液相色谱测定药用聚丙烯组合盖中抗氧剂1010的不确定度评定

曲亚南 方旻 吕鹏举 谢新艺 广东省医疗器械质量监督检验所包装材料容器检验中心 （广州 510663）

液相色谱测定药用聚丙烯组合盖中抗氧剂1010的不确定度评定

曲亚南 方旻 吕鹏举 谢新艺 广东省医疗器械质量监督检验所包装材料容器检验中心 （广州 510663）

本文按欧洲药典3.1.3聚烯烃项下检测抗氧剂1010的方法，对药用聚丙烯组合盖样品进行平行检测，并建立数学模型，以探寻不确定度的主要影响因素，系统分析和量化不确定度各分量。结果表明采用液相色谱测定聚丙烯组合盖中抗氧剂1010的不确定度，主要由回收率和标准溶液浓度的不确定度而引起。

液相色谱法 药用聚丙烯 抗氧剂1010 不确定度

直接接触药品的包装材料与药品的相容性已越来越受到广泛的重视，尤其是高风险性的品种，例如喷雾剂、注射液等，国内已就该领域发布了化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则[1]。作为直接接触药品包装材料的常用添加剂，欧洲药典规定了抗氧剂1010的检测方法和限量，并已作为国内相容性试验的参考标准之一。该提取包装材料中的抗氧剂的方法采用了回流技术，并含有过滤、定容、蒸干等多步前处理过程，这给检测结果带来引入较大误差的机会。为了评价检测结果的质量，需要对不确定度进行评定[2]，探寻不确定度的主要来源并加以控制，提高检测结果的准确度。

1.材料方法

1.1材料与试剂

LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）

抗氧剂1010对照品：四-［β-（3，5-二叔丁基-4-羟基苯基）丙酸］季戊四醇酯，C73H108O12，CAS：6683-19-8，SIGMA-ALDRICH，批号：MKBF3728V，98%

样品：药用聚丙烯组合盖

1.2方法

1.2.1 色谱条件

流动相：水：四氢呋喃：乙腈=1：3：6

流速：1.5ml/min

波长：280nm

进样量：20µl

1.2.2 对照液制备

将抗氧剂1010标准品60.0mg溶于10.0ml乙腈与四氢呋喃等体积混合的溶液中。吸取此溶液2.0ml用乙腈与四氢呋喃等体积混合的试剂稀释至50.0ml。

1.2.3 样品供试液制备

溶液S1：取样品约2.0g，精密称量，放置于烧瓶中，加入甲苯80ml，持续搅拌，加热回流1.5h，冷却至60˚C，在搅拌下加入甲醇120ml，烧结玻璃过滤器滤过。用甲苯与甲醇（4:6）混合液25ml冲洗烧瓶和滤渣，将洗液与滤液合并，并用相同的混合液稀释至250ml。同法配制空白溶液。

供试液S2：将50ml溶液S1在45˚C真空蒸干，残渣用5.0ml的乙腈与四氢呋喃等体积混合液溶解，即为样品供试液。同法制备空白液。

1.2.4 测定

将对照液、空白液与样品供试液分别注入高效液相色谱仪，采用外标法定量。

2.测量不确定度的数学模型的建立

根据样品测定方法建立测量不确定度模型（1）式，即为聚丙烯中抗氧剂1010测量的不确定度[3]

式中： C－样品中抗氧剂的含量，µg/g；

Ci－供试液的抗氧剂浓度，µg/mL；

V－最终样品溶液的体积，ml；

m－样品的质量，g；

f1－体积校正因子；

f2－校准溶液浓度变化修正因子；

f3－测量重复性修正因子；

f4－方法回收率偏差修正因子。

从测量不确定度模型中可以得到测量聚丙烯组合盖中抗氧剂1010不确定度分量来源于以下几个方面：

标准溶液浓度产生的不确定度；

样品称量产生的不确定度；

样品定容体积产生的不确定度；

样品浓缩过程产生的不确定度；

样品重复测定产生的不确定度；

标准曲线线性拟和的不确定度；

回收率产生的不确定度。

3.测量不确定度的分析与评定

3.1标准溶液浓度产生的不确定度urel(f2)

3.1.1 标准物质的不确定度

抗氧剂1010对照品因未给出质量分数和限度标识，故此项不考虑。

3.1.2 标准物质称量产生的不确定度u1rel(f2)

此三项合成出的称量标准物质的不确定度为

3.1.3 标准物质定容体积产生的不确定度u2rel(f2)

3.1.4 标准溶液稀释体积产生的不确定度u3rel(f2)

此两项合成得出稀释产生的u3rel(f2)=0.00412。

3.1.5 由标准物质重复测定产生的不确定度u4rel(f2)

通过重复抗氧剂1010标准溶液进样进行重复性评定，由重复标定产生的不确定度如表1所示。

重复测定标准溶液产生的不确定度

表1. 重复测定标准溶液产生的不确定度

综合以上不确定度分量，标准溶液浓度产生的相对不确定度urel(f2)=0.0122。

3.2样品称量产生的u (m)

