依达拉奉对大鼠延髓缺血后超氧化物歧化酶、丙二醛的影响

朱 江， 郭 森， 赵 亮， 高燕军， 张晓璇， 孙艳军

依达拉奉对大鼠延髓缺血后超氧化物歧化酶、丙二醛的影响

朱 江1， 郭 森2， 赵 亮1， 高燕军1， 张晓璇1， 孙艳军1

目的 探讨依达拉奉对大鼠延髓缺血中的影响。方法 将Wistar大鼠分为假手术组、依达拉奉干预组(干预组)、延髓缺血模型组(模型组)，采用多点阻断脑动脉方法制造延髓缺血模型。依达拉奉干预组腹腔注射依达拉奉;延髓缺血模型组腹腔注射生理盐水。分别在实验7d、14d时取延髓，检测脑组织的含水量、SOD、MDA水平。结果 延髓缺血模型组脑组织SOD水平下降，脑组织MDA浓度先升高后降低;与延髓缺血模型组相比，干预组SOD下降的幅度小(P＜0.01)，MDA浓度降低;干预组脑组织含水量明显低于延髓缺血模型组(P＜0.01)。结论 依达拉奉有效清除自由基，对延髓缺血具有明显保护作用。

依达拉奉;延髓缺血;超氧化物歧化酶;丙二醛;大鼠

目前认为脑组织缺血后自由基增多是脑损伤加重的主要原因［1］，而超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等是反映氧自由基水平的主要指标。依达拉奉是新型自由基清除剂，本实验通过观察依达拉奉对大鼠延髓缺血后SOD、MDA水平的影响，探讨依达拉奉清除自由基的有关机制及对延髓缺血后的保护作用。

1 材料和方法

1.1 动物与分组 SPF级Wistar成年健康雄性大鼠，220～260g，购于河北医科大学实验动物中心。36只大鼠随机分为3组:假手术组、干预组、模型组，按时间点分为7d、14d两个亚组，每个亚组12只大鼠。

1.2 方法

1.2.1 延髓缺血模型制备 结扎右侧颈总动脉:10%水合氯醛腹腔注射麻醉(350mg/kg)，仰卧固定，颈部正中切口，钝性分离胸锁乳突肌，暴露分离出右侧颈总动脉并结扎切断，检查无活动性出血后，用生理盐水和青霉素(1×105U/L)冲洗后缝合伤口。电凝椎动脉:大鼠俯卧固定，于后正中线第1颈椎水平处作纵形切口，沿中线分开肌层，暴露第1颈椎横突孔，将高频电刀的电凝刀头插入横突孔内凝闭椎动脉3～4s，检查无活动性出血后，用生理盐水和青霉素(1×105U/L)冲洗后缝合伤口。待清醒后，单笼保温喂养。

1.2.2 实验动物的干预方法 假手术组只暴露双侧椎动脉及右侧颈总动脉，不做血管阻断处理。干预组、模型组均在阻断双侧椎动脉及右侧颈总动脉后立即开始治疗。干预组每天腹腔注射依达拉奉二次，时间间隔12h，每次注射计量按3mg/kg计算，到术后7d和14d两个时间点分别处死，取延髓。模型组每天腹腔注射生理盐水二次，时间间隔12h，注射剂量为0.5ml/次。到术后7d和14d两个时间点分别处死，取延髓。

1.2.3 实验标本制作 将大鼠以10%水合氯醛腹腔注射麻醉(350mg/kg)，麻醉后快速断头法处死。在冰盘上快速取延髓，置于0～4℃生理盐水中漂洗，清除血液，滤纸拭干。每个亚组中6只脑组织用于测含水量，另外6只脑组织放入9倍量的0～4℃生理盐水中，在冰水浴中用玻璃匀浆器制成10%脑匀浆，用离心机3500r/min，离心15min，取上清液分3份置于－20℃冰箱中保存，用于测定SOD、MDA含量。

1.2.4 脑组织含水量、脑组织中SOD、MDA含量测定 (1)脑组织含水量测定:用滤纸拭干延髓表面的水分，准确称取延髓湿重，然后置于90℃烘箱中热烘48h。再次准确称取延髓干重。延髓含水量(%)=(延髓湿重－延髓干重)/延髓湿重× 100%。(2)延髓中SOD、MDA含量:SOD含量采用黄嘌呤氧化酶法测定。MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定。

1.2.5 统计学方法 所得数据，采用统计学软件SPSS14.0进行分析，采用t检验，以均数±标准差(±s)表示，P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 脑组织大体变化 延髓缺血后水肿于7d明显，14d时有所减轻。干预组各时间段脑组织肿胀程度与模型组相比均减轻。

2.2 各组延髓含水量 延髓含水量7d显著增高，与假手术组比较差异显著(P＜0.01);干预组与模型组比较，于缺血后7d含水量减少，差异有显著性(P＜0.01)(见表1)。

2.3 各组脑组织中SOD、MDA含量 与假手术组相比，各组延髓SOD含量减少;干预组与模型组相比较，干预组SOD含量升高。模型组MDA含量较高，干预组的MDA含量较模型组减低(见表2、表3)。

表1 各组大鼠脑组织含水量的比较(±s，%，n=6)

表1 各组大鼠脑组织含水量的比较(±s，%，n=6)

