胡桃楸叶乙醇提取物的抗氧化活性

李 岩 李 娟 李 静 柳旺艳 (北华大学公共卫生学院，吉林 吉林 303)

胡桃楸(julans mandshurica maxim)为落叶乔木，主要分布于我国黑龙江省东部小兴安岭等山区，为我国珍贵树种之一。其不仅木材优良，而且具有多种药用价值。《开宝本草》最早记载胡桃楸有补肾固精、敛肺定喘、抑菌镇咳及抗癌之功效〔1〕。胡桃楸叶内含有胡桃醌、胡桃甙、柠檬烯、没食子酸及油酸等多种生物化学成分，胡桃楸叶提取物的杀虫活性和抗油脂氧化作用已有报道〔2〕，但其抗电离辐射所致的氧化损伤尚未见报道。本文旨在研究胡桃揪叶乙醇提取物(AELJ)的抗氧化活性。

1 材料与方法

1.1 药物制备 新鲜胡桃楸叶于2011年秋采自吉林省敦化市雁鸣湖自然保护区，自然阴干后粉碎，水提醇沉后经大孔树脂吸附，依次用水及60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压蒸出溶剂得棕褐色黏稠物即为AELJ。

1.2 主要仪器、试剂 RE-52AA型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂;721型紫外分光光度计(上海分析仪器三厂);超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所。

1.3 实验动物 健康雄性昆明种小鼠(6～8周龄，体重18～22 g)，由吉林大学实验动物中心提供。

1.4 动物分组及处理 将60只实验小鼠随机分为6组：正常对照组(NC)，照射对照组(蒸馏水，IC)，AELJ两个剂量组(300、600 mg/kg)，照射给药组和单纯给药组，每组10只。每天灌胃给药1次，连续5 d，于第6天给予照射对照组和AELJ高、低剂量照射组小鼠以X射线进行一次全身均匀照射，照射剂量率0.287 Gy/min，总剂量2.0 Gy。照射后继续给药5 d，于末次给药24 h后处死小鼠测定各项指标。

1.5 实验方法

1.5.1 小鼠1%肝组织匀浆的制备 取小鼠肝脏，称取重量后按比例(1∶5)放入冷生理盐水中，在冰浴条件制备各组小鼠1%肝组织匀浆，冷藏待用。

1.5.2 肝组织匀浆中总蛋白含量的测定 取各组小鼠1%肝组织匀浆 10 μl加入 2 490 μl生理盐水中，再向管中加入1.5 ml考马斯亮蓝。用1 ml生理盐水与3 ml考马斯亮蓝的混合液调零，在575 nm下，722型分光光度计进行测定并记录(A)值。按下式计算蛋白含量。蛋白含量(g/L)=(测定管吸光度值－空白管吸光度值)/(标准管吸光度值－空白管吸光度值)=标准管浓度。

1.5.3 肝组织MDA的测定(TBA法〔3〕)取各组小鼠1%肝组织匀浆上清800 μl，取同样体积的标准应用液，向上述两管中加入20% 三氯醋酸(TCA)2.5 ml混匀。再向其中分别加入1% 硫代巴比妥酸(TBA)1.0 ml，混匀，沸水浴30 min，流水冷却至室温，2 000 r/min离心5 min。吸取上清液，以722型分光光度计于532 nm波长处测定各样本的吸光度(A)值。

1.5.4 肝组织SOD活性测定 取各组小鼠1%肝组织匀浆作为样品，严格按照试剂盒说明书方法测定SOD活力。采用722型分光光度计，1 cm光程，于550 nm波长下测定各样本的吸光度(A)值。通过以下公式，可计算出样品中的SOD活力。

1.6 统计学方法 应用SPSS12.0统计软件，多组资料检验采用方差分析，组间差异显著性检验采用t检验。

2 结果

照射对照组的SOD活力和MDA含量明显下降，并且与正常照射组相比，差异均有统计学意义(均P＜0.05)，说明X线照射后小鼠受到了急性氧化损伤。AEBJ高、低剂量单纯给药组的SOD活力和MDA含量与假照射对照组相比，差异均没有统计学意义(P＞0.05)，说明AEBJ对正常小鼠可能没有副作用或副作用很小。AEBJ高、低剂量照射给药组的SOD活力均高于照射对照组(P＜0.05);同时，AEBJ高、低两个剂量组间差异并不具有统计学意义(P＞0.05)，说明AEBJ对SOD活力的下降有一定拮抗作用。AEBJ高、低剂量照射给药组的MDA含量均低于照射对照组，并且差异具有统计学意义(P＜0.05);同时，AEBJ高、低两个剂量组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。说明AEBJ对MDA含量的增加有明显抑制作用，并且抑制效果随浓度增加而增强。见表1。

表1 AEBJ对小鼠肝组织匀浆SOD活力、MDA含量影响(s)

表1 AEBJ对小鼠肝组织匀浆SOD活力、MDA含量影响(s)

与照射对照组比较：1)P＜0.05

组别 n SOD(U/mg prot)MDA(nmol/mg prot)正常对照组 10 277.93±37.651) 0.020±0.0041)照射对照组 10 201.65±61.39 0.058±0.038低AEBJ组 10 251.65±28.461) 0.037±0.0351)高AEBJ组 10 257.70±34.091) 0.021±0.0041)低AEBJ对照组 10 259.74±63.361) 0.021±0.0071)高AEBJ对照组 10 266.31±77.431) 0.023±0.0041)

3 讨论

自由基学说是目前比较公认的衰老学说。已有充分证据表明，衰老时机体内抗氧化物质的活性及含量均显著降低 ，而自由基代谢终产物MDA的含量却显著升高;电离辐射可引起自由基大量生成，引起机体抗氧化体系失去平衡，进而造成DNA碱基环结构、糖磷酸键和氢键断裂等损伤;自由基也可攻击生物膜磷脂中的多不饱和脂肪酸而引起脂质过氧化〔4〕。SOD为重要的抗氧化酶之一，可有效清除自由基反应的启动因子，抑制和阻断自由基反应，降低MDA的生成〔5〕。

SOD活力降低、MDA含量增加说明电离辐射可以引起抗氧化酶活性降低;同时可以使机体产生大量自由基，导致小鼠氧化还原系统的损伤，引起机体脂质过氧化，AEBJ具有抗电离辐射所致的机体氧化损伤作用，可显著降低肝匀浆MDA的生成;其抑制作用随浓度增加而增强。AEBJ也可以提高肝组织匀浆SOD活力，对维持机体抗氧化系统的平衡有重要意义。

本实验初步证实了胡桃楸叶的抗氧化能力，对于促进胡桃楸叶资源的利用有一定的参考价值。

1 刘晓峰，王 东，郭建华，等.胡桃楸药用价值研究〔J〕.中国医药研究，2005;3(1)：48-50.

2 翟梅枝，林晓明，林奇英，等.核桃叶抑菌成分的提取及其抑菌活性〔J〕. 西北林学院学报，2003;18(4)：89-91.

3 罗晓芳，傅宝华，秦文华，等.急性辐射损伤与血清中微量元素的关系研究〔J〕.卫生研究，2003;5(32)：482-3.

4 毛光明，陈 江，夏 勇，等.蔓延莓对衰老小鼠和辐照小鼠抗氧化功能的影响〔J〕.浙江预防医学，2007;19(5)：10-2.

5 刘俊达.衰老的指标及检测意义〔J〕.老年学杂志，1992;12(6)：377.