见血清止血作用研究

宋 芹,赵 琦,苟小军,陈封政,颜 军,郭晓强,肖 豆,杨伟峰

(1.成都大学生物产业学院,四川 成都 610106;2.中国中医科学院西苑医院实验研究中心,北京 100091;3.湖北中医药大学药学院,湖北武汉 430065)

见血清止血作用研究

宋 芹1,赵 琦1,苟小军1,陈封政1,颜 军1,郭晓强1,肖 豆1,杨伟峰2,3

(1.成都大学生物产业学院,四川 成都 610106;2.中国中医科学院西苑医院实验研究中心,北京 100091;3.湖北中医药大学药学院,湖北武汉 430065)

为明确民间药见血清的止血有效部位,采用毛细玻管法及载玻片法观察见血清醇提部位对小鼠凝血时间的影响;采用断尾法观察其对小鼠出血时间的影响.实验结果显示:毛细玻管法和载玻片法中,见血清醇提部位高、低剂量均能显著缩短小鼠的凝血时间,与空白对照组比较有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);断尾法中,见血清醇提部位高、低剂量均能显著缩短小鼠出血时间,与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01);见血清醇提部位具有止血功效.

见血清;凝血时间;出血时间

0 引 言

见血清为兰科羊耳兰属植物羊耳兰的干燥全草,具有凉血止血、清热解毒之功效[1].目前,有关于见血清止血有效部位、化学成分及作用机理的系统研究报道较少,本研究在结合见血清民间传统用药方法的基础上,拟通过测定实验小鼠凝血、出血时间,对见血清止血活性进行科学评价,拟为见血清药材的深入开发利用提供参考依据.

1 材料与仪器

1.1 实验动物

实验动物为SPF级昆明种小鼠120只,雌雄各半,体质量20±2 g,均由四川省医学实验动物中心提供(合格证号:SCXK(川)2010-12).

1.2 药 材

实验所用药材包括:见血清药材购自四川成都荷花池中药材市场,经成都大学中药化学实验室陈封政教授鉴定为兰科羊耳兰属羊耳兰的干燥全草;云南白药胶囊,为云南白药集团股份有限公司生产(批号,20110904).

1.3 仪 器

实验所用的仪器包括:SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司),RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂),HH-2型恒温水浴锅(北京科伟永兴仪器有限公司),ZKF040型真空干燥箱(上海实验仪器厂有限公司),GB204电子分析天平(瑞士梅特勒),JY-2002电子秤(上海精密科学仪器有限公司),毛细管(内径0.9～1.1 mm,长10 cm,华西医科大学仪器厂).

2 方法与结果

2.1 供试药品的制备

取见血清药材粗粉约300 g加入75%乙醇回流提取2次,每次3 h,每次加入10倍量乙醇,趁热过滤,合并两次滤液,回收至无醇味.将乙醇提取物放入研钵中加入适量0.5%CMC-Na溶液,研磨均匀,再加入适量蒸馏水配制成含生药0.1 g/mL悬浊液.

2.2 止血作用的实验研究

2.2.1 对凝血时间(CT)的影响.

1)毛细管法.取体重20±2 g的昆明种小鼠40只,雌雄各半,称重、标记、随机分为4组.灌胃药物,每日1次,连续7 d,空白对照组给予蒸馏水.末次给药30min后,用一次性玻璃毛细管插入小鼠眼球后静脉丛取血,至玻璃毛细管内充满血液为止,置于水平处,每隔30 s折断玻璃毛细管0.5 cm,并缓慢左右拉开,观察有无凝血丝出现.记录从毛细玻管采血到出现凝血丝的时间,作为凝血时间,并计算缩短率.

2)载玻片法.取体重20±2 g的昆明种小鼠40只,雌雄各半,称重、标记、随机分为4组.灌胃给药,每日1次,连续7 d.末次给药30 min后,用眼科弯镊迅速摘取一侧眼球,即有血液流出.于载玻片两端各滴一滴血,血滴直径约为5 mm,立即用秒表计时.每隔30 s用清洁大头针自血滴边缘向里轻轻挑动一次,并观察有无血丝挑起.从采血开始至挑起血丝止,所历时间即为凝血时间.另取一滴血供复验.记录凝血时间,并计算缩短率.

表1 对凝血时间的影响(min,±SD)

表1 对凝血时间的影响(min,±SD)

注:与空白组比较,**P＜0.01,*P＜0.05.

