贵阳地区1 143例孕妇地中海贫血筛查及基因检测结果分析＊

马星卫，许 吟，戴 薇，李贵芳，刘兴梅，陈铭希，苏 莉，黄盛文△

（贵州省人民医院：1.产科；2.检验科，贵阳550002）

地中海贫血（简称地贫）是一类由于珠蛋白合成障碍而引起的慢性溶血性疾病。根据合成障碍的珠蛋白类型，地贫主要分为α-地贫和β-地贫。据估计，全球约有1.7%的人是α-地贫或β-地贫基因携带者，每10 000出生活婴就有4.4个地贫患者［1］。迄今，对地贫尚无理想的治疗方法，开展产前筛查和产前基因诊断，防止新的受累胎儿出生，仍是目前控制地贫发生最为有效的措施［2-3］。为了解贵阳地区孕妇人群的地贫发生情况，并探讨地贫产前筛查的临床意义，作者对本院1 143例孕妇产前地贫筛查和基因诊断的结果进行分析报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象 2010年6月至2012年3月在本院产科门诊进行孕期保健的孕妇1 143例，均为贵阳户籍，年龄19～41岁，平均（28.3±3.8）岁。

1.2 筛查方法 采用红细胞指数分析结合血红蛋白电泳检测，筛查地贫表型阳性的孕妇。如MCV＜82fL和／或MCH＜27pg，列为重点筛查对象。再按血红蛋白电泳结果进行表型分析，如 HbA2≥3.5%，HbF正常或增高，拟诊为β-地贫；如HbA2≤2.5%，拟诊为α-地贫；如 HbA2在2.5%～3.5%之间，拟诊为α-地贫或β-地贫，或α复合β-地贫，统称为α／β-地贫。

1.3 基因诊断 对地贫表型阳性的孕妇，抽取外周静脉血2 mL，EDTA-Na2抗凝，按试剂盒操作说明提取基因组DNA，进一步做基因检测以明确基因型。（1）α-地贫基因诊断：应用跨越断裂点聚合酶链反应（Gap-PCR）检测--SEA、-α4.2和-α3.73种常见α-珠蛋白基因缺失突变，应用反向点杂交（reverse dotblot，RDB）检测αCS、αQS和αWS3种常见的α-珠蛋白基因点突变。（2）β-地贫基因诊断：应用RDB检测中国人8种常见和9种少见的β-珠蛋白基因点突变，依次为CD41-42（-TCTT）、IVS-Ⅱ-654（C→T）、CD71-72（＋A）、CD17（A→T）、CD26（G→A）、-28（A→G）、-29（A→G）、CD43（G→T）、CD31（-C）、CD14-15（＋C）、Int（T→G）、CD27-28（＋C）、IVS-Ⅰ-1（G→T）、IVS-Ⅰ-5（G→C）、-32（C→A）、-30（T→C）、CAP＋40―＋43（-AAAC）。PCR扩增仪为E-CyclerTM96PCR仪，试剂购自深圳益生堂生物企业有限公司，具体操作步骤按说明书进行。

2 结 果

2.1 筛查结果 1 143例孕妇经MCV和MCH筛查表型阳性68例（5.95%）。经血红蛋白电泳分析，拟诊为α-地贫19例（1.66%），拟诊为β-地贫41例（3.59%），拟诊为α／β-地贫8例（0.70%），见表1。另外，筛出异常血红蛋白2例，分别是HbJ和HbG各1例。

表1 1 143例孕妇地贫筛查情况

2.2 基因诊断 68例地贫表型阳性的孕妇经基因检测，有63例（5.51%）确诊为地贫，确诊率为92.65%，其中表型为β-地贫的确诊率最高（97.62%）。8例表型为α／β-地贫的孕妇，有6例均确诊为α-地贫，未检测出α复合β-地贫，见表1。63例地贫孕妇的基因型分布见表2，其中α-地贫23例（2.01%），β-地贫40例（3.50%）。23例α-地贫中，静止性8例，标准型15例，基因型以--SEA／αα最多，占60.9%。40例β-地贫均为轻型，基因型以CD17／N最多，占45.0%，其次是CD41-42／N和IVS-Ⅱ-654／N，分别占27.5%和15.0%。

表2 63例地贫孕妇基因型分布情况

3 讨 论

中国南方各省是地贫的高发区，其中广东、广西两省的α-和β-地贫总发生率分别为11.07%［4］和25.30%［5］。贵州也属地贫的高发区，该地区β-地贫的发生率已基本清楚，不同民族的发生率为2.66%～7.85%［6-8］，与本调查结果（3.50%）相吻合。目前，还没有关于贵州省α-地贫发生率的大样本调查结果。本课题组前期关于贵阳地区新生儿α-地贫发生率的初步调查结果为2.63%［9］，略高于本研究的结果（2.01%），这可能与调查的人群不同有关。

