上皮钙黏蛋白及C－erbB－2在非小细胞肺癌中的表达及意义

王凤玲，隋小芳，杨永清，陈尚君＊

（1.佳木斯大学附属第一医院 老年病科，黑龙江 佳木斯154002；2.惠东县人民医院 呼吸内科，广东 惠州516300）

大量研究表明，上皮钙黏蛋白E－cadherin（E－cad）、β－catenin（β－cat）等黏附分子以及癌基因cerbB－2在肺癌的浸润转移过程中起着重要作用［1，2］。E－cad与β－cat等蛋白形成 E－cad／cat复合体，共同维持组织细胞的黏附平衡，而肿瘤病人细胞中E－cad与β－cat表达出现异常减少，而癌基因cerbB－2在肿瘤细胞中过表达，从而破坏 E－cad／cat复合体，造成肿瘤细胞的浸润转移。本实验采用SP法检测41例手术切除的非小细胞肺癌（NSCLC）标本中E－cad、β－cat及 C－erbB－2的表达情况，来探讨上述三者与NSCLC临床分期、病理分级及淋巴结转移的相关性。

1 材料与方法

1.1 病例选择 收集2009年1月～2010年12月佳木斯大学附属第一医院病理科保存的NSCLC标本41例，均经福尔马林固定、石蜡包埋处理。其中男30例，女11例。按组织类型分鳞状细胞癌25例，腺癌16例；病理分级中Ⅰ＋Ⅱ级26例，Ⅲ级15例。有淋巴结转移22例，无转移19例；PTNM的临床分期中Ⅰ＋Ⅱ期22例，Ⅲ＋Ⅳ期19例。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂及检测方法 鼠抗人E－Cadherin单克隆抗体、鼠抗人β－catenin单克隆抗体、鼠抗人C－erbB－2单克隆抗体、S－P免疫组化广谱试剂盒（通用）、DAB显色剂等，均来自福州迈新生物技术有限公司。应用SP方法分别检测E－cad、β－cat及C－erbB－2在NSCLC中的表达情况。试验步骤严格按照S－P试剂盒说明书进行，用已知的E－cad、β－cat及C－erbB－2的阳性切片（福州迈新生物技术有限公司提供）作为阳性对照，用PBS作为一抗做阴性对照。

图2 β－cat在肺鳞癌中的表达（×200）

图1 E－cad在肺鳞癌中的表达（×200）

1.2.2 结果判断 E－cad及β－cat染色结果根据熊家安［3］等人的评判标准，正常细胞中的E－cad及β－cat主要定位于细胞膜，免疫组化染色示连续性分布的棕黄色颗粒状为阳性细胞，细胞膜不着色或单纯胞浆着色为阴性，切片中染色癌细胞≤25%为（＋），26%～75%为（＋＋），≥76%为（＋＋＋）。其中（＋＋～＋＋＋）为高表达，（－～＋）为低表达或异常表达。

C－erbB－2染色结果根据刘萍［4］等人的评判标准，C－erbB－2染色在细胞浆和（或）胞膜中呈棕黄色颗粒为阳性细胞，显微镜下，切片中阳性细胞数＜5%为（－），5%～24%为（＋），25%～49%为（＋＋），≥50%为（＋＋＋），每张切片计数200个细胞。其中（－～＋）为低表达，而（＋＋～＋＋＋）为高表达。

1.3 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。采用χ2检验对计数资料作比较分析，相关分析采用Spearman相关分析。

2 结果

2.1 E－cad、β－cat及 C－erbB－2的表达与 NSCLC 的临床病理特征

在 正 常 对 照 组 E－cad、β－cat 均 为 高 表 达（100%）。在41例NSCLC免疫组化染色结果中E－cad及β－cat低表达率分别占60.98%（高表达39.02%）及53.66%（高表达46.34%）；两指标分别在两组间对比χ2＝6.83和χ2＝7.92，P均＜0.05。

在正常对照组中C－erbB－2均无表达，在41例NSCLC中C－erbB－2有23例出现高表达，高表达率为56.10%，两组差异显著χ2＝7.84，P＜0.05。

