瘦素和瘦素受体在肺癌组织中的表达

刘 毅，吴风雷，胡 楠，杨成喜

(连云港市第一人民医院病理科，江苏 连云港221002)

肺癌是目前病死率最高的恶性肿瘤，其病因一直是研究的热点，肥胖是一些肿瘤重要的诱因已被公认，而大量的证据提示瘦素作为典型的脂肪因子在肿瘤的发生、发展中起着重要的作用［1-3］。近年来研究结果显示，瘦素与肺癌发生的关系密切［4］。本研究旨在检测瘦素及其受体在肺癌组织、相应癌旁组织和正常组织中的表达，探讨其与肺癌发生、发展的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集连云港市第一人民医院病理科2009年至2012年存档的68 例原发性肺癌石蜡包埋标本，其中男性47 例，女性21 例;年龄(59. 8 ±8.6)岁;依据2009年第7 版肺癌TNM 分期标准:I期18 例，Ⅱ期25 例，Ⅲ期25 例;肺腺癌20 例，肺鳞癌48例。患者术前均未经放疗或化疗治疗，均有完整的临床病理资料和随访资料，所有死亡病例均与肿瘤复发和转移有关。双盲法对全部切片进行组织学分型复诊，其中小细胞肺癌的诊断均经过免疫组化Chr-A，Syn，CD56，CK，NSE 等5 项指标证实。

1.2 主要试剂 兔抗人瘦素多克隆抗体Ob(A-20)、羊抗人瘦素多克隆抗体Ob-R(M-18)及S-P 免疫组化染色试剂盒购自Santa Cruz 公司。

1.3 方法 标本经中性甲醛固定，梯度酒精脱水，常规石蜡包埋切片，切片厚度4 μm。操作按试剂盒说明书进行，后经苏木精复染、封片、观察。用PBS 替代一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定 显微镜下细胞浆呈棕褐色或棕黄色为阳性细胞。每张切片随机取10 个高倍视野，切片中阳性细胞表达的比例≥50%为(+++);25% ～＜50%为(++);5% ～ ＜25% 为(+);＜5% 或无着色为(-)。

1.5 统计学处理 采用SPSS 11.5 进行统计学处理，率的比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 瘦素表达的检测结果 68 例肺癌组织中，19 例(-)，8 例(+)，19 例(++)，22 例(+++)，阳性率为72.06%;68 例相应癌旁组织中，39 例(- )，6 例(+)，14 例(++)，9 例(+++)，阳性率为42.65%;68 例正常肺组织中，50 例(- )，6 例(+ )，8 例(++)，4 例(+++)，阳性率为26.47%。癌组织中阳性率明显高于相应癌旁组织和正常肺组织(P ＜0.05);相应癌旁组织和正常肺组织阳性率比较差异无统计学意义(P ＞0.05)。见表1。

表1 瘦素的表达情况 例(%)

2.2 瘦素受体表达的检测结果 68 例肺癌组织中，24 例(-)，11 例(+)，12 例(++)，21 例(+++)，阳性率64.71%;68 例相应癌旁组织中，45 例(-)，8 例(+)，8 例(++)，7 例(+++)，阳性率33.83%;68 例正常肺组织中，48 例(-)，5 例(+)，10 例(++)，5例(+++)，阳性率为29.41%。癌组织阳性率明显高于相应癌旁组织和正常肺组织(P ＜0.05);相应癌旁组织和正常肺组织阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 瘦素受体的表达情况 例(%)

2.3 瘦素和瘦素受体在肺癌组织中表达的相关性68 例肺癌组织中瘦素和瘦素受体表达共同阳性的40例，共同阴性的15 例，两者存在显著正相关关系(r =0.754，P ＜0.01)。

3 讨论

恶性肿瘤细胞的重要生物学特征是无限增殖性和去分化性。瘦素是一种蛋白质激素，近年来临床和基础研究证实其与肿瘤的发生密切相关［5-7］，有促进多种细胞增殖与分化的作用。瘦素是由Ob 基因编码的蛋白质，人类Ob 基因位于7 号染色体(7q31.3)，由167 个氨基酸残基组成，N 端是由21 个亲水氨基酸残基构成的信号肽，表明瘦素是一种分泌蛋白质，成熟蛋白由166 个氨基酸残基组成，相对分子质量为16 000，单链，链内的2 个半胱氨酸残基构成1 个二硫桥，这种结构也常见于其他分泌性多肽。据氨基酸序列推测，瘦素是球形分子，无明显的结构域或跨膜区，以单体形式存在于血浆中。人类瘦素受体基因位于1 号染色体(1p31)，长70 kb，由20 个外显子和19 个内含子组成。外显子3 和外显子4 中含编码信号序列，外显子18 编码跨膜结构域，外显子19 和外显子20 编码胞内结构域。人类瘦素受体于1995年克隆成功，由894 个氨基酸组成，包括胞外区、跨膜区和胞内区。瘦素受体属I类细胞因子受体家族，其和白介素-6 受体的信号转导成分糖蛋白、粒细胞集落刺激因子受体和白血病因子受体密切相关。瘦素受体在体内分布于多种组织器官，如神经系统、心脏、胃、肝脏、胰腺、肾脏、前列腺、睾丸、卵巢、子宫、胎盘、皮肤和肌肉等［8-12］。Terzidis等［1］研究发现在校正公认的混杂因素后，血清瘦素水平仍是肺癌的一个独立危险因素，这与分子机制研究结论一致，即瘦素启动基因与发生肺癌的危险性增高有关，也可能是由于上游肿瘤相关因子失调的原因。另外，Carpagnano 等［2］报道，非小细胞肺癌患者呼出气冷凝液、痰液、血液、尿液及支气管肺泡灌洗液中瘦素水平明显增加，认为瘦素在非小细胞肺癌中发挥了重要的作用。Petridou 等［3］研究发现，血清瘦素水平是一个独立的肺癌危险因素，促进肺癌的发生、发展。作者用免疫组化方法检测68 例肺癌组织、相应癌旁组织和正常肺组织中瘦素、瘦素受体表达，结果示癌组织中的表达高于相应癌旁组织和正常肺组织，差异有统计学意义(P ＜0.05)，提示瘦素在病理状态下的过表达可促进肿瘤生长。68 例肺癌组织中瘦素和瘦素受体表达共同阳性的40 例，共同阴性的15 例，两者呈正相关关系(r=0.754，P ＜0.01)，说明瘦素与其受体结合后，能够促进肺癌细胞的增殖。

作者初步证实了瘦素、瘦素受体的异常表达与肺癌的进展密切相关。瘦素、瘦素受体在肺癌发生、发展过程中呈正相关关系，提示瘦素可能是通过上调其受体的数量促进肺癌的发生、发展。但肺癌组织中瘦素合成、表达以及瘦素通过与受体结合后激活的具体信号通路，如何发挥生物学效应还有待深入研究。

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