甲苯磺酸索拉非尼片剂含量测定方法研究

刘冰松，袁昕蓉

(1.辽宁中医药大学附属第四医院，辽宁 沈阳 110101;2.辽宁省沈阳市食品药品检验所，辽宁 沈阳 110013)

甲苯磺酸索拉非尼是一种多激酶抑制剂，能够抑制肿瘤细胞的生长，临床用于治疗不能手术的晚期肾细胞癌及远处转移的原发肝细胞癌。其治疗的耐用性良好，主要的不良反应为可控制的腹泻、皮疹、疲乏、手足综合征、高血压、脱发、恶心呕吐和食欲不振。美国食品和药物管理局快速批准了甲苯磺酸索拉非尼作为晚期肾癌治疗的新药，也是世界上第一个批准应用于临床的多靶点靶向治疗药物。笔者参阅文献[1]采用高效液相色谱(HPLC)法测定自制甲苯磺酸索拉非尼片剂的含量，为甲苯磺酸索拉非尼及其制剂的进一步研究开发提供有效的检测方法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(安捷伦仪器公司);AUW220D型分析天平(岛津仪器制作所);KQ－300型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。甲苯磺酸索拉非尼原料(自制，纯度为99.6%，批号为20111208);甲苯磺酸索拉非尼工作对照品(自制，纯度为 99.8%，干燥失重 0.21%，批号为 20111201);甲苯磺酸索拉非尼片(自制，批号分别为 20111212，20111213，20111214);甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，水为重蒸馏水，磷酸二氢钾、磷酸等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Eclipse C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相:25 mmol/L磷酸盐缓冲液(磷酸调pH=2.5)－甲醇(30∶70);检测波长:250 nm;流速:1 mL/min;进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

取甲苯磺酸索拉非尼工作对照品，配制成质量浓度为每1 mL中含甲苯磺酸索拉非尼0.1 mg的对照品溶液。取按处方配制不含甲苯磺酸索拉非尼的空白辅料，精密称定，用流动相制成阴性对照品溶液。取自制甲苯磺酸索拉非尼片适量(约相当于甲苯磺酸索拉非尼1.0 g)，精密称定，溶解后置100 mL容量瓶中，流动相定容，滤过，取续滤液加流动相稀释10倍，摇匀，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:分别取对照品溶液、阴性对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果见图1。

图1 高效液相色谱图

最低检测限和定量限确定:当信噪比为3∶1时，最低检出限为0.25 ng/mL;当信噪比为10∶1时，定量限为1 ng/mL。

精密度试验:在上述色谱条件下，取对照品溶液，连续进样6次，每次进样20 μL。结果色谱峰面积 RSD为0.40%。

线性关系考察:取甲苯磺酸索拉非尼工作对照品约25 mg，精密称定，溶解后置25 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，再分别精密吸取 0.1 mL，置 50 mL 容量瓶中，取 0.1，0.5，1.0，1.5，2.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，分别取各稀释液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以甲苯磺酸索拉非尼质量浓度(X)为横坐标、色谱峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，回归方程为 Y=97.798 X－5.876 2，r=0.999 9(n=6)。结果表明，甲苯磺酸索拉非尼质量浓度在 5.1 ～200.1 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

加样回收试验:分别取甲苯磺酸索拉非尼工作对照品和甲苯磺酸索拉非尼片适量(相当于样品含量测定项取样量的80%，100% ，120%)，精密称定，配制成供试液，用 0.45 μm 微孔滤膜过滤，备用。取上述供试液各20 μL进样，记录色谱图。按外标法以峰面积计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

稳定性试验:取甲苯磺酸索拉非尼片适量，按供试品溶液的制备方法操作，制成的供试品溶液于室温条件下放置，分别在0，2，4，8，24 h 时各进样 20 μL。结果峰面积值 RSD 为 0.39%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4 样品含量测定

取工作对照品和3批自制片剂各适量，按溶液制备项下方法制备供试液，进样分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。3批样品的含量测定结果见表2。

表2 甲苯磺酸索拉非尼片含量测定结果(%)

3 讨论

甲苯磺酸索拉非尼作为第一个被美国食品和药物管理局批准用于治疗晚期肾细胞癌的靶向药物，已经成为备受关注的研究对象。本试验中采用高效液相色谱法测定自制甲苯磺酸索拉非尼片的含量，并进行了方法学研究，结果显示，该法可准确用于本品含量测定，为该药的进一步研究开发提供了有效的质量检测方法。

[1]黄自通.HPLC法测定索拉非尼含量及有关物质[J].黑龙江科技信息，2007(19):148，217.