E－cad及β－cat在NSCLC的不同病理分级间、不同临床分期间、有无淋巴结转移间的高表达率见表1及图1－3。

2.2 E－cad、β－cat及C－erbB－2三者之间的相互关系

在41例NSCLC中三者之间的相互关系见表2、表3。经Spearman相关分析表明 E－cad、β－cat与C－erbB－2之间呈负相关（P＜0.01和P＜0.05），E－cad与β－cat之间呈正相关（P＜0.05）。

表1 41例NSCLC患者E－cad和β－cat及C－erbB－2表达与临床病理特征的关系

表2 C－erbB－2与 E－cad、β－cat相关性分析

表3 E－cad与β－cat相关性分析

3 讨论

有研究显示，在肺癌中E－cad及β－cat的表达明显降低，其低表达与肿瘤的临床分期及淋巴结转移情况相关联［5，6］。我们的研究发现，E－cad及β－cat的表达与NSCLC的病理分级，临床分期及淋巴结转移有关，而与肿瘤的组织分型不相关，两者的表达呈正相关关系。在41例的NSCLC中，E－cad及β－cat低表达或异常表达率高达61.0%及53.7%，在低分化及Ⅲ～Ⅳ期肺癌中表达更为明显下调，在有无淋巴结转移中两者的表达水平也存在显著的差异性，两者在肿瘤中的异常表达，破坏了E－cad／cat结构的完整性，黏附功能丧失而最终导致肿瘤细胞的浸润转移。

C－erbB－2（Her－2，Neu）是 表 皮 生 长 因 子 受 体（EGFR）家族的重要成员之一。在正常组织细胞中C－erbB－2蛋白基本不表达，而在肿瘤细胞中C－erbB－2蛋白成高表达，但是在不同类型的癌症中C－erbB－2蛋白的高表达与肿瘤的分级及临床分期相关性研究结果并不一致［7］。在本实验中，C－erbB－2有23例出现高表达，且其表达水平与肿瘤的淋巴结转移情况有显著相关性，与肿瘤的组织分型及临床病理特征无明显相关。另外，本实验还发现C－erbB－2高表达且与E－cad及β－cat的表达呈负相关。C－erbB－2的高表达参与多种肿瘤细胞信号的传导，使细胞有丝分裂相关的蛋白或酶的活性持续增加，细胞增殖周期缩短，细胞过度增殖，恶性表现增强以及抗凋亡能力增强，同时，它还促使E－cad基因的表达下调，改变E－cad的黏附特性。另一方面高表达的C－erbB－2还影响E－cad／cat复合体的稳定性而致其解聚，最终造成肿瘤细胞的脱落转移，浸润能力进一步增强。

本研究表明，E－cad、β－cat及 C－erbB－2与非小细胞肺癌的发生发展中是密切相关的，并在此过程中起到重要的调控作用。因此联合检测上述三者的表达，对判断病情和预后有一定价值。

［1］易明福 魏晓梅.C－erbB－2在非小细胞肺癌中表达的研究［J］.临床肺癌杂志，2008，13（4）：409.

［2］仇丽红，赵梅香，黄 洁，等.c－erbB－2基因生物学特性研究进展［J］.现代肿瘤医学，2007：15（1）：102.

［3］Frederick LA，Matthews JA，Jamieson L.Matrix metalloproteinase－10is a critical effector of protein kinase Ciota－Par6alpha－mediated lung cancer［J］.Oncogene，2008，27（35）：1038.

［4］刘 萍，田薇薇，梁 冰.非小细胞肺癌组织中C－erbB－2蛋白的表达［J］.郑州大学学报（医学版），2006，41（5）：917.

［5］赵焕芬，何春年.小细胞肺癌与c－kit基因及其研究进展［J］.现代肿瘤医学，2008，16（9）：1632.

［6］王 扬，吴一龙.早期非小细胞肺癌预后基因标志研究现状和思考［J］.肿瘤研究与临床.2010，（9）：577.

［7］闫 明，王淑玲，陈小兵，等.肺癌中 C－erbB－2及基质金属蛋白酶－10的表达［J］.广东医学，2010，（31）22：15.