空白对照组 10 — 3.2±1.11 — 3.5±1.52云南白药组 10 0.3 1.4±0.34** 56.25 2.0±0.84* 42.86醇提低剂量组 10 2 1.7±0.26** 46.88 2.7±0.14* 22.86醇提高剂量组 10 4 1.3±0.38** 59.38 2.3±0.63* 34.29

由表1数据可见,就小鼠凝血时间影响而言,无论是毛细管法还是载玻片法,见血清醇提高、低剂量组与空白对照组比较,统计学上均有显著差异(P＜0.01,P＜0.05);与阳性药云南白药比较并无统计学差异(P＞0.05).

2.2.2 对出血时间(BT)的影响.

取体重20±2 g的昆明种小鼠40只,雌雄各半,称重、标记、随机分为4组.灌胃给药,每日1次,连续7 d.末次给药30min后,将小鼠趋入固定器中,露鼠尾于外,用剪刀剪去尾尖约3 rnm,待血液自行溢出.每隔30 s用滤纸轻轻吸取血滴,以人工形成创面到出血停止所经时间为出血时间.记录出血时间,并计算缩短率.

表2 对出血时间的影响(剪尾法)(min,±SD)

表2 对出血时间的影响(剪尾法)(min,±SD)

注:与空白组比较,**P＜0.01.

空白对照组 10 — 30.5±5.51 —云南白药组 10 0.3 20.3±4.64** 33.44醇提低剂量组 10 2 22.7±6.14** 25.57醇提高剂量组 10 4 18.3±3.43** 40.00

由表2数据可见,就小鼠出血时间影响而言,见血清醇提高、低剂量组与空白对照组比较,统计学上均有显著差异(P＜0.01);与阳性药云南白药比较并无统计学差异(P＞0.05).

3 讨 论

见血清在民间运用广泛,在四川、贵州等地民间常用药材目录中均有记载[3-5].见血清既可内服也可外敷,民间传统使用方法为水煎煮入药和酒泡服入药.因此,在结合见血清民间传统用药方法的基础上,本研究对见血清的止血作用进行了科学评价.结果表明:醇提部位可明显缩短小鼠出、凝血时间,其止血活性与云南白药相近.由此可知,见血清止血活性突出,单味药材入药其优势显而易见,可将其作为止血药的新资源进行系统研发,但关于该药材的系统研究较少,其止血药效物质基础,作用机制等都将有待进一步研究.

[1] 四川省食品药品监督管理局.四川省中药材标准[M].成都:四川科学技术出版社,2010.

[2] 陈奇,邓文龙,张世玮,等.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993.

[3] 浙江省革命委员会生产指挥组卫生办公室.浙江民间常用草药[M].杭州:浙江人民出版社,1969.

[4] 四川省中药研究所.四川常用中草药[M].成都:四川人民出版社,1971.

[5] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999.

Study on Hemostasis Effect of Liparis Nervosa(Thunb.)Lindl

SONGQin1,ZHAO Qi1,GOU Xiaojun1,CHEN Fengzheng1,YAN Jun1,G UOXiaoqiang1,XIAO Dou1,YANGWeifeng2,3
(1.School of Bioindustry,Chengdu University,Chengdu 610106,China;2.Experimental Research Center of Xiyuan Hospital,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100091,China;3.Pharmacy Faculty,Hubei University of Chinese Medicine,Wuhan 430065,China)

Objective:To indicate the blood coagulation location of Liparis nervosa(Thunb.)Lindl.Methods:The glass capillary tube method and slide method were used to observe the effects of Liparis nervosa(Thunb.)Lindl on the clotting time;the effect of Liparis nervosa(Thunb.)Lindl on the bleeding time was observed by cutting tails of mice.Results:In slide method and glass capillary tube method,the clotting time wasobviously shortened in high-dose and low-dose alcohol extract groups,comparedwith control group with significant difference(P＜0.01,P＜0.05).In tail method,there was significant difference(P＜0.01)in bleeding time between alcohol extract groups and control group,either in high-dose or low-dose.Conclusion:Alcohol extractive position of Liparis nervosa(Thunb.)Lindl has hemostasis effect.

Liparis nervosa(Thunb.)Lindl;clotting time;bleeding time

R285.5

A

1004-5422(2013)01-0027-03

2013-01-14.

宋 芹(1982—),女,博士,讲师,从事天然药物有效物质基础及作用机制研究.