正交法优选青乳合剂的水提工艺

谭泳怡 曾聪彦 梅全喜 梁 食

（广州中医药大学附属中山中医院，中山市528400）

正交法优选青乳合剂的水提工艺

谭泳怡 曾聪彦 梅全喜 梁 食

（广州中医药大学附属中山中医院，中山市528400）

目的 优选青乳合剂的最佳水提工艺。方法 采用4因素3水平正交设计，高效液相色谱法测定芍药苷含量，以提取物中芍药苷的含量为检测指标，筛选出青乳合剂的优化提取条件。结果 青乳合剂最佳水提工艺为A3B1C3D2，即药材加10倍量的水，浸泡0.5h，煎煮2次，每次1.5h。结论 经正交设计优化的青乳合剂的水提工艺可行。

青乳合剂；正交试验；提取工艺

青乳合剂是在我院临床使用多年的有效经验方基础上制成的，现已取得药品监督管理部门颁发的制剂生产批文（批准文号：粤药制字Z20110121），该制剂是由赤芍、蒲公英、王不留行、乳香、没药、桃仁、小茴香等13味中药组成，具有清热祛湿，疏肝理气，活血止痛，适用于肝郁气滞、湿热夹瘀型精浊、精癃、前列腺癌、淋症等，即现代的慢性非细菌性前列腺炎，前列腺增生症等。根据青乳合剂方中药材的现有化学、药理等研究资料，同时考虑医院中药制药业生产的特点，配制工艺采用“原方水提并收集挥发油—浓缩—配液—灌装成型”设计，以上水提工艺的合理与否将直接影响成品质量，进而影响临床疗效，因此采用正交试验法，以芍药苷含量为指标，对本方进行以上水提工艺优选试验研究也是非常有必要的。现将试验研究情况报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器美国Agilent 1100系列高效液相色谱仪；BS -224S电子天平（德国赛多利斯）；电热恒温水浴锅（上海衡平仪器仪表厂）；电热恒温干燥箱（广东方红医疗器械分厂）。

1.2试药芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110736-200424）；甲醇为色谱纯（product of Tedia，United States of America）；其余所用试剂均为分析纯。所用赤芍、蒲公英、王不留行、乳香、没药、桃仁、小茴香等药材均为饮片，购自广东广弘药材有限公司；水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1正交设计依据中药水提经验，确定加水量、浸泡时间、煎煮时间和煎煮次数为影响水提效果的主要因素，每个因素各选取3个水平。选用L9（34）正交表安排试验，取方中需水提药材中主要指标成分芍药苷含量为考察指标，并用直观法和方差分析法分析其结果。因素水平表见表1。

表1 实验因素和水平表

2.2正交试验

2.2.1样品制备取处方量1／10药材按正交实验安排，加水浸泡，提取，过滤，滤液定容至100mL，作供试样品备用。

2.2.2供试品溶液的制备取“3.2.1项”下滤液10mL，置蒸发皿中，于水浴上蒸干，加甲醇约5ml，超声处理（功率150W，频率20k Hz）5min使溶解，并用甲醇洗净置蒸发皿，溶液定容至10mL的量瓶中，摇匀，滤过，取滤液，即得。

2.2.3对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.4色谱条件色谱柱：Phenomenex luna C18柱（250mm×4.60mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（14：86）；检测波长为230nm；体积流量：1.0 mL· min-1；柱温：25℃。见图1。

2.2.5线性关系考察分别精密吸取对照品溶液2、5、10、20、30μL注入液相色谱仪，按“2.2.4”色谱条件测定，记录峰面积，以对照品进样量（X，μg）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=1.022×106X+1004，r=0.9994，表明芍药苷在0.12～1.8μg有良好的线性关系。

图1 高效液相色谱图

2.2.6样品中芍药苷含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3试验结果与分析

3.3.1试验结果正交试验测定结果见表2，方差分析见表3。

表3 正交试验实验数据表（n，%）

表2 正交试验设计及结果

表2 正交试验设计及结果

试验号A B C D芍药苷含量（mg／mL）1 1 1 1 1 0.457 2 1 2 2 2 0.640 3 1 3 3 3 0.659 4 2 1 2 3 0.717 5 2 2 3 1 0.569 6 2 3 1 2 0.608 7 3 1 3 2 0.751 8 3 2 1 3 0.723 9 3 3 2 1 0.565均值1 3.084 3.706 3.197 2.531均值2 3.587 3.733 3.694 3.996均值3 4.158 3.356 3.916 4.006极差（R）0.013 0.002 0.006 0.048

3.3.2极差方差分析由表2极差R值可知，RD＞RA＞RC＞RB，影响因素大小顺序为D＞A＞C＞B，即煎煮次数是影响芍药苷含量的重要因素，B因素浸泡时间影响最小。而由表3也可看出，D因素即煎煮次数有显著性差异，而其它三个因素对芍药苷含量的影响都无显著性的意义。

