti-Fyb(3.0%),1 anti-P1(3.0%)and 1anti-M(3.0%);and the antibodies specificity was not identified in 2 cases(6.1%).Seventy eight out of 376 cases were screened more than twice.During the follow-up among 14 positive cases 8 had increased antibodies titer,2 had decreased titer and 4 had no change;while among 64 negative cases unexpected antibodies turned to positive in 3 cases and 61 cases remained negative. Conclusion Unexpected antibodies exist in serum of RhD-negative pregnant women, which indicates that regularly screening of unexpected antibody will help to adopt intervention strategy promptly for the RhD-negative pregnant women.

Rh-negative Pregnant women Screening of unexpected antibodies

2012-11-16）

（本文编辑：胥昀）

310006 杭州，浙江省血液中心卫生部血液安全重点实验室

何吉，E-mail:heji1016@sina.com