高效液相色谱法测定红宝散中欧前胡素的含量

王 舒 王苗苗 吕述丽

（吉林省吉林市食品药品检验所，吉林132001）

高效液相色谱法测定红宝散中欧前胡素的含量

王 舒 王苗苗 吕述丽

（吉林省吉林市食品药品检验所，吉林132001）

目的 采用高效液相色谱法测定红宝散中欧前胡素的含量。方法 采用HPLC法，Apollo-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇-水（55∶45），流速为1.0mL·min-1，紫外检测波长为300nm，柱温为室温。结果 欧前胡素进样量在0.0300～0.2000ug线性关系良好，r=0.9999，平均回收率99.68%，RSD=0.35%。结论 本方法准确、简便、快速，可作为红宝散中欧前胡素的含量测定。

高效液相色谱法；红宝散；欧前胡素

红宝散由白白芷、红花、紫草等14味中药制成的散剂。具有祛瘀止痛、止强筋壮骨之功效［1］。该制剂为成方制剂，无含量测定方法。为了有效控制药品质量，提高该制剂的质量标准，本文采用高效液相法测定欧前胡素的含量，结果表明，该方法、准确、简便、可行，可供该制剂质量控制参考。

1 仪器与试药

LC-2010A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站；欧前胡素对照品（批号：110826-200511置五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时以上使用）欧前胡素，由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；红宝散为市售样品（吉林市皇城股骨头专科医院，批号：120401，120402，120403）。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件Apollo C18柱（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；甲醇-水（55∶45），流速为1.0mL·min-1；检测波长300nm；柱温室温。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成0.0500mg·ml-1的对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成10.00μg·ml-1的对照品溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约6.0g，精密称定；置50ml量瓶中，加甲醇45ml，超声处理（功率300W，频率50k Hz）1小时，取出，放冷，再加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得［2］。

2.2.3阴性样品溶液的制备因实验室只能做小量的样品，所以按处方量将取样量减量，取除白芷以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成散剂，再按供试品溶液制备方法，制成阴性样品溶液。

2.3专属性试验分别精密吸取供试品溶液、阴性样品溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间（欧前胡素42.511min）的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。

图1 红宝散HPLC色谱图

2.4线性关系考察精密吸取对照品溶液（10.00μg· ml-1）3、5、10、15、20μl，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积为纵坐标，其进样量为横坐标，得的回归方程为：Y=1E+7X+553.23，r=0.9999（n=5），结果表明，欧前胡素进样量在0.0300～0.2000ug范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5稳定性试验精密吸取欧前胡素对照品溶液（10.00ug·ml-1），按“2.1”项下色谱条件分别在0、4、8、12、24h测定，结果表明欧前胡素对照品溶液在24h内稳定，RSD为0.8%。

2.6重复性试验取供试品（批号120401），共5份，分别按“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进行测定，求得欧前胡素含量的RSD为0.7%，表明重现性较好。

2.7精密度试验精密吸取欧前胡素对照品溶液（10.00ug·ml-1）10μl，按“2.1”项下色谱条件重复进样5次测定，计算葛根素面积的相对标准偏差（RSD）为0.6%，表明精密度较好。

2.8加样回收率试验精密称取已知含量的样品（批号120401，欧前胡素含量0.108mg·g-1）约1g，共6份，分别置50ml容量瓶中，分别精密加入欧前胡素对照品储备液（0.0500mg·ml-1）10ml、12ml、15ml各2份混匀后按“2.2.2供试品溶液的制备”方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。

2.9样品含量的测定精密称取3个批号的样品（每批号2份），按“2.2.2供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定三批样品中欧前胡素的峰面积，按外标法计算其含量，结果见表2。

表1 欧前胡素加样回收率试验

表2 3批样品含量测定结果

3 讨论

通过对3批样品中欧前胡素的测定，结果表明最高含量为0.108mg·g-1，最低为0.098mg·g-1，综合考虑确定限量每克含欧前胡素不得低于0.528mg。

流动相的选择：试验中采用不同的流动相：甲醇-水（50∶50），甲醇-水（55：45），甲醇-水（60：40），结果表明采用流动相甲醇-水（55∶45）的色谱图基线较平稳，分离效果较好。

该方法简便、准确，重复性好，可供该制剂质量控制参考。

［1］吉林省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准［J］.JLZJ-ZB-0019-2006，2006：1.

