■陈海荣 冉江华 白光耀
(1.贵州大学动物科学学院,贵州贵阳 550025;2.贵州大学生命科学学院,贵州贵阳 550025)
淫羊藿(icariin,ICA)是小柴科(Berberidaeae)淫羊藿属(Epimedium)植物中的一种黄酮苷类化合物,现代研究表明,淫羊藿的化学成分主要为黄酮、木酷素、生物碱和多糖,此外还有棕搁酸、硬脂酸、油酸、亚麻酸等[1-2],黄酮类成分主要是淫羊藿苷和金丝桃苷。淫羊藿始载于《神农本草经》,为淫羊藿(Epimedium grandaflonunMorr),心叶淫羊藿(Epimediurn brevicornurn Maxim)或箭叶淫羊褚藿(inuadiurn sagittaturn Sieb.etZuccMaxim)的 茎 叶[3]。全世界的淫羊藿属植物有40余种,主要分布在亚洲、中东和欧洲的温带和亚热带地区。在我国有20多种,分布区域主要在中国、日本森林植物亚区和中国-喜玛拉雅森林植物亚区的林下、灌丛中或阴湿地,通常海拔多在200~3 700 m[4]。
淫羊藿具有补肾助阳、强筋健骨、祛风除湿、洗疮杀虫、消疲化痛之功效[3]。淫羊藿苷作为其主要有效成分之一,近年来吸引了国内外众多学者的关注,并对其药理作用进行了深入而广泛的研究。迄今的结果,发现淫羊藿苷的主要生理活性在于改善心脑血管系统功能,增强机体免疫力及调节内分泌,同时还具有抗肿瘤、抗肝毒、抗缺氧、再氧合和健骨等药理活性作用[5-10]。本试验通过在贵妃鸡的饮水中添加不同浓度的淫羊藿水煎液,观察其对胃肠道发育的影响,为淫羊藿在畜牧生产中应用提供实验依据。
1.1.1 动物
一日龄贵妃鸡400只,公母各半,购自某特种养殖场。
1.1.2 药材
淫羊藿提取物,8倍浓缩,宣城百草植物工贸有限公司生产,批号20120126。
1.1.3 主要仪器
YR6000电子天平、手术剪、手术刀、镊子、尺子、平皿等。
1.2.1 分组与给药
将400只14日龄贵妃鸡随机均分4组,每组设2个重复,分别为饮用淫羊藿提取物Ⅰ(2 g/l)、Ⅱ(1 g/l)、Ⅲ(0.5 g/l)浓度组和Ⅳ(饮用自来水),连续给药至56日龄。饲料购自新希望饲料有限公司,每千克饲料含地克珠利5 mg,产品成分分析见表1。
1.2.2 免疫
7日龄用鸡新城疫Ⅳ系疫苗,按照规定剂量滴鼻滴眼,14日龄时颈部皮下注射新城疫,传染性法氏囊油乳剂每只各0.3 ml。
1.2.3 饲养管理
饲养管理采用立体笼养,自由采食、饮水。白天自然光照,夜间采用灯光照明,保持卫生和通风。
1.2.4 观察指标
分别于鸡28、35、42、49、56日龄时早晨空腹随机抽样8只,公母各半,称重,心脏采血处死后迅速摘取腺胃、肌胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠,分别测定腺胃、肌胃重量(g,测量前应除去内容物)及5段肠管的长度(cm)和重量(g,测量前应除去肠内容物);计算胃肠道各段的相对重、单位肠重。
相对胃肠重(%)=胃肠重(g)/体重(g);
单位肠重(g/cm)=肠重(g)/肠长度(cm)。
1.2.5 数据处理
从表2中可见,与对照组比较,4~5周龄各剂量组十二指肠长度差异均不显著(P>0.05);5周龄中剂量组十二指肠重量降低,相对肠重均降低(P<0.05);6周龄小、大剂量组十二指肠长度均增加(P<0.05),小剂量组十二指肠重量降低(P<0.05),相对肠重及单位肠重均降低(P<0.05);中剂量组单位肠重降低(P<0.05);7周龄大剂量组十二指肠长度降低(P<0.05),中、大剂量组相对肠重降低(P<0.05),各剂量组单位肠重无明显变化;8周龄中、大剂量组十二指肠长度降低(P<0.05),相对肠重降低(P<0.05),各剂量组单位肠重无明显变化。
表2 淫羊藿对贵妃鸡十二指肠生长发育的影响(±SD,n=8)
表2 淫羊藿对贵妃鸡十二指肠生长发育的影响(±SD,n=8)
注:与对照组比较*P<0.05,**P<0.01,下表同。
