Huntington舞蹈病一家系4例遗传分析

2012-11-27 08:23王艳鸽
河南大学学报(医学版) 2012年1期
关键词:证者家系遗传学

王艳鸽,娄 强,董 烁

(河南大学 医学院,河南 开封475004)

1 研究对象和方法

1.1 研究对象

Huntington舞蹈病家系:一个家族性Huntington舞蹈病家系由本院遗传咨询门诊提供。

1.2 研究方法

对患者家系进行家系调查和分析,观察患者症状,对患者进行医院常规检查及实验室遗传学分析。

2 家系分析及遗传学检查

2.1 先证者

先证者,男,32岁,小学教师,因近半年手部肌肉不自主震颤于2010年12月在河南大学东京医院神经内科就诊,后转入遗传咨询门诊。主诉症状:患者半年来,发现手部肌肉不自主震颤,在上课写板书时不流利,吃饭时会有夹不稳菜的情况,通过意志控制不住症状的发生,影响工作和生活,其他没有异样症状。父亲及其姐妹均有此症状,且比较严重,伴有一定痴呆和精神障碍,父母非近亲结婚。因患者家庭里有类似病例,怀疑是遗传病,担心会传递给自己的子女,所以前来就诊。

体格检查:身体健康,智力正常,发育正常,系统检查未见异常。

头颅CT及MRI检查:正常

实验室检查:血、尿、粪常规及肝、肾功能均正常。

2.2 家系调查

系谱绘制:根据先证者提供情况绘制系谱。

2.3 遗传学检查

基因诊断:按照知情同意原则抽取家系成员外周血,采用酚氯仿抽提法提取基因组DNA。参照文献[1]及NCBI,向上海英骏公司订购2条引物(上游引物:5′-CGACCCTGGAAAAGCTGATG-3′;下游引物:5′-GGCTGAGGAAGCTGAGGAG-3′),采 用两步法进行PCR扩增,95℃下进行预变性5min:然后进入循环。条件为95℃40s.68℃60s循环30次,最后72℃下延伸10min。取5μLPCR产物在含溴化乙锭的体积分数为2%琼脂糖凝胶上电泳之后在紫外灯下观察扩增片段。

2.4 诊断

Huntington舞蹈病。

3 家系分析及遗传学检查结果

3.1 系谱分析结果(见图1)

家系中无近亲结婚者,3代(第IV代咨询,除去)20人中共有4人(男2人,女2人)患有类似疾病。其中第I代中先证者的祖母和第II代中先证者的姑姑均死于本病(先证者回忆)。其他患者均得到实验室确诊。

发病年龄:I 2为45岁(先证者回忆);II 2为45岁,II 5为42岁,II 7为43岁;III 1为42岁,III 6为32岁。

图1 Huntington舞蹈病家系图

3.2 临床检查结果(见表1)

表1 Huntington舞蹈病家系临床资料

续表1

3.3 基因诊断结果(见图2)

阴性对照Neg为和患者家族毫无关联的健康人,带有2个正常基因,在180bp左右有1条条带,提示CAG重复次数在20次左右。

患者的正常同胞II 3以及正常同胞的子女III 4、III 5都显示1条带,说明都没有携带致病基因。

患者II 5、II 7除在180bp左右显示1条带外,另外在300bp左右显示另1条带,说明有1个正常基因,1个致病基因,CAG重复次数在60次左右。

患者子女根据条带可以判断出III 1、III 2、III 6、III 8、III 9为致病基因的携带者,提示病情轻微和无症状只是延迟显性的结果。III 3、III 7、III 10、IV 1为正常基因,后代也不会再患此病。

图2 家系成员IT15基因PCR产物琼脂糖凝胶电泳图

3 讨论

Huntington舞蹈病(Huntington disease,HD)是一种以神经系统退行性改变为主要特征的常染色体显性遗传病[2],几乎任何年龄都可发病,但通常是在35~50岁起病[3]。临床上HD主要表现为不受控制的舞蹈样动作伴认知障碍和精神异常,呈进行性加重,患者一般在症状首次出现后15~20a死亡。

本病临床症状、体征和病理改变较为典型,临床诊断较为明确,尤其对于有家族史者,本病易于诊断。但由于目前临床缺乏有效治疗方法,且患者多于成年后发病,发病前往往已经生育子女,故本病的症状前、产前及植入前诊断显得尤为重要。

HD 基因定位于 4p16.3[4-5],被命名为IT15 基因,该基因开放阅读框5′端该基因的不稳定突变,即该基因5′端编码区(CAG)n三核苷酸的异常扩增是HD的遗传学基础[6],因此基因诊断是HD确诊的最可靠依据,特别是对于临床上的类似症状病例的区分显得尤为重要。

本病例家族中连续3代共有4人发病,无隔代遗传现象,发病无性别差异(2男2女),符合常染色体显性遗传,这与刘娜等[7]报道的1个家系6例患者、赵育海等[8]报道的2个家系3名患者遗传方式相同。本病例报道的发病年龄在32~45岁之间,与国内目前报道的家系发病年龄一般为30~50岁基本一致。

本家系先证者父亲II 5 42岁时开始出现不自主舞蹈样动作,且随年龄增加病情加重,出现认知障碍和精神异常,而先证III 6 32岁出现症状,呈现典型的遗传早现现象。先证者的姑姑II 2 45岁出现症状,但其女儿III 1出现症状并没有提前太多(42岁),这提示有遗传印记现象发生,同样的基因通过男性和女性向下一代传递时出现了不同的表现。

本家系先证者的兄弟姐妹根据知情同意原则都做了基因诊断,确诊出3名症状前患者(III 2、III 8、III 9),表现出延迟显性,对于该家系中尚未婚育的风险者而言具有重要意义。

总之,Huntington舞蹈病的遗传学检查,不但可以获得准确的基因诊断结果,为家系成员提供科学客观的遗传咨询,还可以为相关基因的诊断项目向临床广泛推广提供技术保障,对后续HD发病机制及实验治疗研究提供重要参考。

[1]Stevanin G,Fujigasaki H,Lebre A S,et al.Huntington’s disease-like phenotype due to trinucleotide repeats expansions in the TBP and JPH3genes[J].Brain,2003,12(6):1 599-1 603.

[2]Xuereb J H,MacMillan J C,Snell R,et al.Neuropathological diagnosis and CAG repeat expansion in Huntington’s disease[J].J Neurol Neurosurg Psychiatry,1996,60(1):78-81.

[3]王晔,顾振纶,秦正红.Huntingtin聚合与 Huntington舞蹈病[J].中国临床神经科学,2006,14(1):106-112.

[4]Spires T L,Hannan A J.Molecular mechanisms mediating pathological plasticity in Huntington’s disease and Alzheimer's disease[J].J Neurochem,2007,100(4):874-82.

[5]Huntington’s Disease Collaborative Research Group.A novel gene containing a trinucleotide repeat that is expanded and unstable on Huntington’s disease chromosomes[J].Cell,1993,72(4):971-983.

[6]Ross C A,Margolis R L.Huntington’s disease[J].Clin Neurosci Res,2001(1):142-152.

[7]刘娜,杨志杰,樊东升,等.Huntington舞蹈病一家系六例报告[J].中国神经免疫学和神经病学杂志,2011,18(2):145-145.

[8]赵育海,丛琳,潘钰,等.辽宁地区Huntington舞蹈病两家系IT15基因的分子分析[J].中国医科大学学报,2003,32(4):355-357.

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