与假手术组相比#P＜0.01;延髓缺血模型组相比*P＜0.01

组别 假手术组 延髓缺血7d 延髓缺血14d模型组干预组假手术组 70.99±0.78 77.45±2.14# 75.26±1.05* 74.29±0.81 72.61±1.36

表2 各组大鼠脑组织中SOD含量的比较(±s，n=6)

表2 各组大鼠脑组织中SOD含量的比较(±s，n=6)

与假手术组相比#P＜0.01;延髓缺血模型组相比*P＜0.01

组别 假手术组 延髓缺血7d 延髓缺血14d模型组干预组假手术组 74.04±1.05 68.30±0.09# 69.90±0.55#* 64.33±1.55 66.57±1.39

表3 各组大鼠脑组织中MDA含量的比较(±s，n=6)

表3 各组大鼠脑组织中MDA含量的比较(±s，n=6)

假手术组相比#P＜0.01;延髓缺血模型组相比*P＜0.01

组别 假手术组 延髓缺血7d 延髓缺血14d模型组干预组假手术组 4.64±0.17 5.76±0.12# 4.01±0.17#* 3.75±0.85 3.54±0.45

3 讨论

脑组织缺血后，缺血缺氧使细胞通透性改变，出现细胞水肿、兴奋性氨基酸产生增加、Ca2+内流增加。线粒体破坏，影响有氧代谢产生ATP，激发自由基级联反应［2］，产生大量活性氧，活性氧与各种细胞成分发生反应从而使膜脂质过氧化、染色体、核酸、蛋白质破坏，细胞膜降解，导致缺血核心区神经细胞死亡并触发周围半暗带神经元发生迟发性死亡［3～5］。在正常情况下机体内氧自由基含量很少，其中内源性自由基清除剂发挥重要作用［6］。SOD作为内源性氧自由基清除剂，是一种金属蛋白酶，可保护生物体免受自由基的影响［7］。SOD含量在一定程度上间接反映内源性氧自由基清除能力。MDA是膜脂质降解产生的代谢产物，用来反映脂质过氧化的指标，其含量的变化间接反应组织中氧自由基含量的变化［8］。因此，监测SOD、MDA含量的变化对研究延髓缺血损伤有十分重要的意义。依达拉奉是一种新型自由基清除剂，因其携带亲脂性基团可通过血脑屏障［9］。依达拉奉能显著抑制黄嘌呤氧化酶和次黄嘌呤氧化酶的活性，抑制脂质过氧化反应，减轻脑组织中花生四烯酸引导的脑水肿，也能防止氧化性细胞损伤，减少缺血半暗带面积，可减轻血管内皮细胞损害［10］，从而抑制迟发性神经元凋亡［11］。在临床应用中，已经证实依达拉奉对脑梗死治疗有效［12］。

通过本实验结果可见，缺血7d延髓含水量显著升高。依达拉奉干预组延髓组织的含水量较模型组明显减少(P＜0.01)。依达拉奉可能通过抑制氧自由基生成，减轻血管内皮细胞的损伤，有效控制细胞通透性变化，减轻缺血造成的延髓组织水肿。干预组SOD水平7d明显高于模型组，各时间点MDA水平均明显低于模型组。说明依达拉奉在延髓缺血过程中通过清除自由基，减轻了脑组织损伤。SOD水平在延髓缺血7d时明显高于模型组，而在延髓缺血14d时出现下降，提示依达拉奉对自由基的清除效果于缺血7d时明显，之后药物作用减弱。因依达拉奉减轻自由基对内源性SOD的消耗，但随着延髓缺血时间的延长，自由基产生的增加，SOD在数量上会减少，提示在治疗上应尽早用药干预。

本实验结果提示，延髓缺血后由于自由基产生，使缺血脑组织损伤加重，依达拉奉通过清除自由基，减轻血管内皮细胞损害，发挥了对神经细胞的保护作用。

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Effects of Edaravone on content of SOD，MDA after medullary ischemia in rats

ZHU Jiang，GUO Sen，ZHAO Liang，et al.(Department of Neurology，Affiliated Hospital of Chengde Medical College，Chengde067000，China)

ObjectiveTo investigate the effect of Edaravone on medullary ischemia.MethodThe male Wistar rats were divided randomly into three groups，sham－operated group，Edaravon－creating and medullary ischemia group.The the right common carotid artery in model of medullary ischemia rats were ligated and the bilateral vertebral artery were blocked by electrocoagulation.All groups were further divided into two parts(7d and 14d)to test the concentration of super oxide dismutase(MOD)and malondiadehyde(MDA)in brain tissue and serum.Result For medullary ischemia group，concentration of SOD in brain tissue decreased.For Edaravone－treating group，the decrease of SOD was lower than medullary ischemia group.MDA concentration was lower than those of in control group.In the medullary ischemia group，moisture content of medullary was also significant lower than those of in control group.ConclusionEdaravone may reduce free radical to protect medullary ischemia

Medullary ischemia;Super oxide dismutase;Malondiadehyde;Rat

R743.3

A

1003－2754(2013)06－0545－03

2013－04－16;

2013－05－28

(1.承德医学院附属医院神经内科，河北承德067000;2.承德医学院人体解剖学教研室，河北承德067000)

朱 江，E－mail:zhujianghbcd@126.com

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