周龄(w)组别给药浓度(g/l)4 2 1 0.5 5 0 2 1 0.5 6 0 2 1 0.5 7 0 2 1 0.5 8ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣ0 2 1 0.5 0长度(cm)20.73±2.78 23.30±4.28 21.15±2.90 21.24±3.08 23.63±1.97 22.20±0.78 23.10±4.02 23.91±2.00 26.63±1.41*25.63±2.55 26.68±0.52*23.75±2.79 22.18±5.47*25.05±1.15 27.48±1.66 26.63±2.25 21.98±0.66*22.75±2.70*25.80±3.23 26.71±1.52重量(g)4.85±1.24 6.70±1.64 5.83±0.73 5.75±1.34 7.28±1.98 5.53±1.41*7.30±1.14 8.24±2.54 9.01±1.77 8.39±1.49 7.51±3.06*10.18±3.45 8.53±3.99 8.74±1.04 9.43±1.77 9.78±1.92 7.86±0.23 8.44±2.16 9.68±1.36 9.23±0.81相对重(%)1.26±0.40 1.40±0.30 1.60±0.50 1.41±0.50 1.28±0.22 1.00±0.31*1.25±0.24 1.52±0.35 0.99±0.11 1.09±0.17 0.93±0.31*1.21±0.39 0.83±0.17*0.74±0.02*0.92±0.14 1.01±0.25 0.62±0.10*0.65±0.13*0.73±0.06 0.75±0.06单位肠重(g/cm)0.23±0.05 0.29±0.07 0.28±0.06 0.27±0.05 0.31±0.06 0.25±0.06 0.32±0.05 0.34±0.10 0.34±0.07 0.33±0.04*0.28±0.11*0..42±0.09 0.37±0.08 0.35±0.03 0.35±0.08 0.37±0.07 0.36±0.02 0.37±0.05 0.38±0.04 0.35±0.03
从表3中可见,与对照组比较,4周龄大剂量组空肠长度及重量均降低(P<0.05);4~5周龄各剂量组相对肠重及单位肠重无明显变化;6周龄中剂量组空肠长度降低(P<0.05),中、小剂量组空肠重量降低,相对肠重降低(P<0.05);7周龄各剂量组相对肠重及单位肠重无明显变化;8周小剂量组空肠重量降低(P<0.05),相对肠重及单位肠重降低(P<0.05)。
表3 淫羊藿对贵妃鸡空肠生长发育的影响(±SD,n=8)
表3 淫羊藿对贵妃鸡空肠生长发育的影响(±SD,n=8)
周龄(w)组别浓度(g/l)4 2 1 0.5 5 0 2 1 0.5 6 0 2 1 0.5 7 0 2 1 0.5 8ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣ0 2 1 0.5 0长度(cm)38.18±5.95*40.55±4.29 47.15±3.39 44.74±3.34 49.48±9.13 44.93±6.56 47.80±6.30 48.78±5.05 52.09±3.09 47.35±0.65*48.38±2.97 55.53±6.00 51.59±5.46 59.59±11.75 54.98±3.36 52.08±7.87 49.98±3.56 52.66±2.83 49.23±3.98 49.35±4.89重量(g)6.88±1.69*8.35±1.33 8.88±0.67 9.46±1.85 10.75±2.76 9.70±4.91 11.28±1.66 11.28±2.19 18.39±0.92 13.13±0.90*12.99±1.16*17.28±5.44 13.90±5.32 16.60±3.96 14.75±3.09 15.38±1.66 16.48±3.15 17.74±2.09 13.51±1.34*17.49±2.96相对重(%)1.75±0.40 1.76±0.27 2.40±0.54 2.29±0.55 1.89±0.29 1.74±0.89 1.94±0.34 2.08±0.22 2.06±0.16 1.72±0.09*1.64±0.05*2.05±0.61 1.38±0.18 1.39±0.22 1.44±0.31 1.57±0.13 1.28±0.20 1.37±0.17 1.03±0.11*1.42±0.24单位肠重(g/cm)0.18±0.02 0.21±0.04 0.19±0.02 0.21±0.03 0.22±0.02 0.21±0.08 0.24±0.03 0.23±0.02 0.35±0.02 0.28±0.02 0.27±0.03 0.31±0.08 0.27±0.08 0.28±0.05 0.27±0.04 0.30±0.03 0.33±0.06 0.34±0.03 0.27±0.02*0.35±0.02
表4 淫羊藿对贵妃鸡回肠生长发育的影响(±SD,n=8)
