荧光原位杂交检测乳腺癌Her-2基因的临床病理意义

叶 蓉 王淑华

怀化市第一人民医院，湖南怀化 418000

目前，乳腺癌已经成为女性最为常见的一种恶性肿瘤，发病率在逐年增加。 根据国外的最新统计显示，国外乳腺癌患者占恶性肿瘤中的30%，是恶性肿瘤的第一位[1]。 免疫组织化学法的操作简单方便，价格比较低，是应用比较广泛的一种方法，但是假阳性比较高。 因此才需要荧光原位杂交法再次检查，得到准确的Her-2 基因的状态，为诊断提供更为可靠的依据，对于治疗上也可以依据准确的Her-2 基因的状态来选择最合适的治疗方案。该院针对这一现象，选取2009年3月—2011年3月手术切除的乳腺癌标本48 例，对其采用荧光原位杂交法进行检测，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该院2009年3月—2011年3月手术切除乳腺癌标本48例，年龄在35～60 岁，平均年龄47.5 岁。 经过10%的中性甲醛固定，然后用常规的石蜡包埋，进行切片，HE 染色显示结果，证实确实为乳腺癌。

1.2 方法

采用荧光原位杂交法：将标本用10%的中性甲醛固定，固定于甲醛6～48 h，然后用常规的石蜡包埋，并且标出杂交区域。 然后进行切片处理，用65～75 ℃进行烤片。 再使用二甲苯脱蜡呈水化，室温下以100%、85%和70%的乙醇进行2 min 的脱水，去离子水中浸泡3 min。在50 ℃的时候，浸入30%酸性亚硫酸钠30 min，然后将用缓冲液洗片2 次，再放入37 ℃的蛋白酶K 溶液中，浸泡5～10 min。 再次进行洗片，在室温下放入0.1 mol/L HCL，浸泡5～10 min。 再次进行洗片， 然后将玻片放在-20 ℃、70%、85%和100%的乙醇中进行脱水，浸泡2 min 左右。 室温下再浸入丙酮，浸泡2 min，再取出进行自然风干，制作成干片。 然后进行烤片到56 ℃后，滴入探针混合液到杂交区，盖玻片后采用蜡胶进行封边处理。 再放入杂交湿盒，进行密封处理，在40 ℃的温箱中存放14～18 min。最后将切片放入洗涤液中洗去多余的探针，放在暗处进行干燥，最后滴加DAPI 显色液复染，盖上玻片，就可以放在显微镜下进行观察，并且将得到的结果进行记录。

采用免疫组织化学法：Her-2 蛋白表达检测采用的是免疫组化ABC 法，同时要检测ER、PR、P53 基因，而且要进行记录，还要记录腋窝转移淋巴结的数目，并且将结果记录好进行比对。

1.3 评定标准

1.3.1 荧光原位杂交法 在观察癌细胞的时候进行信号计数，在这个时候选择细胞核大小基本相同，核的边界完整，并且DAPI染色一样，细胞核孤立没有重叠，绿色信号显示清晰，以及一般为两个或以上信号点的细胞，进行随机的计数30 个细胞，统计30 个细胞核中红色信号的总数和绿色信号的总数的比值， 这个统计一般称为ratio。 ratio＜1.8 的时候为阴性，显示这个样本没有Her-2 基因；ratio＞2.2 的时候为阳性， 显示这个样本中的Her-2基因发生了扩增的情况；ratio 在1.8～2.2 的时候， 选择增加计数细胞，或者是重新做一次应该原位杂交检查，再判定最终结果。

1.3.2 免疫组织化学法 Her-2 的阳性物质在细胞膜，肿瘤的组织细胞膜没有棕黄的染色或者仅仅是少于10%的肿瘤组织细胞膜有较弱的棕黄染色属于（-）；＞10%的肿瘤组织的部分细胞膜出现不完整而且比较弱的棕黄染色属于（+）；＞10%肿瘤组织细胞膜出现完整而且比较弱或者是中等强度的棕黄染色属于（++）；＞10%肿瘤组织细胞膜全部呈高强度的棕黄染色属于（+++）[2]。

1.4 观察指标

主要是观察采用荧光原位杂交法检测乳腺癌中Her-2 基因的临床病理意义。

1.5 统计方法

数据都经过专业的统计分析软件进行处理。 计量数据都采用t 检验，所有的计数数据采用χ2进行检验。

2 结果

经过荧光原位杂交法检测后发现， 免疫组织化学法检测Her-2 蛋白表达++的标本中Her-2 基因扩增的有11 例， 比例为27.5%；Her-2 基因无扩增的有29 例，比例为72.5%。 免疫组织化学法检测Her-2 蛋白表达+++的标本中Her-2 基因扩增的有6例， 比例为75.0%；Her-2 基因无扩增的有2 例， 比例为25.0%。Her-2 蛋白免疫组织化学法表达强度高，患者Her-2 基因扩增的可能性就越大，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表1。

表1 乳腺癌Her-2 基因扩增与Her-2 蛋白的关系[n(%)]

3 讨论

因现代生物学以及相关科学的发展速度比较快， 所以对于Her-2 基因的研究以及相关的一些治疗，在国外以及国内都得到了很高的重视。 根据大量的临床研究可以发现，Her-2 基因过度表达，表示乳腺癌有早期复发的倾向，而且患者的生命在缩短，治疗方法上，化疗和三苯氧胺的治疗效果都不是很好。 在美国采用的是注射曲妥珠单抗，曲妥珠单抗是一种新型、低毒、高效并且选择性强的一种治疗药物。 曲妥珠单抗主要是抗Her-2 基因的单克隆抗体，这种注射药物只对Her-2 高表达的乳腺癌患者有效，所以在治疗以前要对患者进行Her-2 基因的检测，这样荧光原位杂交法在临床上就更加至关重要了[3]。 在该次试验中荧光原位杂交法和免疫组织化学法的检测结果都是比较好的。 而且检测乳腺癌组织中的Her-2 基因的情况，可以作为判断乳腺癌预后的独立指标， 更方便的指导临床上可以选用合适的治疗方案。 但免疫组织化学法的假阳性比较高，因此需要荧光原位杂交法再次检查，得到准确的Her-2 基因的状态。

综合上述情况， 应用荧光原位杂交法检测乳腺癌Her-2 基因，结果的准确性是很高的，准确的结果可以帮助更加深入的研究以及在临床病理特征的关系，对于诊断也有更为可靠的依据，对于乳腺癌的预后以及治疗都会很重要的意义。

[1] 刘冰. 乳腺癌患者HER-2 基因的荧光原位杂交法检测与分析[D].大连：大连医科大学, 2009.

[2] 苏静，杨郁，马晓龙，等. 荧光原位杂交检测乳腺癌人表皮生长因子受体2 基因扩增及与临床病理特征的关系[J].北京大学学报(医学版).2011(2):199-203.

[3] 张伟，彭大云，陈晓东，等. 乳腺癌HER2 基因荧光原位杂交与显色原位杂交检测对比研究[J]. 华南国防医学杂志. 2011(1): 13-15.