本研究结果显示，贵阳地区α-地贫基因型以缺失型为主，其中--SEA／αα基因型占60.9%，与国内其他地区的α-地贫基因突变类型类似［10-12］。本组数据表明，贵阳地区的β-地贫基因突变类型以CD17（A→T）最多，其次是CD41-42（-TCTT）和IVS-Ⅱ-654（C→T），与国内其他地区的β-地贫基因突变类型明显不同。广东［4，12］、广西［13］β-地贫基因突变类型以 CD41-42（-TCTT）最多，在海南黎族人中，β-地贫基因突变几乎全是CD41-42（-TCTT）［14］。这表明即使是在国内，不同地域和人群的β-地贫基因突变谱的构成也不尽相同。

本组调查人群中的地贫表型阳性率为5.95%，确诊率为92.65%，说明红细胞指数分析结合血红蛋白电泳检测是地贫筛查的有效方法，尤其是MCV、MCH和HbA2定量检测是β-地贫筛查的可靠血液学指标。本组中有5例表型阳性的孕妇未检测出相应的珠蛋白基因突变位点，这可能是缺铁性贫血或存在罕见突变类型所致。因此，对于这类孕妇需要了解是否存在缺铁性贫血，同时应进一步作珠蛋白基因序列分析，排除罕见突变类型。

虽然目前还没有治疗地贫的有效方法，但地贫是可以预防的遗传性疾病。进行产前筛查和产前基因诊断，完全可以避免中、重型地贫患儿的出生。自20世纪70年代开始，塞浦路斯政府强制实施婚前和产前筛查，已使重型地贫患儿的出生率几乎降为零。在中国的广东、广西地区，也在广泛开展婚前和产前筛查，对减少重型地贫患儿的出生起到了积极作用。贵阳地区作为地贫高发区，在地贫的预防工作方面还处于起步阶段，应尽快建立地贫产前筛查和产前诊断网络，对孕妇人群开展以红细胞指数分析和血红蛋白电泳技术为主的产前筛查工作，表型阳性的样本交由有条件的医院进一步作基因诊断和产前诊断，避免重型地贫患儿的出生。

［1］Rund D，Rachmilewitz E.Beta-thalassemia［J］.N Engl J Med，2005，353（11）：1135-1146.

［2］沈寅琛.南宁地区14 768例优生与遗传咨询者的分析［J］.中国优生与遗传杂志，2009，17（1）：120-124.

［3］朱慧明.24 743例婚检人群地中海贫血筛查情况分析［J］.中国妇幼保健，2011，26（23）：3598-3599.

［4］Xu XM，Zhou YQ，Luo GX，et al.The prevalence and spectrum ofαandβthalassaemia in Guangdong province：implications for the future health burden and population screening［J］.J Clin Pathol，2004，57（5）：517-522.

［5］张新华，周英杰，李平萍，等.广西南宁市农村育龄人群地中海贫血筛查及基因型和血液学参数分析［J］.中华流行病学杂志，2006，27（9）：769-772.

［6］单可人，张宏秀，惠春林，等.贵阳地区孕期夫妇β-地中海贫血血液学筛查及基因突变分析的研究［J］.中国实用妇科与产科杂志，2002，18（9）：543-544.

［7］单可人，谢渊，马娇，等.贵州从江侗族和江口土家族人群β-地中海贫血基因突变型的研究［J］.中国地方病学杂志，2005，24（5）：526-529.

［8］喻芳，钟春琍，周强，等.贵州少数民族地区β地中海贫血的分子流行病学研究［J］.中华医学遗传学杂志，2010，27（6）：700-703.

［9］李贵芳，周曼，许吟，等.贵阳市532例新生儿脐血α-地中海贫血筛查［J］.中国妇幼保健，2011，26（1）：40-41.

［10］王莉，徐酉华.重庆地区α地中海贫血基因型研究［J］.重庆医科大学学报，2009，34（8）：1051-1053.

［11］余永雄，黄丽，陈唯.梧州婚配群体的α地中海贫血携带者筛查与基因诊断分析［J］.重庆医学，2012，41（10）：1002-1003.

［12］褚玉新，王晓春，胡朝晖.广东省β-地中海贫血基因突变类型研究［J］.中国地方病学杂志，2010，29（2）：162-166.

［13］朱凌，罗瑞贵，周天红，等.广西地区β地中海贫血基因突变类型分析［J］.华南国防医学杂志，2009，32（2）：41-43.

［14］周代锋，蔡望伟，蔡兰洁，等.海南省黎族人4种β地中海贫血基因突变的研究［J］.海南医学院学报，2001，7（1）：4-7.