人附睾蛋白4（HE4）在泌尿系统移行细胞癌中的表达

时春雷，朱 强，韩莎莎，张海峰

（吉林大学白求恩第一医院，吉林 长春130021）

移行细胞癌是肾盂、输尿管及膀胱移行上皮的恶性肿瘤，主要发生在膀胱，是男性和女性较为常见的泌尿系统肿瘤，临床上移行细胞癌可以分为：浅表性／非浸润性膀胱癌和浸润性膀胱癌，对于前者治疗的目的是减少复发，防止肿瘤进展。而后者需要决定保留膀胱是否会影响生存率。移行细胞癌因为缺乏有效的早期预测指标，仍然是威胁我们健康的重要因素。因此我们迫切需要一个敏感性高、特异性强的检测指标，人附睾蛋白4（HE4）作为一种潜在的肿瘤标志物值得我们关注。

目前关于HE4与泌尿系统移行细胞癌相关性的研究极少。本项研究目的在于将HE4作为移行细胞癌的一种潜在的肿瘤标志物，讨论HE4的水平与泌尿系统移行细胞癌的关系。

1 材料和方法

1.1 一般资料

本研究观察的是2010年9月至11月我院收治的45名入院行手术治疗的移行细胞癌患者，入院前患者均未接受放化疗及免疫治疗，该研究中，还包括20例良性泌尿生殖系统疾病的患者和10名健康对照者。恶性肿瘤组中，男性31例，女性14例，平均年龄63.4岁（34－88岁）。肿瘤组中肌层浸润性移行细胞癌19例，非浸润性的26例；肿瘤位于肾盂的3例，输尿管的6例，膀胱的36例；肿瘤单发28例，多发17例。

1.2 分组与试验方法

本研究将所观察患者分为三组：移行细胞癌组，泌尿系统良性疾病组，健康对照组。所有观察者均排除其他系统或组织的恶性肿瘤疾病。所有病例的最终诊断均以病理学诊断为准。标本获取后，在1kg离心力下离心10分钟，血清采集后在－80℃储存，直到测试。试剂盒购自瑞典Fujirebio Diagnostis公司，在20℃－25℃环境下，采用酶联免疫法检测受试者血清中的HE4水平。

1.3 统计学方法

三组之间采用单因素方差分析的方法进行了比较。HE4水平组间的比较，采用独立样本t检验的比较方法。术前和术后的HE4水平比较，采用配对样本t检验的比较方法。HE4临界值、敏感度及特异度的测定采用的绘制ROC曲线的方法，以P＝0.05为标准值。统计分析采用SPSS软件。

2 结果

三组之间年龄和性别差异，没有统计学意义（P＞0.05）。HE4水平在移行细胞癌的平均水平为280.88pmol／L，显著高于良性泌尿系统疾病78.14 pmol／L（P＜0.05）和健康对照组79.82pmol／L（P＜0.05）（如表1、表2）。良性泌尿系统疾病78.14 pmol／L和健康对照者79.82pmol／L之间无显着差异（P＞0.05）。对于膀胱恶性肿瘤的患者手术后，HE4平均水平为176.43pmol／L低于术前的280.88pmol／L，差 异 显 著 有 统 计 学 意 义 （P＜0.05）。非肌层浸润型 HE4平均水平为290.08 pmol／L，显著高于良性泌尿系统疾病（P＜0.05）和健康对照组（P＜0.05）。

以74.1pmol／L为判断标准，一般情况中，如年龄、性别间差异不显著，在不同的临床病理特征方面，肿瘤位置、数量、级别、分期之间差异不显著。

运用SPSS软件绘制出ROC曲线，通过ROC分析发现HE4水平在本研究人群中的最佳诊断分界点为 74.1pmol／L。在 HE4 水平大于 74.1 pmol／L时HE4用于诊断的敏感性为80.0%和特异性为75.0%。

表1 泌尿系统良性与移行细胞癌HE4水平比较

表2 移行细胞癌与健康组HE4水平比较

3 讨论

人附睾蛋白4又称HE4，其基因的cDNA最早由Kiehhoff等［1］从附睾的上皮远端分离，编码主要由WAP类型的4个二硫键核心组成的蛋白质，与细胞外蛋白酶抑制剂存在很高同源性［2］。鉴于与HE4同源的、可比较的已知转录介质 WFDC的蛋白质家族是白细胞中的蛋白酶抑制剂，推断HE4在自然免疫中也可能有一定作用。在WAP结构域中有一个抑制性的环结构，此环结构通过插入到蛋白酶活性结构区以抑制蛋白酶功能，HE4含有类似的结构域，但是仍然需要进一步研究来探索其是否存在蛋白酶抑制功能。在恶性肿瘤之中，HE4在卵巢癌基因高表达［3］，并有研究发现单独作为肿瘤标志物，HE4诊断卵巢癌的敏感度达72.9%，特异度达95%，使其有机会在肿瘤诊断中得到应用。目前HE4在移行细胞癌、良性疾病及健康人群的表达尚未被研究。HE4主要分布于卵巢组织，并在肺脏、上呼吸道、结肠黏膜、乳腺上皮及泌尿系统中有所分布，因其在泌尿系统中肾脏远曲小管上皮中度表达，使得通过从血清中检测HE4含量来监测移行细胞癌成为一种可能。

