茸毛木蓝根的化学成分研究

裘 璐， 梁 妍， 唐贵华， 苑春茂， 郝小燕*， 何红平*

(1.贵阳医学院药学院，贵州贵阳 550004;2.中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，云南昆明 650201)

茸毛木蓝Indigofera stachyoidesLindl.为豆科木蓝属植物，其根又名血人参、铁刷子、山红花、红苦刺，为贵州省少数民族用药。该植物广泛分布于贵州中西部各苗乡及云南、广西等地。据记载［1］，血人参性温，味微苦涩，有补气摄血，滋阴补肾之功效，用于崩漏、跌打、风湿、肝硬化等。血人参也为化疗药辅助中药芪胶升白胶囊的组成成分之一。然而，迄今为止，国内外学者仅报道了血人参地上部分及它的挥发性成分［2］。为更好地控制该药材的质量，合理开发和利用该资源，完善芪胶升白胶囊的药效学物质基础研究，本实验首次对血人参进行了系统的化学成分研究。现报道从中分离鉴定的7个化合物。

1 材料与仪器

1.1 材料 血人参，采自贵州六枝特区，经贵阳中医学院陈德媛研究员鉴定为豆科木蓝属植物茸毛木蓝Indigofera stachyoidesLindl.的根。

1.2 仪器与试剂 1D NMR用BRUKER AM－400和DRX－500型核磁共振仪测定，以TMS为内标;质谱用 VG Auto Spec－3000型及 Waters Autospec Premier P776型质谱仪测定;正相层析硅胶G(60～80目，300～400目)和高效薄层层析板(GF254)均为青岛海洋化工厂生产;所用反相色谱硅胶C18(40～75 μm)为Fuji Silysia化学公司产品;凝胶色谱为Sephadex LH－20(GE Healthcare Bio－Xciences AB);用5%H2SO4乙醇溶液作为常规显色试剂。

2 提取与分离

血人参干燥根10.0 kg，经粉碎成粗品后，用95%的乙醇回流提取3次(4 h，4 h，3 h)，合并提取液，回收乙醇得浓稠浸膏。用适量水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得3部分萃取物。其中，乙酸乙酯萃取物 (290 g)以粗硅胶(60～80目)1∶1拌样，200～300目硅胶装柱，三氯甲烷－甲醇 (95∶5→50∶50)梯度洗脱，分为8个组分 (A→H)。其中，组分C经反相柱层析(甲醇－水梯度洗脱)、反复硅胶柱层析 (三氯甲烷－丙酮－甲酸梯度洗脱)、凝胶色谱 Sephadex LH－20(甲醇－水洗脱)和重结晶纯化，分离得到化合物1(200.0 mg)、2(11.6 mg)、3(9.4 mg)、4和 5(13.6 mg)、6和7(82.8 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:白色针状结晶 (MeOH)。ESI－MSm/z491 ［M －H］－。1H－NMR(500 MHz，pyridined5)δ:7.31(1H，d，J=1.3 Hz，H－2)，7.19(1H，d，J=8.1 Hz，H－5)，7.01(1H，dd，J=8.1，1.3 Hz，H－6)，4.56(1H，m，H－7)，2.38(1H，m，H－8)，4.22 ～ 4.29(1H，m，H－9a)，3.13(1H，dd，J=15.6，4.4 Hz，H－9b)，6.85(1H，s，H－2')，6.83(1H，s，H－5')，3.58～3.64(2H，m，H－7')，2.35 ～ 2.51(1H，m，H－8')，4.03 ～ 4.15(2H，m，H－9')，3.70(3H，s，3－OCH3)，3.77(3H，s，3'－OCH3)，4.62(1H，d，J=7.3 Hz，H－1″)，4.05(1H，m，H－2″)，4.12(1H，m，H－3″)，4.18 ～4.21(1H，m，H－4″)，4.58(1H，m，H－5″a)，3.33(1H，dd，J=16.0，11.4 Hz，H－5″b)。13C－NMR(125 MHz，pyridine－d5)δ:138.0(C－1)，114.4(C－2)，148.6(C－3)，146.5(C－4)，116.6(C－5)，122.6(C－6)，47.4(C－7)，45.5(C－8)，68.6(C－9)，128.2(C－1')，112.6(C－2')，147.0(C－3')，146.1(C－4')，118.0(C－5')，134.1(C－6')，33.9(C－7')，39.2(C－8')，64.3(C－9')，56.1(3－OCH3)，55.9(3'－OCH3)，106.1(C－1″)，75.2(C－2″)，78.6(C－3″)，71.2(C－4″)，67.3(C－5″)。波谱数据与文献［3］报道的一致，故鉴定为schizandriside。