表4 淫羊藿对贵妃鸡回肠生长发育的影响(±SD,n=8)
周龄(w)组别浓度(g/l)4 2 1 0.5 5 0 2 1 0.5 6 0 2 1 0.5 7 0 2 1 0.5 8ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣ0 2 1 0.5 0长度(cm)39.93±6.76 38.59±8.55 43.85±8.06 43.04±2.86 50.13±9.45 45.45±8.35 51.90±7.54 51.86±2.20 53.99±4.14 50.81±3.12 52.75±9.28 55.70±4.67 56.46±7.54 63.34±10.22 56.14±1.23 55.88±8.56 51.45±4.00 54.18±4.59 55.51±3.62 52.64±4.55重量(g)6.75±1.58 6.85±0.79 6.08±0.74 6.44±1.01 8.35±3.01 7.68±2.23 9.53±1.72 8.75±1.31 11.79±0.87 10.14±0.72*10.71±1.50*12.65±2.66 10.63±2.52 13.29±3.41 11.11±0.52 11.48±2.13 12.29±2.12 12.59±0.79 11.86±1.54 13.45±2.61相对重(%)1.77±0.65 1.45±0.22 1.63±0.35 1.56±0.36 1.45±0.30 1.38±0.41 1.64±0.37 1.63±0.24 1.33±0.24 1.33±0.08 1.35±0.06 1.50±0.27 1.08±0.02 1.12±0.20 1.09±0.11 1.16±0.13 0.95±0.04 0.98±0.15 0.91±0.16*1.09±0.21单位肠重(g/cm)0.17±0.03 0.18±0.03*0.14±0.01 0.15±0.02 0.16±0.03 0.17±0.06 0.18±0.02 0.17±0.02 0.22±0.03 0.20±0.01 0.21±0.04 0.23±0.05 0.19±0.02 0.21±0.03 0.20±0.01 0.21±0.02 0.24±0.06 0.23±0.01 0.21±0.04*0.25±0.03
从表4中可见,与对照组比较,4~5周龄各剂量组回肠长度及重量差异均不显著(P>0.05);4周龄中剂量组单位肠重增加(P<0.05);6周龄小、中剂量组重量均降低(P<0.05);8周小剂量组相对肠重降低(P<0.05),单位肠重降低(P<0.05)。
表5 淫羊藿对贵妃鸡盲肠生长发育的影响(±SD,n=8)
表5 淫羊藿对贵妃鸡盲肠生长发育的影响(±SD,n=8)
周龄(w)组别浓度(g/l)4 2 1 0.5 5 0 2 1 0.5 6 0 2 1 0.5 7 0 2 1 0.5 8ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣ0 2 1 0.5 0长度(cm)10.30±1.69 10.70±1.25 10.73±0.86 10.71±1.53 11.38±1.14 11.05±1.38 12.13±1.70 11.91±1.09 13.55±1.24 12.85±1.62 13.73±0.99 13.43±0.47 12.95±1.82 16.65±0.47*14.53±0.81 13.40±2.38 14.16±0.88 14.86±1.62 13.50±0.75 14.35±1.26重量(g)2.65±0.70 3.00±0.52 2.93±0.46 2.73±0.63 3.78±0.80 3.93±0.70 4.13±1.12 4.15±0.56 4.78±1.41 4.11±1.02 4.71±1.57 4.50±0.17 4.14±0.83 5.96±0.42 17.15±22.13*5.05±1.72 4.60±1.75 4.59±2.55 4.48±2.79 5.66±3.16相对重(%)0.68±0.23 0.64±0.15 0.79±0.23 0.65±0.11 0.68±0.18 0.70±0.09 0.71±0.22 0.78±0.17 0.52±0.11 0.54±0.12 0.59±0.17 0.54±0.06 0.42±0.02 0.51±0.05 1.48±1.74*0.52±0.18 0.37±0.16 0.35±0.17 0.35±0.10 0.46±0.06单位肠重(g/cm)0.27±0.10 0.28±0.06 0.27±0.04 0.25±0.05 0.33±0.07 0.35±0.03 0.34±0.09 0.35±0.06 0.36±0.13 0.32±0.07 0.34±0.09 0.34±0.02 0.32±0.03 0.36±0.03 1.12±1.38*0.38±0.11 0.33±0.13 0.30±0.14 0.33±0.07 0.39±0.04