我们的研究证明，移行细胞癌患者术前的HE4水平明显高于术后，两者相比较差异有统计学意义，为排除手术前血清HE4水平存在的干扰，术后的血清标本我们一般在术后第三天获取。HE4基因在具有高度自主繁殖细胞中表达增加，进而HE4水平增加，而在肿瘤切除后HE4合成减少，还需要一个长期的前瞻性研究来检测再次复发及多次复发病人血清肿瘤标志物的表达。

另外我们还发现HE4肿瘤标志物在移行细胞癌各个分期中的表达均增高，非肌层浸润性肿瘤与泌尿系统良性疾病组和健康对照组差异显著（P＜0.05），但是非肌层浸润性移行细胞癌的HE4水平略高于肌层浸润病例，但两相比较无显著差异，因此我们可以得出结论：HE4有可能成为泌尿系统移行细胞癌的早期检测的筛选方法。

在健康人群中存在HE4的表达，这与胡晓舟［4］等的研究一致，他们通过大样本统计发现健康中国女性的HE4水平在小于40岁者为59.6pmol／L，大于40岁者为67.6pmol／L，这与本次试验所用试剂说明书中标准值并不一致，可能是不同地区之间差异导致，我们的实验中发现，排除其他干扰HE4分泌的因素，男性与女性之间HE4水平不存在差异，各年龄之间也不存在显著差异。

关于HE4与肿瘤特征的相关性，卢仁泉等［5］研究了28例女性卵巢癌患者后，发现HE4水平与肿瘤的发展存在正相关性，有助于肿瘤分级及预后，而我们研究结果与之有所差异，我们未发现肿瘤数目、位置等肿瘤学特征与HE4存在相关性，可能是研究样本数偏小导致。

我们发现，血清HE4在ROC线之下的面积为0.819［95%CI：0.707－0.932］（如表3）。因此，HE4作为泌尿系统移行上皮癌的肿瘤标志物是有一定准确性的。通过ROC分析我们还发现HE4水平在本研究人群中的最佳诊断临界点为74.1pmol／L，当HE4水平高于74.1pmol／L时诊断移行细胞癌时的敏感性是80.0%和特异性是75.0%。所有这些结果证明，血清HE4是一个较好的的诊断性肿瘤标志物。

表3 HE4水平的ROC分析

但是在这项研究中，总体样本量相对较小，其中移行细胞癌组45例，良性的泌尿生殖系统疾病20例，健康对照组的病人10例。ROC曲线所得的临界值、敏感度及特异度具有数量依赖性，因此不同的病例数可能存在不同的研究结果，我们在这项研究中使用的HE4的标准值，也需要更大的后续研究来进一步证实。因此，我们仍需要更大样本的研究来证实我们的一系列结果，包括早期移行细胞癌、良性疾病和高风险者等。

此外，HE4是一个小的分泌糖蛋白［5］，因此，HE4存在由肾脏过滤到尿液中的可能，我们未能排除HE4也可能是一个潜在的可进行膀胱癌尿液测试的目标，并且也可以将HE4的检测结合膀胱肿瘤抗原、核基质蛋白、存活素等肿瘤标志物以及病理免疫组化研究中Ki－67、P53等相互结合，增加其在肿瘤的早期诊断，预后指导等方面的应用。

［1］Kirchhoff C，Habben I，Ivell R，et al.A major human epididymisspecific cDNA encodes a protein with sequence homology to extracellular proteinase inhibitors［J］.Biol Reprod，1991，45：350.

［2］Moore RG，Brown AK，Miller MC，et al.Utility of a novel serum tumor biomarker HE4in patients with endometrioid adenocarcinoma of the uterus［J］.Gynecol Oncol，2008，110：196.

［3］Gilks CB，Vanderhyden BC，Zhu S，et al.Distinction between serous tumors of low malignant potential and serous carcinomas based on global mRNA expression profiling［J］.Gynecol Oncol，2005，96：684.

［4］胡晓舟，崔丽艳，张 捷，等.健康人群血清HE4水平参考区间的初步探讨［J］.中华检验医学杂志，2009，32（12）：1376.

［5］卢仁泉，郭 林，沈烨红，等.HE4在卵巢癌诊治中的临床应用评价［J］.中国癌症杂志，2010，20（9）：380.