化合物2:白色针状结晶 (MeOH)。ESI－MSm/z551［M －H］－.1H－NMR(500 MHz，CD3OD)δ:6.42(1H，s，H－2)，6.42(1H，s，H－6)，4.37(1H，d，J=6.6 Hz，H－7)，2.02 ～ 2.07(1H，m，H－8)，3.83(1H，m，H－9a)，3.41(1H，dd，J=9.6，3.7 Hz，H－9b)，6.56(1H，s，H－2')，2.71(1H，dd，J=15.5，4.5 Hz，H－7'a)，2.63(1H，dd，J=15.5，10.7 Hz，H－7'b)，1.66 ～ 1.73(1H，m，H－8')，3.64(1H，dd，J=10.8，4.1 Hz，H－9'a)，3.54(1H，dd，J=10.8，6.5 Hz，H－9'b)，3.74(3H，s，3－OCH3)，3.74(3H，s，5－OCH3)，3.84(3H，s，3'－OCH3)，3.31(3H，s，5'－OCH3)，4.21(1H，d，J=7.6 Hz，H－1″)，3.21(1H，m，H－2″)，3.27 ～ 3.29(1H，m，H－3″)，3.46 ～ 3.47(1H，ddd，J=10.4，9.5，5.6 Hz，H－4″)，3.82(1H，m，H－5″a)，3.17(1H，m，H－5″b)。13C－NMR(125 MHz，CD3OD)δ:139.4(C－1)，107.1(C－2)，149.0(C－3)，134.6(C－4)，149.0(C－5)，107.1(C－6)，43.0(C－7)，46.7(C－8)，71.1(C－9)，130.2(C－1')，107.9(C－2')，148.7(C－3')，139.0(C－4')，147.7(C－5')，126.4(C－6')，33.9(C－7')，40.6(C－8')，66.2(C－9')，56.9(3－OCH3)，56.9(5－OCH3)，56.7(3'－OCH3)，60.1(5'－OCH3)，105.5(C－1″)，75.0(C－2″)，78.0(C－3″)，71.3(C－4″)，67.0(C－5″)。波谱数据与文献［3－4］报道的一致，故鉴定为lyoniside。

化合物3:淡黄色粉末 (MeOH)。ESI－MSm/z313 ［M+Na］+。1H－NMR(400 MHz，CD3OD)δ:4.81(1H，brs，H－2)，4.17(1H，dd，J=4.6，2.8 Hz，H－3)，2.85(1H，dd，J=16.8，4.6 Hz，H－4a)，2.75(1H，dd，J=16.8，2.8 Hz，H－4b)，5.93(1H，d，J=2.3 Hz，H－6)，5.90(1H，d，J=2.3 Hz，H－8)，6.96(1H，d，J=1.6 Hz，H－2')，6.75(1H，d，J=8.2 Hz，H－5')，6.79(1H，dd，J=8.2，1.6 Hz，H－6')。13C－NMR(100 MHz，CD3OD)δ:79.9(C－2)，67.5(C－3)，29.3(C－4)，157.7(C－5)，96.3(C－6)，158.0(C－7)，95.8(C－8)，157.4(C－9)，100.0(C－10)，132.3(C－1')，115.3(C－2')，145.8(C－3')，146.0(C－4')，119.4(C－5')，115.8(C－6')。波谱数据与文献［5］报道的一致，故鉴定为表儿茶素［(－)－epicatechin］。

