银杏内酯B 对小鼠胚胎着床作用的影响

崔风云 刁 英

1.遵义医学院附属医院生殖中心(563003);2.河南省汝州市第一人民医院

避孕和终止妊娠一直是生殖领域研究的重大课题，大多育龄妇女会选择使用药物进行避孕或者人工流产，但由于不少合成药物具有较明显的副作用，因而在临床上应用受到一定限制。为了找到一种安全、有效且副作用小的理想避孕及抗孕药物，国内外学者对多种中草药进行了深入研究。其中从银杏叶中提取的银杏内酯B(GB)具有专属的抗血小板活化因子(PAF)活性［1］，且 PAF还可在心血管、神经、生殖等多种系统疾病中发挥作用［2］。GB作为PAF天然拮抗剂中活性最强、特异性最高的一种，本文对GB抗小鼠胚胎着床作用进行了研究。

1 资料与方法

1.1 实验动物分组与处理

选用未经产雌性昆明小鼠(重庆医科大学大坪医院实验动物中心提供，动物合格证号:0003037)，体质量25～30g，按雌雄2∶1合笼交配，次日晨发现阴栓者定为妊娠第0天。将25只孕鼠随机分为5组(每组5只)，均于妊娠第2天使用3%戊巴比妥钠麻醉，下腹正中切口，暴露两侧子宫角，于右侧子宫角宫腔内注射不同剂量的 GB(2、4、6、8、10mg/kg)作为实验侧，左侧子宫角宫腔内注射相应体积的生理盐水作为对照侧。GB购于成都普思科技有限公司，实验用Ham＇sF12稀释配成不同浓度的药液，另取8只孕鼠，其中3只孕鼠未进行任何处理作为空白对照组，另5只孕鼠双侧子宫角注入相应剂量生理盐水作为生理盐水组。术后小鼠进食、饮水、反应等情况如常。将所有小鼠于妊娠第8天脱颈椎法处死后，立即剖腹肉眼观察子宫，记录胚胎数目。

1.2 统计学方法

计量资料用均数±标准差表示，采用独立样本t检验、单因素方差分析及均数趋势检验对数据进行差异性处理。

2 结果

2.1 不同处理实验鼠妊娠8天后子宫变化

正常未孕小鼠子宫见图1。肉眼观察可见，空白对照组(图2)、生理盐水组(图3)及实验组右侧(图4～6)小鼠妊娠子宫增粗，颜色淡红，胚泡发育较一致，呈串珠状均匀分布于子宫内壁。生理盐水组一侧子宫角胚泡数(5.80±0.84个)略少于空白对照组胚泡数(6.00±1.10个)，但差异无统计学意义(P＞0.05)。4 mg/kg、6 mg/kg剂量组小鼠实验侧子宫直径粗细不等，胚胎数目减少，胚胎变性坏死后子宫呈瘀血水肿状(图4);8mg/kg、10mg/kg剂量组子宫角胚胎数目显著减少，并出现无胚胎着床、无结节样外观(图5、6)。

2.2 不同剂量给药组小鼠实验侧子宫与对照侧子宫胚胎数比较

子宫胚胎数2mg/kg组实验侧略少于对照侧，但差异无统计学意义(P=0.359);4mg/kg、6mg/kg组实验侧明显少于对照侧，差异均有统计学意义(P1=0．037、P2=0.011);8mg/kg 、10mg/kg组实验侧显著少于对照侧，差异均有统计学意义(P均＜0.001)。见表1。

表1 不同剂量GB对小鼠胚泡数量的影响

2.3 不同剂量给药组小鼠实验侧子宫胚胎数目差异

小鼠实验侧子宫胚胎数目2mg/kg组明显多于4mg/kg、6mg/kg组，差异均有统计学意义(F=9.362，P1=0．029、P2=0.016)，且显著多于 8mg/kg、10mg/kg 组，差异均有统计学意义(F=9．362，P1与P2均＜0.001);4mg/kg与6mg/kg剂量组比较差异无统计学意义(F=9．362，P=0.772)，但胚胎数显著多于 8mg/kg、10mg/kg 剂量组(F=9．362，P1=0．016、P2=0.008);6mg/kg剂量组胚胎数显著多于8mg/kg、10mg/kg 剂量组(F=9．362，P1=0．029、P2=0.016)，8mg/kg、10mg/kg剂量组比较差异无统计学意义(F=9．362，P=0.772)。对照侧各剂量组之间比较，差异无统计学意义(F=0．405，P＞0.05)。

