中药复方制剂中黄芩苷含量的HPLC检测法的建立

赵晓丽 薛毅博

河南省驻马店市食品药品检验所，河南驻马店 463000

中药复方制剂中黄芩苷含量的HPLC检测法的建立

赵晓丽 薛毅博

河南省驻马店市食品药品检验所，河南驻马店 463000

目的 建立中药复方制剂中黄芩苷含量的HPLC检测法。 方法 采用高效液相色谱法检测以清开灵颗粒为代表的中药复方制剂中黄芩苷的含量，流动相为0.5%磷酸水溶液-甲醇（58︰42），检测波长280 nm，流速为1.0 mL/min，采用外标峰面积法计算清开灵颗粒中黄芩苷的含量。 结果 黄芩苷与有关物质完全分离，在0.101 9～1.019 μg范围内峰面积与浓度呈现良好的线性关系（R2=0.999 9，n=5），平均回收率为99.44%（RSD=0.86%，n=5）。 结论 本实验方法简单、迅速、专一性强，适用于中药复方制剂中黄芩苷的含量检测。

高效液相色谱法；中药复方制剂；黄芩苷；含量检测

中药复方制剂中成分复杂，干扰因素较多，检测黄芩苷难度大。中药复方制剂清开灵颗粒，本身成分复杂，由胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、黄芩苷、金银花等药加工制成颗粒，具有中药复方制剂的典型特点，且颗粒中辅料较多，清开灵颗粒主要通过检测黄芩苷的含量作为质量控制的的标准，国家规定要求每颗颗粒中黄芩苷的含量＞5 mg。本研究以清开灵颗粒为中药复方制剂为代表，建立高效液相检测中药复方制剂中黄芩苷的含量的研究方法。建立起的中药复方制剂中黄芩苷含量的HPLC检测方法具有一般性，对于其他中药复方制剂的的黄芩苷含量的HPLC检测方法也具有较重要的参考价值，现报道如下。

1 仪器与药品

Agilent1260型高效液相色谱仪；黄芩苷对照品（批号：0715-9915，为含量测定用，中国药品生物制品检定所）。甲醇为天地色谱纯级别，其余试剂均为国产分析纯。

2 色谱条件[1]

色谱柱：大连伊力特C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.5%磷酸水溶液-甲醇（58︰42）；流速1.0 mL/min；紫外检测波长280 nm，进样量10 μL，柱温：30.0℃。

3 方法与结果

3.1 对照品溶液制备[2]

精密称取黄芩苷对照品（在五氧化二磷减压干燥器重干燥12 h的黄芩苷[3]）适量，加50%甲醇溶液制备成50 μg/mL溶液，即可。

3.2 供试品溶液制备

精密称取本品0.5 g，小心加到50 mL量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度线，混合均匀，取滤液即可。

3.3 阴性对照品制备

按清开灵颗粒制备工艺，取不含黄芩的处方的其他各药，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品。

3.4 线性关系考察[4]

精密称取黄芩苷对照品（在五氧化二磷减压干燥器重干燥24 h的黄芩苷）10.19 mg置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度线，混合摇匀，为对照品贮备液，然后再分别吸取对照品贮备液 1、2、3、5、10 mL 置于 20 mL 的量瓶中，加 50%甲醇溶液稀释至刻度，混合均匀。然后用进样针分别吸取上述各对照品溶液各10 μL进样测定，记录峰面积。以10 μL中黄芩苷进样量（μg）为横坐标，各浓度的色谱峰面积（A）均值为纵坐标，计算回归方程。见表1。研究结果表明在0.101 9～1.019 μg范围内线性关系良好，回归方程为：A=2 905.842C+12.324，相关系数R2=0.999 9。

表6 回收率测定

表1 线性关系考察（n=5）

3.5 稳定性试验

精密量取本品0.5 g按供试品溶液的制备，分为日间稳定性检测和日内稳定性检测，日内稳定性检测在0、6、12、18、24 h时间点取供试品溶液10 μL注入高效液相中检测，检测的结果见表2。日间稳定性检测，将分装供试品保存于-20 ℃冰箱中，每天取1次供试品10 μL，连续4 d注入高效液相中检测，检测结果见表2、3。