称2g左右样品,实际称得2.0012g。根据1.2标准物质称量的不确定度同理计算，

3.3样品浓缩过程产生的不确定度urel(f1)

20˚C时50ml单标线(A级)的容量允差为0.05ml（按JJG 196-2006 《常用玻璃量器检定规程》规定），相对标准不确定度u2rel(f1)为0.00294。

3.4样品定容体积产生的不确定度urel(V)

20˚C时2ml单标线(A级)的容量允差为±0.010ml（按JJG 196-2006 《常用玻璃量器检定规程》规定），urel(V)=0.00408。

3.5样品重复测定产生的不确定度urel(f3)

由于测量次数较少，根据JJF1059-1999 4.4，采用极差法进行评定。样品重复测定2次,测定结果为452.1756和452.7045µg/g，平均值452.4400µg/g。

3.6标准曲线线性拟和的不确定度urel(Ci)[5]

分别重复两次测定不同浓度抗氧剂1010标准溶液的HPLC峰面积列于表2。

采用最小二乘法拟合表2中的数据，得标准溶液质量浓度－峰面积工作曲线回归方程C=2.639178e-4*A+0.1748723，R2=0.99998，则峰面积测量的标准偏差s为

应用该标准曲线测量时，重复两次测量样品，即P=2，测得供试液中抗氧剂含量的最佳估计值C0=x0=36.21692µg/ml，

表2. 抗氧剂1010标准溶液浓度—响应值

表3. 加标回收率结果

标准溶液的浓度残差平方和

n—标准溶液的测量次数，本列为12；

p—C0的测量次数，本例为2。

则校准曲线拟合的不确定度u(Ci)为

3.7回收率产生的不确定度urel(f4)

制样过程产生的不确定度采用与所测定样品浓度水平相近的浓度进行添加回收率试验,每个添加浓度重复3次。回收率测定结果如表3所示。

4.合成相对不确定度

现将各不确定度分量列于表4中。

从数学模型中可看出，各影响参数相互独立，且各参数的不确定度直接对被测量 C 的不确定度产生影响，即灵敏系数等于1，合成标准不确定度可用相对标准不确定度进行合成，根据JJF1059–1999中6.7，相对合成标准不确定度：

扩展不确定度：在没有特殊要求的情况下，按国际惯例，测量结果的扩展不确定度包含因子k取2，则相对扩展不确定度U= urel•k=8.14%。

表4.不确定度分量表

5.结论

液相色谱法测定药用聚丙烯组合盖中抗氧剂1010的含量，当k=2，扩展不确定度为36.8286µg/g，测量结果表述为452.4400±36.8286µg/g，k=2。

6.讨论

通过对各不确定度的评定从表4可以看出，液相色谱法测定药用聚丙烯组合盖中的测量不确定度的来源主要为回收率和标准溶液浓度两方面引起的不确定度，回收率引起的不确定度最大。通过对分析数据和实验室内长期实践经验总结分析,可以看出在整个检测过程中前处理是结果准确性的关键，在进行前处理步骤时需格外谨慎以保证抗氧剂1010尽可能被获得。称量、玻璃器皿在转移和稀释溶液时所引起的不确定度比较小，基本可以不予考虑。

另外，由于抗氧剂1010自身的不稳定，应尽可能缩短检测周期，特别是对样品供试液的保存，最好是回流、过滤、蒸干、定容和测量都能够在第一时间完成。

[1] 国家食品药品监督管理总局.化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则(试行)[S].2012.

[2] 国家质量技术监督局.测量不确定度评定与表示[S].JJF1059-1999.北京:中国计量出版社,1999.

[3] 占永革,黄湘燕,龚剑.离子色谱法测定泡菜中亚硝酸盐的测量不确定度评定[J].食品科学,2011,32(22):163-170.

[4] 国家质量监督检验检疫总局.JJG196-2006 常用玻璃量器检定规程[S].2006.

[5] 祁雄.微波消解-冷原子吸收法测定大米中汞的不确定度评定[J].光谱实验室,2007,24(6):1138-1144.

The Evaluation of Uncertainty for the Content of Antioxidant 1010 in Determining the Medical Polypropylene Combined Cover by Liquid Chromatography

QU Ya-nan FANG Min LV Peng-ju XIE Xin-yi Packaging Materials and Containers Test Center of Guangdong Medical Instruments Quality surveillance and Inspection Institute (Guangzhou 510663)

The antioxidant 1010 in the Medicinal Polypropylene Combined Cover samples was tested in parallel by Liquid Chromatography according to the method of the European Pharmacopoeia 3.1.3 polyolefin and a mathematical model was established to explore the main factors of uncertainty during the test. The results showed that the major factors came from the uncertainty of recovery rate and concentration of standard solution.

liquid chromatography, medical polypropylene, antioxidant 1010, uncertainty

1006-6586(2013)04-0048-05

R197.39

A

2012-11-29