HPLC法测定肾石通颗粒(无糖型)中延胡索乙素的含量

孙 奇

（辽宁省中医院，辽宁 沈阳 110032）

HPLC法测定肾石通颗粒(无糖型)中延胡索乙素的含量

孙 奇

（辽宁省中医院，辽宁 沈阳 110032）

目的 建立肾石通颗粒（无糖型）中延胡索乙素的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法。色谱条件：色谱柱：Diamonsil®(钻石)C18（5μm，250×4.6mm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（三乙胺调pH6.0）（55∶45）；检测波长：280nm；柱温：40℃；流速：1.0mL/min；理论板数按延胡索乙素峰计算不低于3000。结果 延胡索乙素在0.1～0.6μg之间线性关系良好，r=0.9996。延胡索乙素平均回收率为99.3%，RSD=0.83%。结论 该方法准确，重复性好，可用于肾石通颗粒（无糖型）的质量控制。

肾石通颗粒（无糖型）；延胡索乙素；HPLC法；含量测定

肾石通颗粒(无糖型)具有清热利湿，活血止痛，化石，排石的功效，用于治疗肾结石，肾盂结石，膀胱结石，输尿管结石，由金钱草、王不留行（炒）、萹蓄、延胡索（醋制）、鸡内金（烫）、丹参、木香、瞿麦、牛膝、海金沙10味中药组成。该中成药收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册[1]，标准中无定量指标，不能有效控制其质量。延胡索为方中的臣药，其主要成分为延胡索乙素，我们采用HPLC法[2]对方中延胡索乙素进行含量测定。方法简便、准确，重现性好。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪（泵LC-10Atvp、检测器SPD-10Avp）；Class-vp工作站；GR-202型十万分之一电子天平（日本AND公司）；BS1245万分之一电子天平（赛多利斯）；甲醇（色谱纯）、磷酸（AR）、三乙胺（AR）、乙醚（AR）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Diamonsil®(钻石)C18（5μm，250×4.6mm）；甲醇-0.1%磷酸（三乙胺调pH6.0）（55∶45）作为流动相；流速为每分钟1.0mL，柱温40℃。检测波长280nm。理论板数按延胡索乙素计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备

取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1mL含12.5µg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取肾石通颗粒（无糖型）10g，精密称定，加水50mL，称重，加入氨水调节pH至9～10，超声处理30min（功率250W，频率33KHz），放冷，补重，转移置分液漏斗中，用乙醚萃取5次，每次30mL，合并乙醚液，置水浴上蒸干，残渣加少量甲醇洗涤，合并洗液置5mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45µm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。

2.4 线性关系试验

分别精密称取延胡索乙素适量，用甲醇稀释配制成如下

浓度的溶液：5.104µg/mL、10.208µg/mL、12.76µg/mL、20.416µg/mL、30.624µg/mL。分别定量进样20µL，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程为：Y = 521196.96 X+1570.66（r = 0.9996），结果表明，延胡索乙素在0.1～0.6µg范围内线性关系良好。

2.5 阴性对照样品溶液的制备

按处方比例配制不含延胡索的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备。精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20µL，按照2.1项下的色谱条件，测定，试验结果表明，阴性对照样品溶液在延胡索乙素对照品位置处无吸收峰，本方法专属性良好。

2.6 精密度试验

分别取肾石通颗粒（无糖型）060902批的供试品溶液20µL，按正文含量测定项下色谱条件，重复进样5次，测定峰面积，结果平均峰面积为263660，RSD=0.964%。试验结果表明，本方法精密度良好。

2.7 稳定性试验

取肾石通颗粒（无糖型）批号：060902的供试品溶液，于0、4、8、16、24h测定延胡索乙素峰面积，测得其峰面积的平均值为264251，RSD为0.831%，表明供试品溶液在室温条件下放置24h内稳定。

2.8 重现性试验

取肾石通颗粒（无糖型）批号：060902，精密称定6份，按含量测定项下的方法操作，制备供试品溶液，测定样品中延胡索乙素的含量，结果平均含量为10.85µg/g，RSD=0.17%。

2.9 回收率试验

取同一份肾石通颗粒（无糖型）样品6份，精密加入50mL水，加入氨水调节pH至9～10，超声处理30min（功率250W，频率33KHz），放冷，补重，溶液转移置分液漏斗中，用乙醚萃取5次，每次30mL，合并乙醚液，置水浴上蒸干，残渣加少量甲醇洗涤，合并洗液置5mL量瓶中，依次每份精密加入延胡索乙素对照品溶液1mL（对照品溶液为CR =115.76µg/mL，即每组分别加入对照品115.76µg），加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45µm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，定量进样20µL，计算平均回收率为99.3%，RSD为0.83%。

2.10 样品含量测定

按本质量标准含量测定项下方法操作，制备供试品溶液，测定3批肾石通颗粒（无糖型）（批号：060901、060902、060903）样品中延胡索乙素的含量，测定结果分别为54.2，54.3，54.3µg/袋。

3 讨 论

流动相的筛选与确定，曾采用不同比例的甲醇-0.1%磷酸（三乙胺调pH6.0），甲醇-水为流动相，进行了试验，结果甲醇-0.1%磷酸（三乙胺调pH6.0）体积比为55∶45时，供试品中延胡索乙素与相邻组分分离度良好，故确定为含量测定项下色谱条件。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂(第二册)[M].北京:化学工业出版社, 1990.

[2] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2010.

R917

B

1671-8194（2013）23-0065-01