H PLC法测定明珠口服液中大黄酚的含量

陈月霞 王俊 蔡亚兰 曹冬梅 洪丽萍 朱佳丽

（扬子江药业集团有限公司，江苏 泰州225500）

H PLC法测定明珠口服液中大黄酚的含量

陈月霞 王俊 蔡亚兰 曹冬梅 洪丽萍 朱佳丽

（扬子江药业集团有限公司，江苏 泰州225500）

目的：建立明珠口服液中大黄酚的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC），色谱柱为Agilent XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（70∶30），流速1.0 mL/min，柱温30℃，检测波长288 nm。结果：大黄酚在0.106 3～0.637 8 μg呈良好的线性关系（r＝1.000 0）；平均加样回收率为98.87%（RSD为1.3%，n＝6）。结论：本法重复性好，灵敏度高、定量准确，可作为明珠口服液质量控制方法之一。

明珠口服液；大黄酚；含量测定；高效液相色谱法

明珠口服液是一种纯中药制剂，由决明子、制何首乌、珍珠母、菊花、夏枯草、当归、白芍、枸杞子、赤芍、红花、益母草、车前子等十几味中药组成。用于肝肾阴虚引起的视力下降，视瞻有色，视物变形等症状的治疗。方中有“还瞳子”之称的决明子主要有效成分为蒽醌类化合物（大黄素、大黄酚等）[1]，大黄素与大黄酚都具有清肝明目、防止视力模糊的功效。为提高明珠口服液的质量，保证其临床用药的稳定性，以明珠口服液中的大黄酚作为指标成分进行高效液相色谱法（HPLC）定量测定法研究，结果表明，本试验专属性强，结果准确，重现性好，为明珠口服液的质量控制提供理论依据和可行的检测方法。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪：包括四元泵、自动进样器、柱温箱、可变波长检测器（VWD）、ChemStations色谱工作站，美国安捷伦科技有限公司；Agilent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，

5μm）；YLE-2000型电热恒温水浴锅；XS205型电子分析天平（0.000 01 g，德国梅特勒-托利多）。

大黄酚对照品（原中国药品生物制品检定所，含量为99.6%，批号：110796-201017），乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

本实验所用的明珠口服液与明珠口服液阴性样品均为我公司生产，所用明珠口服液的批号为10112212，10112311，11022411；所用明珠口服液阴性样品的批号为YXDZ-12112011。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5μm），柱温 30℃，流动相乙腈-0.1%磷酸溶液（70∶30），流速1.0 mL/min，检测波长288 nm。按此色谱条件进行测定，结果显示大黄酚能与其他组分色谱峰基线分离，理论板数不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取大黄酚对照品10 mg，置100 mL量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（75∶25）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过。所得对照品图谱见图1-A。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取本品15 mL，加三氯甲烷50 mL，再加20%硫酸溶液10 mL，加热回流1 h，分取三氯甲烷层，酸水层再加三氯甲烷 30 mL，加热回流1 h，分取三氯甲烷层，酸水层用少量三氯甲烷洗涤3次，合并三氯甲烷提取液，用水洗涤3次，回收三氯甲烷液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，滤过。所得供试品图谱见图1-B。

2.4 阴性样品溶液的制备

精密量取装量差异项下的明珠口服液阴性样品15 mL，按2.3项下的方法制备阴性样品溶液。所得阴性样品溶液图谱见图1-C。

图1 大黄酚的HPLC图A对照品；B供试品；C阴性样品

2.5 线性关系

精密量取 2.2项下的对照品溶液（0.1g/L）1.00，5.00，3.00，10.00，5.00，6.00 mL分别至 10，25，10，25，10，10 mL量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，按2.1项下条件测定峰面积。以对照品质量（X）对色谱峰面积（Y）进行线性回归求得线性方程为

Y＝24.69 X＋1.709

r=1.000 0（n＝6）

结果显示大黄酚在0.106 3～ 0.637 8 μg呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液 10 μL，按 2.1项下条件，重复进样5次，测定峰面积，计算相对标准偏差，RSD为0.26%（n＝6）。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液分别在 0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13 h精密吸取10.0 μL注入高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定峰面积，计算相对标准偏差，RSD为0.41%（n＝14）。