从表5中可见,与对照组比较,4~6周龄各剂量组盲肠长度及重量差异均不显著(P>0.05);7周龄中剂量组盲肠长度及小剂量组重量均增加(P<0.05),小剂量组相对肠重增加(P<0.05),单位肠重增加(P<0.05);8周龄各剂量组盲肠长度及重量差异均不显著(P>0.05)。
从表6中可见,与对照组比较,4周龄大剂量组直肠重量增加(P<0.05);6周龄小剂量组直肠重量增加(P<0.05),相对肠重增加(P<0.05),7周龄中剂量组相对肠重降低(P<0.05);8周龄大、中剂量组相对肠重降低(P<0.05),中剂量组单位肠重降低(P<0.05);4~5周龄各剂量组相对肠重及单位肠重无明显变化;5、7、8周龄各剂量组直肠长度及重量差异均不显著(P>0.05)。
表6 淫羊藿对贵妃鸡直肠生长发育的影响(±SD,n=8)
表6 淫羊藿对贵妃鸡直肠生长发育的影响(±SD,n=8)
周龄(w)组别浓度(g/l)4 2 1 0.5 5 0 2 1 0.5 6 0 2 1 0.5 7 0 2 1 0.5 8ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣ0 2 1 0.5 0长度(cm)4.58±0.43 4.08±0.30 4.28±0.88 4.46±0.72 7.03±2.02 6.73±0.92 4.70±1.00 5.65±0.62 5.80±2.70 7.00±0.67 7.24±0.23 6.48±0.52 7.84±0.71 7.49±0.54 7.95±0.85 8.15±0.73 7.70±0.83 7.93±2.07 7.26±1.14 8.69±2.25重量(g)1.63±0.65*1.18±0.39 1.13±0.43 1.11±0.16 1.73±0.57 1.80±0.36 1.58±0.31 1.78±0.33 2.34±0.57 2.54±0.91 3.25±1.06*2.28±0.19 2.40±0.41 2.11±0.08 2.34±0.42 2.45±0.67 2.60±0.67 2.55±0.85 2.79±0.69 3.16±0.35相对重(%)0.42±0.21 0.25±0.09 0.29±0.09 0.27±0.07 0.30±0.06 0.32±0.06 0.27±0.07 0.34±0.09 0.26±0.04 0.34±0.13 0.41±0.14*0.27±0.05 0.25±0.02 0.18±0.01*0.23±0.02 0.25±0.06 0.20±0.05*0.19±0.05*0.21±0.06 0.26±0.03单位肠重(g/cm)0.35±0.13 0.29±0.019 0.26±0.06 0.25±0.04 0.25±0.10 0.27±0.03 0.34±0.03 0.32±0.06 0.22±0.01 0.50±0.26 0.37±0.17 0.45±0.16 0.31±0.04 0.28±0.01 0.29±0.02 0.30±0.07 0.34±0.07 0.31±0.05*0.38±0.04 0.37±0.03
表7 淫羊藿对贵妃鸡肌胃生长发育的影响(±SD,n=8)
表7 淫羊藿对贵妃鸡肌胃生长发育的影响(±SD,n=8)
周龄(w)组别浓度(g/l)4 2 1 0.5 5 0 2 1 0.5 6 0 2 1 0.5 7 0 2 1 0.5 8ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣ0 2 1 0.5 0重量(g)9.40±1.96 10.18±1.48 10.48±2.32 10.74±1.55 11.25±1.50 11.62±1.33 14.32±3.26 12.89±2.46 16.31±2.11 13.69±1.58 15.04±1.96 13.55±2.33 14.79±2.37 17.53±2.07 21.41±4.91*16.35±3.49 18.75±1.33 17.79±3.07 19.05±2.90 19.30±3.64相对重(%)2.38±0.44 2.14±0.29 2.84±0.95 2.58±0.36 2.02±0.35 2.10±0.36 2.45±0.56 2.41±0.47 1.82±0.10 1.80±0.08 1.77±0.16 1.88±0.20 1.51±0.11 1.54±0.13 1.47±0.04 1.83±0.58 1.56±0.41 1.44±0.35 1.42±0.14 1.38±0.12
