小儿支原体肺炎的实验室检测

陈华干

（广西壮族自治区柳州市妇幼保健院检验科 545000）

支原体肺炎是肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）引起的急性呼吸道感染伴肺炎，过去称为“原发性非典型肺炎”的病原体中，肺炎支原体最为常见，可引起流行，约占各种肺炎的10%，严重的支原体肺炎也可导致死亡。肺炎支原体是引起小儿呼吸道感染的重要病原体，5岁以上儿童中肺炎支原体感染率达66.7%。由于肺炎支原体无细胞膜，感染初期临床表现不明显，选择实验室检测方法对早期诊断和治疗具有重要的意义。2012年1～4月本院对收治入院的100例疑似支原体感染患儿进行实验室检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本组病例100例，均为本院门诊和住院治疗的患儿，其中男49例，女51例；年龄6个月至12岁，平均（5.9±2.3）岁；临床表现主要为咳嗽、发热、咳痰、流涕、头痛、咽痛等。

1.2 标本采集

1.2.1 咽拭子和痰液标本的采集 （1）用无菌棉拭子直接擦拭咽后壁、扁桃体、假膜边缘或口腔溃疡处；（2）清晨让患儿清水漱口后，用力咳出痰液；（3）收集患儿24h痰液；（4）专科医生利用支气管镜直接从患儿支气管内采集。

1.2.2 血液标本的采集 检验标本采集得是否规范直接关系到检验标本数据的准确性，对于疾病的诊断和治疗有着重要的意义。血液标本应在患儿晨起空腹时采集，以避免饮食因素影响检验结果的准确性；标本应尽量选择在未使用各种药物前，以避免药物对血液成分的影响。

1.3 检测方法

1.3.1 聚合酶链反应（PCR）法 （1）PCR法：咽拭子标本采用中山医科大学达安基因诊断中心开发的MP-PCR检测试剂盒进行PCR检测；PCR扩增及定量仪为美国Gene Amp5700Sequence Detedtion System基因扩增仪；NP-DNA扩增及检测按照试剂盒说明实施；（2）荧光PCR法：抽取外周血应用罗氏实时荧光PCR仪测定MP-PCR，严格按《中华医学检验全书》操作规范进行操作，以 F 5′-CCA ACC AAA CAA CAA CGT TCA-3′，R 5′-ACC TTG ACT GGA GGC CGT TA-3′为引物，引物位于PI基因区。IgM在1∶4以上，IgG＞1∶16有诊断意义。

1.3.2 明胶颗粒法 被动凝集法，抽取外周血采用日本富士MYCO-Ⅱ试剂盒测定MP-PCR抗体，用肺炎支原体（Mac株）抗原致敏的明胶颗粒与一定比例稀释的血清做凝集反应，用未致敏的明胶颗粒做对照反应，以观察被检血清的凝集效价，结果判定1∶40为临界值，滴度大于或等于1∶80为阳性。

1.3.3 ELISA法 抽取外周血严格按照说明书操作。

1.3.4 培养法 以牛心消化液为基础另加20%小牛血清及新鲜酵母菌浸液制成的液体和固体培养基，在液体培养基中加入葡萄糖及酚红、美蓝指示剂，将标本接种于液体培养基中增菌，1周后培养基由紫变绿，液体清晰，可转种于固体培养基上，在5%CO2大气环境下培养1周后长出菌落，如出现“荷包蛋”样菌落即可初步诊断，亦可再进行生化鉴定。

2 结 果

2.1 肺炎支原体生物学特征 菌落很小，很少超过0.5mm，肉眼不易观察，可通过细菌滤器。在显微镜下菌落呈圆形均匀的颗粒状，外围有透明带。MP呈球形、杆状和丝状等多种形态。仅有由三层膜组成的胞质膜，革兰染色呈阴性。胞质内含核糖体和双股DNA。在有氧或无氧条件下生长较其他支原体慢，接种后5～10d才能见到。能发酵葡萄糖产生乳酸，能产生过氧化酶类溶血素。

2.2 检测结果 通过检测，100例患儿中确诊为肺炎支原体感染者43例，其中PCR法检测阳性13例，阳性率13%（13／100）；荧光PCR法检测阳性14例，阳性率14%（14／100）；明胶颗粒法检测阳性7例，阳性率7%（7／100）；ELISA法检测阳性9例，阳性率9%（9／100）；43例阳性患儿标本进行病原体培养，阳性10例，阳性率23.3%（10／43）。

3 讨 论

肺炎支原体曾名为类胸膜肺炎微生物（PPLO），是介于病毒与细菌之间的一种没有细胞壁的病原体，是人类原发性非典型性肺炎的病原体。主要经飞沫传播，其基本病理呈间质性肺炎或毛细支气管炎样改变，临床表现以顽固性咳嗽为特征［1］。MP抗原与人体心、肺、脑、肾和平滑肌等组织存在部分共同抗原，感染后可产生相应组织的自身抗体，并形成免疫复合物。自身抗体与免疫复合物可引起肺内和肺外多系统病变，如肺炎、心肌炎、肝坏死及神经损害等［2］。肺外并发症可能是因抗原、抗体形成免疫复合物激活补体产生中性粒细胞趋化因子，吸引大量白细胞侵入病变部位，释放溶酶菌中的水解酶引起增生病变［3］。研究证实［4］，肺炎支原体（MP）是引起儿童呼吸道感染的重要病原体，5岁以上儿童肺炎中MP感染率达66.7%。临床上MP检测方法多样，病原体培养需时间长（2～3周），且检出率低，对临床的诊断和治疗效率低，本组确诊为肺炎支原体感染43例患儿病原体培养，阳性率仅为23.3%（10／43），检出率明显低于以往的文献报道［5］，这与支原体是体外培养中最小的病原微生物，培养法复杂，且培养法要考虑MP的存活性及足够的数量，以及有否使用过抗生素有关。

本组病例明胶颗粒法检测阳性7例，荧光PCR法阳性14例，其中有10例患儿于发病第1天即采集标本检测，2例有轻微临床表现、胸片较小范围改变，提示明胶颗粒法的阳性率与病情、病变部位、严重程度有关；明胶颗粒法运用表面吸附支原体抗原的明胶颗粒代替动物红细胞，消除了非特异性反应，且3h即能出报告，无需特殊仪器设备即可操作，利于支原体肺炎的早期诊断。ELISA法与明胶颗粒法检测阳性率较接近，分别为9%和7%，PCR法阳性率13%，荧光PCR法阳性率14%。这几种检测方法分别有其优缺点，临床上应根据患儿的实际情况选择检测方法，必要时联合两种或两种以上方法检测。

［1］ 董宗祈.肺炎支原体患儿的治疗［J］.小儿急救医学，2002，9（3）：137.

［2］ 李梦东.实用传染病学［M］.北京：人民卫生出版社，1994：246.

［3］ 赵淑琴.肺炎支原体肺炎的发病机制［J］.小儿急救医学，2002，9（3）：129.

［4］ 游选旺，马兰英，陈卉旖.儿童肺炎支原体感染的实验室检测［J］.山东医药，2009，49（37）：112.

［5］ 陈建伟，陈卫宇，胡秀华，等.儿童支原体肺炎的实验室检测研究［J］.浙江临床医学，2009，11（5）：548-549.