ACP215去甘油洗涤过程的“冲红”现象的调查与分析

徐芳 孙韵 陈峰 李阿中 周华平

●输血专题

ACP215去甘油洗涤过程的“冲红”现象的调查与分析

徐芳 孙韵 陈峰 李阿中 周华平

冰冻红细胞是红细胞加40%甘油作为保护剂冰冻后的制品，贮存于-65℃以下，已广泛用于稀有血型血液的保存。当临床急需时，冰冻红细胞在40℃解冻，通过系列的洗涤而制成解冻红细胞应用于临床。目前洗涤的方式有手工洗涤和机器自动洗涤，国内现大多数采用机器自动洗涤。我中心近2年采用ACP215洗涤机自动洗涤，发现洗涤刚开始废液颜色为粉红，继续洗涤几分钟后废液颜色突然变为深红，溶血很明显，继续洗涤废液颜色会逐渐变淡，这个现象被称为“冲红”，本文对此进行原因分析，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 冰冻红细胞、9%氯化钠溶液和0.9%氯化钠溶液（上海血液技术公司）、水浴箱、接管机和热合机（泰尔茂公司）、ACP215洗涤机（美国血液技术公司）、HAEMONETICS比色卡。

1.2 方法 将常规冰冻的红细胞20袋，依次40℃循环水浴融化，融化后即刻取出留样。然后与235耗材无菌连接，蓝色管连接9%氯化钠溶液，黄色管接0.9%氯化钠溶液。根据机器程序和细胞单位数设置参数，1U解冻红细胞设9%氯化钠溶液80ml，NaCl Dilute Vol 1/2为170ml，NaCl Dilute Vol 2/2为20ml；2U解冻红细胞设9%氯化钠溶液160ml，NaCl Dilute Vol 1/2为340ml，NaCl Dilute Vol 2/2为400ml；自动洗涤后采用0.9%氯化钠溶液充当保养液。当机器运行到屏幕显示（a）“Dilutie 2 of 2 Filling Bowl”、（b）“Wash 1 of 6”、（c）“Wash 2 of 6”、（d）“Wash 3 of 6”、（e）“Wash 4 of 6”、（f）“Wash 5 of 6”、（g）“Wash 6 of 6”、（h）“Add Preservation 1/1”等8个阶段程序时，分别取末尾流出的废液和标准比色卡进行对比，找出对应游离血红蛋白接近目视含量（g/L），介于两个值之间的取平均值。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析。

2 结果

20袋血液样本平均采集量（1.4±0.50）U，最终洗涤完毕后h点各样本游离血红蛋白含量均值为（0.49± 0.21）g/L，符合国家有关标准（0.25～1.00g/L）。洗涤液游离血红蛋白含量在a、b点呈现增高趋势，大多在c、d点达到最高值，分别是（6.42±1.44）g/L和（5.60±1.61）g/L，然后开始逐步降低。与e点（3.79±1.25）g/L、f点（2.46±0.93）g/ L、g点（1.24±0.25）g/L和h点（0.49±0.21）g/L比较，差异有统计学意义（P＜0.01），与洗涤过程中废液颜色突然变为深红的时点相一致。

3 讨论

甘油可作为冰冻红细胞的保护剂，添加甘油后红细胞制品呈现高渗状态，因此冰冻红细胞制品必须经过洗涤后才能用于临床使用。本研究采用ACP215洗涤机，依次加入浓氯化钠溶液、0.9%氯化钠溶液对冰冻红细胞进行自动去甘油洗涤，可分为8个不同时间点。从程序上看，a点之前主要为浓氯化钠溶液、解冻红细胞、甘油和极少量0.9%氯化钠溶液的混合液。由于该混合液总体上仍处于高渗状态，基本上与原冰冻红细胞等渗，细胞未被破坏。a点时的废液则是由浓氯化钠溶液、解冻红细胞、甘油和部分0.9%氯化钠溶液的混合液经离心后产生，由于渗透压下降幅度较少，故红细胞破坏少，游离血红蛋白浓度低，而且此时总体积相对较大，因此经离心流出的废液颜色较淡。b点开始到h点则边加0.9%氯化钠溶液边洗涤，此时总体积即固定为275ml，相对前期大大减小，而且渗透压逐渐下降，导致少量红细胞破坏出现游离血红蛋白。结果显示b、c两点存在“冲红”现象，其原因可能与渗透压下降有关。研究[1]显示红细胞的慢速冷冻损伤主要是水结冰时红细胞内外产生的高浓度电解质作用于细胞膜，引起脂蛋白复合物的变性和部分类脂质的丢失，增加细胞对阳离子的通透性，并使细胞膜上形成一些小孔。冰融化时水进入细胞内引起渗透休克，导致红细胞失去活性。a点时红细胞周围有大量浓氯化钠溶液产生高渗盐析作用，高渗作用使红细胞外水分子不会立即大量进入细胞内而产生快速溶血，盐析作用使细胞内甘油大量游到细胞外，所以a点时废液的甘油浓度较高。随着后续洗涤过程中0.9%氯化钠溶液的加入，渗透压发生改变，水分子通过部分变性红细胞的细胞膜上小孔渐渐进入细胞内而产生溶血，故c、d两点时废液的游离血红蛋白浓度増高。继续加入0.9%氯化钠溶液，含变性细胞膜的红细胞渐渐减少，溶血的红细胞减少，导致游离血红蛋白减少，废液颜色变淡。

国家标准《全血及成分血质量要求》GB18469-2012[2]规定冰冻解冻去甘油洗涤红细胞的游离血红蛋白含量≤1g/L，废液颜色淡于比色卡3号标准品。实际工作中我们要求h点时废液应接近标准品1～2号水平，如未达到将选择程序继续洗涤。ACP215机器洗涤过程存在“冲红”现象，而废液的颜色能较准确反映游离血红蛋白含量，因此在实际洗涤过程中应及时采用比色卡监测游离血红蛋白含量，以保障制备的血液制品符合国家标准。

[1]安万新.输血技术学 [M].1版.北京:科学技术文献出版社,2006: 189-190.

[2]中华人民共和国卫生部.全血及成分血质量要求,GB18469-2012:8.

2012-11-15）

（本文编辑：胥昀）

310006 杭州，浙江省血液中心血液制备供应科