从表7中可见,与对照组比较,4~6周龄及8周龄各剂量组肌胃重量差异均不显著(P>0.05);7周龄小剂量组肌胃重量增加(P<0.05);4~8周龄各剂量组相对重均无明显变化。
从表8中可见,与对照组比较,4~5周龄各剂量组腺胃重量差异均不显著(P>0.05);6周龄小剂量组腺胃重量增加(P<0.05);7周龄中剂量组腺胃重量增加(P<0.05);8周龄小剂量组腺胃重量增加(P<0.05);4~8周龄各剂量组相对重均无明显变化。
表8 淫羊藿对贵妃鸡腺胃生长发育的影响(±SD,n=8)
表8 淫羊藿对贵妃鸡腺胃生长发育的影响(±SD,n=8)
周龄(w)组别浓度(g/l)4 2 1 0.5 5 0 2 1 0.5 6 0 2 1 0.5 7 0 2 1 0.5 8ⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣⅠⅡⅢⅣ0 2 1 0.5 0重量(g)2.28±0.36 2.83±0.45 2.55±0.35 2.58±0.21 2.90±0.42 3.45±0.59 3.48±0.46 3.28±0.36 5.09±0.54 3.59±0.57 4.00±0.74*4.38±0.44 4.05±1.24 5.89±1.05*5.31±0.65 4.75±0.40 5.48±0.93 5.39±0.51 6.63±0.56*5.24±0.93相对重(%)2.38±0.44 2.14±0.29 2.84±0.95 2.58±0.36 2.02±0.35 2.10±0.36 2.45±0.56 2.41±0.47 1.82±0.10 1.80±0.08 1.77±0.16 1.88±0.20 1.51±0.11 1.54±0.13 1.47±0.04 1.83±0.58 1.56±0.41 1.44±0.35 1.42±0.14 1.38±0.12
中医认为,淫羊藿、党参、黄芪和白术诸药配合,可以滋阴壮阳,健脾益气,补血生津,并能调节机体免疫功能[11],黄柏清热燥湿,泻火解毒,有较强的抑菌作用。
注射途径给药或离体试验表明,淫羊藿苷在心血管[12]、免疫调节等方面有着广泛的生物活性。然而,传统中药淫羊藿和现今绝大多数以淫羊藿苷为指标成分的药物制剂均为口服制剂。因此,考察淫羊藿苷在消化道内的稳定性是揭示此类制剂作用机制研究中一个不可缺少的重要环节。
试验结果表明,淫羊藿能够促进贵妃鸡胃肠道的早期发育,可能与贵妃鸡出壳后(1~2周龄),消化机能还不强,而淫羊藿含有较丰富的多糖、氨基酸、黄酮等能够刺激消化道的早期发育有关[13],研究表明中药多糖类具有增强机体免疫功能、抗应激、抗病毒、抗氧化等多种药理功效。
淫羊藿能明显降低贵妃鸡生长中期(4~8周龄)的小肠相对肠重和单位肠重,而7周龄肌胃的重量增加,6~8周龄腺胃的重量增加,这可能与淫羊藿调节胃肠功能,其中黄柏有较强的抗细菌和真菌作用有关。刘铁汉等[14]利用放射免疫测定方法(RIA)研究淫羊藿苷及其肠菌代谢产物(宝藿苷I和淫羊藿苷元)对炎症性细胞因子的作用,发现在不同的试验条件下,淫羊藿苷及其肠菌代谢产物对各种炎症性细胞因子αL-6、IL-8、TNF-α、IL-lα等均有特异的抑制作用。淫羊藿苷能抑制有害菌的生长繁殖,降低肠道内细菌的活力,减少病原菌在肠壁上的定殖和细菌毒性成分的形成,降低肠道内氨浓度,改善肠内环境,从而防止致病菌对肠上皮细胞的损伤,防止某些不良因素刺激造成肠壁炎性增厚。根据Fick扩散律(Fick’s Law of Dif⁃fusion)吸收入血流量(单位时间分子数)=面积×通透系数/厚度,因此,单位肠重降低,肠壁变薄,有利于营养物质的吸收和利用。
淫羊藿对贵妃鸡生长中期(5~8周龄)的胃肠道的发育均有影响,淫羊藿5~8周龄十二指肠相对肠重均较对照组低,6周龄十二指肠单位肠重均较对照组低;6周龄空肠相对肠重均较对照组低,8周龄空肠相对肠重及单位肠重均较对照组低;4周龄回肠单位肠重较对照组高,8周龄回肠相对肠重及单位肠重均较对照组低;7周龄盲肠相对肠重及单位肠重较对照组高;6周龄直肠相对肠重较对照组高,7、8周龄直肠相对肠重及单位肠重较对照组低。其中淫羊藿作用效果以给药量0.50 g/l为佳。