［2］国家药典委员会.《中国药典》年版一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：97.

杏仁——止咳之王

【歌诀】

杏仁数王在止咳，

性温润燥解肌热。

咳喘便秘行痰泄，

寒热虚实止咳歇。

【释义】 中药治疗咳嗽气喘首选杏仁。杏仁其性温，味苦降泄，肃降并宣发肺气而能止咳平喘；苦而能燥，能化痰饮；又其质润多脂，味苦下气，故能润燥而行大便。无论寒热虚实之咳嗽气喘，杏仁皆可用之。

【药解】 杏仁为蔷薇科植物山杏Prunues armeniaca L.var.ansu Maxim.西伯利亚杏P.sibirica L.东北杏P.mandshurica（Maxim.）Koehne或杏P.armeniaca L.的成熟种子。

性味归经：苦杏仁：苦，微温。甜杏仁：甘，平。有小毒。归肺、大肠经。

功效：止咳平喘，润肠通便。

主治：①用于咳嗽气喘。②用于肠燥便秘。

用法用量：煎服，9～15g。或入丸、散。

各家论述：

l.《本草拾遗》：“杀虫。以利喉咽，去喉痹、痰唾、咳嗽、喉中热结生疮。”

2.《珍珠囊药性赋》：“除肺热，治上焦风燥，利胸膈气逆，润大肠气秘。”

3.《本草便读》；“功专降气，气降则痰消嗽止。能润大肠，故大肠气秘者可用之。”

【常用药类】 苏子降气化痰，泻肺平喘；前胡用于热证之咳喘；麦冬滋阴，润肺，多用于肺燥之咳喘；葶苈子泻肺平喘，利水消肿。

【临证应用】 杏仁有甜杏仁和苦杏仁之分，两者功效类似，但甜杏仁较苦杏仁药力缓和，苦杏仁偏降气止咳，而甜杏仁偏于润肺止咳。杏仁治疗风寒咳嗽，胸闷气逆，则配伍麻黄、甘草，以宣肺平喘，如三拗汤；用于风热感冒时则配伍桑叶、菊花，如桑菊饮；治疗燥热咳嗽，痰少难咳，配伍桑叶、贝母、沙参等，如桑杏汤；若用于治疗肠燥便秘，则与柏子仁、郁李仁等同用，如五仁丸。本品含有毒成分氢氰酸，故临证使用时应当注意用量不宜过大。

——摘编自人民军医出版社《临证药王歌诀》

De t e r mination o f Imp e r a t o rin in Ho ng Bao p o w d e r b y HPLC

Wang Shu Wang M iaomiao Lu Shuli
（Jilin Institute for Food and D rug Control，Jilin 132001，China）

ObjectiveTo establish a method for the determination of Imperatorin in Hong Bao powder.Methods HPLCmethod was used to determine the content.The column was Apollo-C18（250 mm×4.6 mm，5μm），and the mobile phase：methanol-water（55∶45）.The flow rate was 1.0 mL·min-1and the detective wavelength was 300nm.Results The calibration curve of Imperatorin was linear in the range of 0.0300～0.2000μg（r=0.9999），the average recovery was 99.68%，RSD=0.35%.Conclusion The method is accurate with good reproducibility and can be used for the content determination of Imperatorin in Hong Bao powder.

Hong Bao powder；Lmperatorin；HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.08.101

1672-2779（2013）-08-0149-02

韩世辉

2013-03-13）