乙型肝炎表面抗原金标法阳性而酶联免疫吸附试验阴性的原因分析

王 雷，蔡伟俊（江苏省宿迁市中心血站 223800）

我国是乙型肝炎（下称乙肝）病毒感染的中度流行区，乙肝病毒携带者数量已由9.75%降至7.18%。输血是乙肝病毒经血传播的重要途径之一，为了防止乙肝病毒经血传播，提高血液质量，血站现在一般都用胶体金法和酶联免疫吸附试验（ELISA）对献血者的血液样本进行筛查检测。但在日常工作中会碰到两种方法检测结果不一致的现象，现对胶体金法阳性而ELISA结果阴性的现象分析如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 来源于本站2010年夏季夜间采血的1位无偿献血者（以前献过2次血液）的血液标本，乙二胺四乙酸二钾（EDTA－K2）抗凝经正确处理后得到的待检血浆。

1.2 试剂 厦门英科新创公司提供的乙肝表面抗原金标法试纸条，有出厂合格证、在有效期内使用；厦门英科新创公司提供的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）酶联免疫诊断试剂盒（一步法和两步法）；珠海丽珠公司提供的HBsAg酶联免疫诊断试剂盒（一步法和两步法）。所用酶联免疫检测试剂均经SFDA批准，批批检合格，并在有效期内使用。

1.3 仪器 Eppendorf－Refrence移液器（10～100μL、德国Eppendorf公司）、MicroLab STAR IVD ELISA－8CH加样系统（瑞士哈美顿公司 Hamilton AG）、FAME24/20（瑞士哈美顿公司Hamilton AG），仪器均每年定期校验。

1.4 方法

1.4.1 金标法严格按说明书上要求操作，重复测定3次。

1.4.2 ELISA采用双抗夹心法及TMB显色，在E－STAR8CH上加完样后在FAME上进行自动处理。先用两厂家的一步法试剂检测，再用两厂家提供的两步法试剂检测。

2 结 果

金标法三次试验均快速显示强阳性，无偿献血者标本呈阳性反应（2min左右检测线处出现一条紫红色线条；随后1min左右质控线处出现一条紫红色线条），阳性对照（3ng/mL）呈阳性反应（4min左右检测线处出现一条紫红色线条；随后1min左右质控线处出现一条紫红色线条）。而两个厂家提供的ELISA一步法和两步法试剂盒检测结果都为阴性，具体数据为英科新创试剂一步法的S/CO值为0.076；两步法的S/CO值为0.181；珠海丽珠试剂一步法的S/CO值0.015，两步法的S/CO值为0.048。

3 讨 论

胶体金免疫层析法检测HBsAg是用胶体金代替酶标记抗－HBs，样品中HBsAg与金标记抗－HBs单抗结合物结合后沿硝酸纤维素膜迁移，在包被有抗－HBs多抗处（检测线）形成“金标记抗－HBs单抗－HBsAg－抗－HBs多抗”夹心物而出现红色线。一般出现假阳性的可能性有：（1）交叉反应。HBsAg可能与其他病毒存在交叉性，如汉坦病毒[1]；（2）试剂本身的问题。不同厂家、不同批号间的差异；（3）注射乙肝疫苗的初期；（4）标本溶血。

ELISA测定HBsAg多采用双抗体夹心法，在微孔条上预包被纯化的乙肝表面抗体（抗－HBs），配以酶标记抗体（抗－HBs－HRP）及TMB显色剂等其他试剂来检测血浆（或血清）中的HBsAg。一般国产试剂其检测灵敏度可达到0.5ng/mL，但是在日常实验中也有假阴性的出现，可能的原因有：（1）病毒株的变异。预包被的抗体都是单克隆抗体，一般对HBsAg亚型都能检出来，但如果病毒株变异产生新的亚型时就有可能出现阴性；（2）HOOK效应。一步法测定HBsAg时，若标本HB－sAg浓度过高，有可能发生竞争抑制，不形成“夹心复合物”，产生HOOK[2]效应；（3）隐匿性 HBV感染。病毒基因整合到宿主染色体，联合其他病毒的感染而影响到HBsAg的表达[3]等；（4）操作上的误差。如加样问题、洗板和孵育等等，还有试剂本身的差异。如机体不明原因的而导致的HBsAg效价降低和体内嗜异性抗体的干扰等。无论是出现假阳性或是假阴性都会对无偿献血工作带来影响[4]。假阳性会造成血液的浪费，甚至会增加献血员的思想负担；假阴性又会影响血液的质量，造成病毒的传播感染。因此，对于这些假阴或者假阳的献血员，临床工作者中许可以建立一种确认机制，对其进行定期的随访和多项目的检测（如两对半检测、NAT检测等），这对于降低输血传播乙型肝炎病毒的危险性、减少输血纠纷，提高血液安全和输血事业的可持续发展等具有重要的意义。

[1] 席加秋，王中琳.汉坦病毒对胶体金检测乙肝表面抗原的影响[J].上海医学检验杂志，2001，16（3）：149.

[2] 郑怀竞，韩松.临床检验ELISA指南[M].北京：北京医科大学/中国协和医科大学联合出版社，1994：4.

[3] 杨生义，李文凡.献血员HBsAg筛查的安全性和病毒变异分析[J].中国热带医学，2010，10（6）：674－676.

[4] 杨侠宇.金标法检测乙型肝炎表面抗原漏检原因分析[J].检验医学与临床，2011，8（10）：1279－1280.