2.4 剂量效应趋势检验结果

5个剂量组实验侧之间胚胎数目采用均数趋势检验，呈明显下降趋势(P＜0．001);对照侧采用均数趋势检验，无明显下降趋势(P=0.879)。

3 讨论

PAF是由嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和内皮细胞等受到刺激后产生的一种具有强烈生物学活性的脂质递质，1972年由Battler等发现［3］。PAF主要与细胞表面的PAF受体结合发挥作用，在体内有着类似于激素的广泛生物学活性，已证实与20多种疾病相关。研究表明PAF参与排卵、受精、着床、妊娠、分娩等生殖过程的许多环节［4，5］，在育龄妇女的月经周期及妊娠过程中有着广泛的作用，如影响卵母细胞的功能以及黄体的形成，促进胚胎发育，引起子宫内膜的蜕膜反应等［6］，尤其与胚胎着床关系密切［7］。研究表明在胚胎着床的种植窗期，子宫内膜的特点是血管扩张和通透性增加。PAF可作用于子宫内膜的腺体，使前列腺素E2(PGE2)的释放增加，从而促使着床部位血管扩张、通透性增加，释放多种营养物质，造成局部水肿疏松，增加子宫内膜容受性，完成胚胎植入前的子宫同步准备，利于胚胎的黏附着床［8］。在受精卵植入过程中，PAF使子宫内膜基质细胞向蜕膜细胞分化，蜕膜细胞也可分泌PAF，并能传递胚泡着床的信号，在整个植入过程中起促进作用［9］，即PAF能促进胚胎着床与植入。

GB作为PAF的天然拮抗剂，可能具有抗胚胎着床的作用。本实验表明，在小鼠子宫角部注射GB(≥4 mg/kg)，小鼠胚胎着床数目较对照侧明显减少，且随剂量的增加胚胎数目减少更为显著，大剂量(≥8mg/kg)时胚胎着床数目极少，且已出现无胚胎着床现象，说明GB的确可以抗胚胎着床，从而起到避孕作用。推测其机制可能与GB作为PAF的天然拮抗剂，能与PAF竞争PAF受体，干扰PAF对子宫内膜的作用，影响子宫内膜的正常生理活动，使胚胎发育与子宫内膜不能协同而起到抗着床作用有关，具体机制有待进一步研究。我们拟下一步采用免疫组织化学法及透射电镜观察，进一步探讨GB干扰小鼠胚胎着床作用的机制。

此外，本实验中生理盐水组小鼠胚泡数较空白对照组略减低，但两者之间差异无显著性，分析原因一方面与手术创伤有关，另一方面可能与着床时注入生理盐水，造成宫腔内与着床相关的因子浓度被稀释有关。

1 Trumbeckaite S，Bernatoniene J，Majiene D，et al.Effect of Ginkgo biloba extract on the rat heart mitochondrial function［J］.Ethnopharmacol，2007，111(6):512-516.

2 黄泓.血小板活化因子的生物学效应和受体拮抗剂研究［J］.上海第二医科大学学报，2005，25(1):89-91.

3 Battler B，Mulle C.Neurotransmitter receptorsⅡ，AMPA and kainate receptors［J］.Neuropharmacology，1995，34(2):123-139.

4 Roudebush WE.Role of platelet activating factor in reproduction:sperm function［J］.Asian J Androl，2001，3(2):81-85.

5 Purnell ET，Roudebush WE，Sengstacke FD，et al.Platelet-activating factor stimulates intracellular calcium levels in exposed sperm［J］.Fertil Steril，2001，76(3):142-153.

6 李游，范萍，白怀，等.PCOS患者PAF-AH活性及其与糖脂代谢相关性的研究［J］.四川大学学报，2009，4(6):1066-1070.

7 Purnel ET，Warner CM，Kort HI，et al.Influence of the preimplantation embryo development(Ped)gene on embryonic platelet-activating factor(PAF)levels［J］.J Assist Reprod Genet，2006，23(6):269-273.

8 Smith SK，Kelly RW.Effect of platelet-activating factor on the release of PGF2aand PGE2by separated cells of human endometrium［J］.J Reprod Fertil，1988，82(4):271-276.

9 黄荷凤，胡林姿.子宫内分泌［J］.国外医学/妇产科学分册，1994，21(5):263-264.