2.8 重复性试验

取同一批样品6份，依法制备供试品溶液，精密吸取 10 μL测定峰面积，计算标准偏差，RSD为0.35%（n＝6）。

2.9 加样回收率试验

精密量取已知大黄酚含量为 0.022 1 mg/mL的样品6份，分别精密加入106.3 μg/mL的大黄酚对照品溶液3 mL，按2.3项下方法制备供试品溶液，再按2.1项下方法分别测定，计算回收率，结果见表1。

表1 大黄酚回收率试验结果

2.10 样品含量测定

取3个批次的样品各两份，按 2.3项下方法制成供试品溶液，依法平行测定两次。计算大黄酚的含量，结果见表2。

表2 3批样品测定结果（n＝2）

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取大黄酚对照品用紫外分光光度计进行全波长扫描，结果发现分别在278，288 nm处有最大吸收，均远离溶剂的吸收峰，但在288 nm处的吸光度比278 nm处的吸光度更强，且在该波长下样品溶液中大黄酚可与其他组分得到基线分离，故选择288 nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择

本实验考察了流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（80∶20，70∶30，60∶40），结果综合经济实用的角度选择乙腈-0.1%磷酸溶液（70∶30）为流动相，此时大黄酚与相邻杂质峰分离度较好，且出峰时间合适。

3.3 提取溶剂的选择

参考《中国药典》（2010年版）一部中“决明子”药材含量测定及相关文献[2-7]，比较了乙酸乙酯-无水乙醇（80∶20，75∶25，70∶30，65∶35，60∶40，55∶45），作为提取溶剂，从测定结果的比较可以看出，采用乙酸乙酯-无水乙醇（75∶25）提取时，大黄酚的提取率最高，故选定乙酸乙酯-无水乙醇（75∶25）作为提取溶剂。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 （2010年版）一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：135-136.

[2] 周晓明，李波，王晓琴.HPLC测定蒙药辛木兴-6中大黄酚的含量[J].中国民族医药杂志，2012，18（5）：47-49.

[3] 李亚荣，王舒.HPLC法测定连翘败毒丸中大黄素和大黄酚的含量[J].中国中医药杂志，2007，5（11）：25-28.

[4] 刘春峰，杨秀峰，濮洪洲.高效液相色谱法测定太极升降口服液中大黄酚和大黄素的含量[J].中国民族民间医药，2011，20（6）：26-27.

[5] 周嘉裕，汤佳，廖海，等.大黄、制何首乌中大黄素和大黄酚的提取与含量测定[J].时珍国医国药，2008，19（5）：1056-1057.

[6] 虞晓升，骆惠青，王春甫，等.HPLC法测定利胆消石片中大黄素、大黄酚的含量[J].现代中药研究与实践，2011，25（4）：61-63.

[7] 刘善新，马毅，钟方晓，等.HPLC法测定复方大黄利胆片中大黄素、大黄酚的含量[J].中国实验方剂学杂志，2007，13（12）：13-14.

Content Determination of Chrysophanol in Bright Pearl Oral Liquid by HPLC

Chen Yuexia，Wang Jun，Cai Yalan，Cao Dongmei，Hong Liping，Zhu Jiali（Yangtze River Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Jiangsu Taizhou 225500，China）

Objective：To establish a method for determining chrysophanol in bright pearl oral liquid.Methods：Agilent XDB-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）column was used with acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution（70∶30）as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and column temperature was maintained at 30℃.The detection wavelength was set at 288 nm.Results：The calibration curve was linear within the range of 0.106 3～0.637 8 μg for chrysophanol.The average recovery was 98.87% （RSD was 1.3%，n=6）.Conclusion：The method is reproducible，sensitive and accurate for the determination of chrysophanol in bright pearl oral liquid.

Bright Pearl Oral Liquid；Chrysophanol；Content Determination；HPLC

10.3969/j.issn.1672-5433.2013.12.005

2013-05-06）

陈月霞，女，硕士。研究方向：药物分析。通讯作者E-mail：624963144@qq.com