表2 日内稳定性试验结果

表3 日间稳定性试验结果

3.6 精密度试验

用进样针精密吸取50.95 mg/L 10 μL黄芩苷对照品溶液注入液相色谱仪中，重复进样6次，记录各峰的峰面积面积，结果见表4。

表4 精密度检测

3.7 重复性试验

精密量取本品0.5 g，按“供试品溶液的制备”的方法制备5份平行的供试品溶液，分别测定各份中黄芩苷的含量，结果见表5。

表5 重复性检验

3.8 加样回收试验

精密称取黄芩苷对照品（在五氧化二磷干燥24 h）13.00 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度线，混合均匀得对照品溶液。本研究采用加样回收测定法，精密量取已测知含量（5.21 mg/g）的本品0.25 g，置50 mL量瓶中，再精密加入上述对照品溶液1 mL，用50%甲醇溶液稀释至刻度，混合均匀，得供试品溶液，然后平行分为5份，进样10 μL依照本研究方法测定，结果见表6。

3.9 含量测定

精密量取本品0.5 g，按“供试品溶液的制备”项方法制备3批供试品溶液，进行测定，结果见表7。

表7 样品中黄芩苷含量的测定

4 讨论

本检验方法在确定好各项条件后，经过多次实验，能够完全将待测组分分离，较好的检测了清开灵颗粒中黄芩苷的含量，对于药品的质量控制有着一定的意义。该研究中流动相是实验成功的关键，磷酸水溶液和甲醇的比例对于研究的成功起到了关键作用，其中磷酸的含量对于研究中黄芩苷的出峰时间也有较大的影响。通过实验前研究发现，当甲醇含量过高时，复方制剂中的各峰分离度不好，R＜1.5，各峰在较短时间内出现，各峰拥挤在一起，出峰时间都较短，不利于实验的分析，对结果影响较大。当甲醇含量偏低时，复方制剂中的各峰分离度都较好，基本都能达到完全分离，R＞1.5，但是中药制剂中成分较多，各峰完全出峰时间较长，分析时间较长，不利于实验的进行，而且也增加了研究的耗材，提高了研究的成本。流动相的pH值对于该研究的影响也较大，流动相的pH过大或者过小是都不利于研究的进行。综合考虑各项因素，笔者采用的流动相比例为0.5%磷酸水溶液-甲醇（58︰42），流速 1.0 mL/min，检测波长 280 nm，进样量 10 μL，柱温：30.0℃。

该研究中，标准品的定量对于研究结果的影响较大，笔者采用第10版药典要求，将黄芩苷对照品在五氧化二磷干燥12 h后再准确称量，这样可以有效避免水分对于该研究的影响。

[1] 钱江.HPLC法测定银黄口服液中绿原酸和黄芩苷的含量[J].中成药，2003，25（2）：117-119.

[2] 林启寿.中草药有效成分化学[M].北京：人民卫生出版社，2001：279-281.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010版）[S].北京：化学工业出版社，2010：1321-1324.

[4] 赵陆华.高效液相色谱法分析中成药成分手册[M].北京：中国医药科技出版社，2010：129-130.

Establishment of HPLC detection method for the Baicalin content in Chinese herbal compound

ZHAO Xiaoli XUE Yibo
Zhumadian Institue for Food and Drug Control of Henan Province, Zhumadian 463000,China

ObjectiveTo establish the detection method for the Baicalin content in Chinese herbal compound.MethodsThe baicalin in Chinese herbal compound which presented by Qingkailing granules was detected via HPLC method in this study.The mobile phases was 0.5% phosphoric acid aqueous solution-methanol(58:42), measurement wavelength was 280 nm and flow rate was 1.0 mL/min. The Baicalin content in Qingkailing granules was calculated by external standard peak area method.ResultsThe Baicalin was separated from related substances, peak area has a good linear relation with concentration in the range of 0.101 9 to 1.019 μg(R2=0.999 9,n=5).The average recovery rate was 99.44%(RSD=0.86%,n=5).ConclusionThis method is a breif, rapid, specific characteristic method. And it's appropriate for the Baicalin detection of Chinese herbal compound.

HPLC method; Chinese herbal compound; Baicalin; Content detection

R286

B

2095-0616（2012）17-105-02

2012-06-12）