高效液相色谱法测定养阴清肺丸中芍药苷的含量

范桂强 柳俊萍 颉维民 董军杰

(河北省衡水市食品药品检验所化学室，河北衡水 053000)

高效液相色谱法测定养阴清肺丸中芍药苷的含量

范桂强 柳俊萍1颉维民1董军杰△

(河北省衡水市食品药品检验所化学室，河北衡水 053000)

色谱法，高压液相;芍药甙;分析;丸剂

养阴清肺丸是由生地黄、玄参、麦门冬、白芍药、川贝母、牡丹皮、薄荷、甘草8味药组成的中药复方制剂，具有养阴润燥、清肺利咽的功能。主要用于阴虚肺燥，咽喉干痛，干咳少痰或痰中带血。白芍药敛阴泄热，牡丹皮凉血消肿，是该方剂的主要成分之一。现行药品质量标准中无白芍药、牡丹皮中芍药苷的含量测定方法，为了进一步控制产品质量，提高药品标准，本研究采用高效液相色谱(HPLC)法测定养阴清肺丸中的主要成分芍药苷的含量，结果如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与制剂 高效液相色谱仪:Waters e2695高效液相色谱仪，检测器:Waters 2489紫外检测器;色谱工作站:Empower。养阴清肺丸为从市面购得，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产(国药准字Z11020179，批号:0013657、0013659、0013660);芍药苷对照品(批号:2011 －07－36—2010－03－05，中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯;乙醇为分析纯;水为纯化水。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 Waters色谱柱(SymmetryC18，3.9 mm×150 mm，5 μm);流动相:乙腈 － 0.1% 磷酸溶液(14∶86);流速:1.0 mL/min;检测波长:230 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL;理论板数:按芍药苷峰计应不低于3 000;芍药苷峰与其前后相邻峰的分离度均＞1.5。

1.2.2 试验溶液的制备

1.2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品0.010 46 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀;精密吸取5 mL，置25 mL量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL中含20 μg的溶液，即得。

1.2.2.2 供试品溶液的制备 取养阴清肺丸约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理50 min，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

1.2.2.3 阴性对照溶液的制备 按养阴清肺丸处方比例和工艺同法制成缺牡丹皮及白芍药的阴性样品，按上述供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。

1.2.2.4 样品测定干扰性试验 按上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μL，注入色谱仪，测定。供试品色谱中，芍药苷峰与其他峰分离较好，阴性样品在芍药苷出峰处无干扰峰出现，结果表明本法可行。

1.2.3 线性关系考察 精密称取芍药苷对照品0.021 07 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇溶解至刻度，摇匀，分别精密量取 2、3.5、5、6、7.5、9 mL，置 50 mL 容量瓶中，加稀乙醇制备成不同浓度对照品溶液。精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，按上述条件分别测定芍药苷的吸收峰峰面积。

1.2.4 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10 μL，重复进样5次，测得峰面积并计算。

1.2.5 重复性试验 取北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产的养阴清肺丸(批号:0013657)样品，按0.5 g精密称取样品6份，按1.2.2项制备供试品溶液，吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定并计算含量。

1.2.6 稳定性试验 取1.2.5供试品溶液(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号:0013657)，每隔2 h进样测定峰面积。

1.2.7 加样回收率试验 取已知含量的养阴清肺丸样品(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批号:0013657)，取0.25 g，精密称定共9份，分别精密加入浓度为 7.380 0、9.615 0、11.070 0 mg/mL 的芍药苷对照品溶液50 mL(精密称取芍药苷对照品0.014 76、0.012 82 g置100 mL的容量瓶中，分别加稀乙醇使溶解，并稀释至刻度，再分别吸取浓度为 0.1476 mg/mL的对照品 10、15 mL，浓度为0.1282 mg/mL的对照品溶液15 mL，分别置于200 mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，备用)，按1.2.2项下自“精密加入稀乙醇50 mL”起制备得供试品溶液，用外标法测定，计算回收率。

1.2.8 样品测定 按 1.2.1、1.2.2 方法测定 3 批样品含量。

2 结果

2.1 对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液的色谱见图1～3。

图1 芍药苷对照品HPLC图

图2 样品溶液HPLC图

图3 阴性样品溶液HPLC图

2.2 芍药苷对照品的精密度试验结果 见表1。

表1 芍药苷对照品的精密度试验结果

由表1可见，芍药苷对照品精密度良好。

2.3 供试品溶液稳定性试验结果 见表3。

表2 供试品溶液稳定性试验结果

由表2可见，供试品溶液在12 h内稳定。

2.4 芍药苷回收率测定结果 见表3。

表3 芍药苷回收率测定结果

由表3可见，芍药苷含量测定加样回收率试验符合规定。

2.5 芍药苷线性关系考察结果 见表5。

表4 芍药苷线性关系考察结果

由表4可见，峰面积为3次测定平均值。以进样量(μg)与峰面积进行回归计算，得回归方程:Y=1.258 3×106X+2.306 4 ×104 r=0.999 5，表明芍药苷在0.081 ～0.365 μg范围内呈良好的线性关系。

2.6 含量测定重复性试验结果 见表5。

表5 含量测定重复性试验结果

由表5可见，6次含量测定数据重复性良好。

2.7 样品中芍药苷含量测定结果 见表6。

表6 样品中芍药苷含量测定结果

由表6可见，芍药苷含量均符合规定。

3 讨论

养阴清肺丸是中药复方制剂，成分复杂，为达到芍药苷的理想分离效果，本试验参照《中国人民共和国药典2010年版》一部方法，采用乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)的流动相［1］，测定本品中芍药苷的含量，对流动相比例进行了调整，比较了乙腈 －0.1%磷酸溶液(13∶87)、(15∶85)、(16∶84)等不同比例流动相的分离效果，结果证明(14∶86)的流动相可使芍药苷的峰形对称，分离完全，效果最好。通过对不同时间超声提取结果的比较，确定超声50 min最好。通过对不同提取试剂的试验比较，确定稀乙醇作为提取试剂效果最好。

用本法测定养阴清肺丸中芍药苷的含量作为定量指标具有实际意义，方法简便、快速，准确可靠。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版:一部［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:96.

R284.1

A

1002－2619(2012)07－1063－03

△通讯作者:河北省医学情报研究所，河北 石家庄 050071

1 河北省衡水市食品药品检验所中药室，河北 衡水 053000

范桂强(1978—)，男，主管药师，学士。从事药品检验与标准研究工作。研究方向:药品检验与分析。

2012－04－11)