3.3.3实验结果综合分析通过直观分析和方差分析可以看出，D因素即煎煮次数为主要影响因素，对试验结果具有显著性影响，应取其好的水平为B3。其它A、B、C三因素均为次要影响因素，对试验结果的影响无显著意义，且B因素浸泡时间影响最小，浸泡0.5小时与1小时结果的差别很小，因此选择浸泡0.5小时。因此，最佳工艺条件为，即原方药材加10倍量的水，浸泡0.5小时，煎煮3次，每次1.5小时，由于煎煮3次与煎煮2次芍药苷含量差别不大，为节约生产成本，最佳工艺条件定为A3B1C3D2，即原方药材加10倍量的水，浸泡0.5小时，煎煮2次，每次1.5小时。

3.3.4验证试验为进一步确定此提取工艺的合理，按照1／10处方量称处方药材3份，按照正交试验优选的最佳工艺条件A3B1C3D2进行加水浸泡，提取，过滤，定容，按前述方法测出芍药苷含量，其结结果分别为：0.66，0.69，0.71。由结果可见，优化工艺提取得的芍药苷成份含量的结果均与正交试验结果一致，说明此提取工艺条件基本稳定。

4 讨论

青乳合剂是在其汤剂基础上改进而成，在其提取工艺的筛选试验中，根据处方药材所含成分理化性质的不同，有针对性地将提取工艺定为水提和挥发油提取，能够使药材的有效成分得以保留，更好地发挥药效。

在水提工艺优选中，由于药材众多，笔者曾尝试用桃仁中的苦杏仁苷作为考察指标，但在试验过程中发现阴性对照有干扰，而采用赤芍中芍药苷作为考察指标时，阴性对照无干扰，故本制剂水提工艺优选以芍药苷作为考察指标。此外，现代药理研究表明，芍药苷有明显的抗血栓、抗炎、抗伤害性疼痛的作用［2］，这与青乳合剂有活血止痛作用的功效相同，应为该制剂中主要有效成分之一，故选择芍药苷作为工艺优选的考察指标是合理、可行的。

青乳合剂处方中药材水提工艺的好坏将直接影响到临床应用效果，综合上述水提工艺研究结果，确定该药中需水提药材最佳提取工艺为A3B1C3D2，即原方13味药材加10倍量水，浸泡0.5小时，煎煮2次，每次1.5小时。经实验证明，按上述优选提取工艺制备，制剂中有效成分的提取率高，从而为青乳合剂提取工艺的优选路线提供了参考依据。

［1］孙丽荣，曹雄，侯凤青，等.芍药苷研究进展［J］.中国中药杂志，2008，33（18）：2028-2032.

水调歌头——汤头拾趣

竹叶柳蒡道，泰山磐石边。龟鹿二仙兴至，逍遥桂枝前。更有四君三子，大小青龙共舞，玉女伴天仙。阳和桃花笑，碧云牡丹妍。

酥蜜酒，甘露饮，八珍餐。白头翁醉，何人送服醒消丸？凉膈葛花解酲，保元人参养荣，回春还少年。四海疏郁罢，常山浴涌泉。

注：词内含汤头三十个，依次为：竹叶柳蒡汤、泰山磐石散、龟鹿二仙胶、逍遥散、桂枝汤、四君子汤、三子汤、大青龙汤、小青龙汤、玉女煎、天仙藤散、阳和汤、桃花汤、碧云散、牡丹皮散、酥密膏酒、甘露饮、八珍汤、白头翁汤、何人饮、醒消丸、凉膈散、葛花解酲汤、保元汤、人参养荣汤、回春丹、还少丹、四海疏郁汤、常山饮、涌泉散。

St u d y on Ext r a c tion Pr o c e ss f o r Qin g r u Mixt u r e wit h Or t ho g onal Tes t

Tan Yongyi Zeng Congyan M eiQquanxi Liang Shi
（Zhongshan Hospitalof TCM Affiliated University of TCM of Guangzhou，Zhongshan 528400，China）

ObjectiveTo study the optimized extraction process of Qingru Mixture.Methods An orthogonal experimental design L9（34）test was adopted in this study.And the content of paeoniflorin was determined to fit its quality standard，screening out the best method of extraction conditions. Results The best extracting technical extractions were as follows：ten times amount of water，0.5h of soaking period，extracting twice by relux，1.5 hours for each time.Conclusion The process choosed in this experiment is practicable and can be applied for preparation of Qingru Mixture.

Qingru Mixture；Orthogonal test；Extract technolog；Paeoniflorin

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.08.100

1672-2779（2013）-08-0147-02

韩世辉

2013-03-03）