化合物4和5:白色结晶性粉末 (MeOH)。ESI－MSm/z:405 ［M+Na］+。1H－NMR(400 MHz，CD3OD)δ:α－端基异构体:5.22(1H，d，J=3.6 Hz，H－1)，3.52(1H，dd，J=10.9，7.5 Hz，H－2)，4.60(1H，dd，J=10.0，3.6 Hz，H－3)，3.87(1H，t，J=9.5 Hz，H－4)，3.99(1H，ddd，J=9.9，5.2，1.9 Hz，H－5)，4.42(1H，dd，J=11.9，2.0 Hz，H－6a)，4.26(1H，dd，J=11.9，5.4 Hz，H－6b)，3.08(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，3.02(4H，m，NO2CH2CH2COO－× 2)，4.72(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2);β－端基异构体:4.72(1H，m，H－1)，3.52(1H，dd，J=10.9，7.5 Hz，H－2)，4.60(1H，dd，J=10.0，3.6 Hz，H－3)，3.87(1H，t，J=9.5 Hz，H－4)，3.99(1H，ddd，J=9.9，5.2，1.9 Hz，H－5)，4.48(1H，dd，J=11.9，2.0 Hz，H－6a)，4.42(1H，dd，J=11.9，2.0 Hz，H－6b)，3.08(4H，m，NO2CH2CH2COO－×2)，3.02(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，4.72(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)。13C－NMR(100 MHz，CD3OD)δ:α－端基异构体:91.1(C－1)，71.9(C－2)，75.9(C－3)，70.4(C－4)，71.8(C－5)，65.2(C－6)，171.7(NO2CH2CH2COO－3)，31.9(NO2CH2CH2COO－3)，70.8(NO2CH2CH2COO－3)，171.5(NO2CH2CH2COO－6)，31.8(NO2CH2CH2COO－2)，70.7(NO2CH2CH2COO－3);β－端基异构体:96.1(C－1)，75.3(C－2)，77.1(C－3)，71.6(C－4)，75.8(C－5)，65.2(C－6)，171.7(NO2CH2CH2COO－3)，31.9(NO2CH2CH2COO－3)，70.8(NO2CH2CH2COO－3)，171.5(NO2CH2CH2COO－6)，31.8(NO2CH2CH2COO－2)，70.7(NO2CH2CH2COO－3)。波谱数据与文献［6］报道的一致，故鉴定为 3，6－二－O－(3－硝基丙酰基)－D－吡喃葡萄糖 α－和β－端基异构体混合物。

化合物6和7:白色结晶性粉末 (MeOH)。ESI－MSm/z405 ［M+Na］+。1H－NMR(400 MHz，CD3OD)δ:α－端基异构体:5.09(1H，d，J=3.2 Hz，H－1)，3.43(1H，dd，J=9.5，3.3 Hz，H－2)，4.68(1H，m，H－3)，3.54(1H，m，H－4)，4.14(1H，m，H－5)，4.14(1H，m，H－6a);4.26(1H，dd，J=11.9，6.0 Hz，H－6b)，3.20(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，3.00(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，4.68(4H，m，NO2CH2CH2COO－ ×2);β－端基异构体:4.50(1H，d，J=7.7 Hz，H－1)，3.43(1H，dd，J=9.5，3.3 Hz，H－2)，4.68(1H，m，H－3)，3.54(1H，m，H－4)，3.81(1H，m，H－5)，4.37(1H，m，H－6a)，4.14(1H，m，H－6b)，3.20(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，3.00(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)，4.68(4H，m，NO2CH2CH2COO－ × 2)。13C－NMR(100 MHz，CD3OD)δ:α－端基异构体:93.9(C－1)，73.1(C－2)，72.6(C－3)，73.6(C－4)，68.2(C－5)，64.5(C－6)，171.5(NO2CH2CH2COO－4)，31.9(NO2CH2CH2COO－4)，70.8(NO2CH2CH2COO－4)，171.2(NO2CH2CH2COO－6)，31.8(NO2CH2CH2COO－6)，70.5(NO2CH2CH2COO－4);β－端基异构体:98.4(C－1)，76.2(C－2)，75.4(C－3)，72.4(C－4)，72.8(C－5)，64.4(C－6)，171.5(NO2CH2CH2COO－4)，31.9(NO2CH2CH2COO－4)，70.8(NO2CH2CH2COO－4)，171.2(NO2CH2CH2COO－6)，31.8(NO2CH2CH2COO－6)，70.5(NO2CH2CH2COO－4)。波谱数据与文献［7］报道的一致，故鉴定为 4，6－二－O－(3－硝基丙酰基)－D－吡喃葡萄糖 α－和β－端基异构体混合物。

4 讨论

化合物schizandriside(1)和lyoniside(2)为木脂素单糖苷类化合物，文献［3］报道其均有较好清除与肿瘤有密切关系的自由基的作用。化合物(－)－epicatechin(3)为典型的黄烷醇类化合物，文献［8］报道其是绿茶儿茶素类化合物 (GTC)的有效单体之一，不仅可以通过抑制抗癌药外流而增强对癌细胞的杀伤作用，还不会增加抗癌药的毒副作用，可以辅助化疗、放疗。因此，它们的发现可以一定程度上说明血人参在化疗药辅助中药复方芪胶升白胶囊中可能发挥的作用，有利于完善芪胶升白胶囊的药效学物质基础。

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