吕占国 路 更 王立强
1.解放军第二○二医院医务处,辽宁 沈阳 110016;2.解放军第二一一医院肾内科,黑龙江 哈尔滨 150080;3.华侨大学分子药物学研究所,福建 泉州 362021
肾茶Clerodendranthus spicatus (Thunb.) C.Y.Wu 为唇形科肾茶属植物。本品为肾茶的干燥茎叶,主要含有黄酮类化合物、甾体皂甙类、蒽醌类甙类、氨基酸、多肽、蛋白质、有机酸、糖类、多糖类、多酚类化合物等[1-2]。笔者所在单位2008年研制了肾茶胶囊,并对其质量进行了系统研究。
天平:北京赛多利斯仪器系统有限公司,型号BP211D;高效液相色谱仪:日本岛津,型号2010;紫外-可见分光光度仪:日本岛津,型号uv-2100。
肾茶胶囊:中试样品批号:090816、090817、090818,规格:0.3 g/粒,笔者所在单位单位自制。标准品:芦丁(购自中国药品生物制品检定所,批号:10080-200705)。
总黄酮的含量测定:原标准以薄层扫描方法测定熊果酸的含量,本研究提取的熊果酸含量很低,故采用HPLC法测定主要成分迷迭香酸的含量,同时肾茶药材中含有较多的黄酮,故在质量标准中增加了总黄酮的含量测定项,采用紫外分光光度法测定样品所含总黄酮的含量,取得满意效果,方法灵敏、可靠[3-4]。
2.1.1 对照品溶液的制备 称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品约50 mg,精密称定后,置于25 mL量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密量取10 mL,置于100 mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(每1毫升中含无水芦丁0.2 mg)。
2.1.2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL,分别置于 25 mL 量瓶中,各加水至 6 mL,加 5%亚硝酸钠溶液1 mL,摇匀,放置6 min,加10%硝酸铝溶液1 mL,摇匀,放置6 min,加氢氧化钠试液10 mL,再加水至刻度,摇匀,放置15 min,以相应的溶液为空白对照,采用分光光度法,在500 nm的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标,绘制标准曲线。
2.1.3 测定法 取装量差异项下的本品内容物适量,研细,从中称取约0.25 g,精密称定后,置25 mL锥形瓶中,精密称定,加甲醇25 mL超声处理(功率250 W,频率20 kHz)30 min,放冷,精密称定,补足重量,摇匀。精密量取10 mL,置100 mL量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取3 mL,置25 mL量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6 mL”起依法测定吸收度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度(μg/mL),计算,即得。
本品每粒含总黄酮以芦丁(C27H30O16)计,不得少于45.0 mg。
表4 加样回收率试验结果(n=6)
精密吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液各3 mL,分别置于25 mL量瓶中,照分光光度法,在200~750 nm波长范围内测定吸收光谱。结果芦丁对照品与供试品光谱可见光区吸收图谱基本一致,并且在500 nm波长处有最大吸收。
精密吸取芦丁对照品溶液 1、2、3、4、5、6 mL(相当于芦丁 8.03、16.06、24.09、32.12、40.15、48.18 μg/mL),按 上 述 测定法测定吸收度。以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算得回归方程。回归方程为:y=0.0111x+0.0181,r2=0.9995。表明芦丁在8.03~48.18 μg/mL范围内具有良好的线性关系。见表1、图1。
图1 芦丁不同浓度吸收度
图1 芦丁线性回归方程坐标图
按2.3项下测定法对对照品溶液重复测定6次,计算RSD,结果见表2。试验结果表明,RSD<2%,方法精密度良好,符合测定要求。
表2 精密度试验结果(n=6)
按供试品测定方法测定,对同一批样品(090816)重复测定5次,结果见表3。
表3 重复性试验结果(n=5)
精密称取已知含量的同一批号(批号为090816),含量250.51 mg/g)的样品125 mg,分别精密加入芦丁对照品各27.5 mg,按正文供试品溶液的制备方法制备及上述光谱条件测定,测定并计算回收率,平均回收率在97.0%~103.0%之间,RSD<2%(n=6),方法准确性良好。见表4。
按上述方法测定各批样品的含量,结果见表5。
表5 含量测定结果(n=6)
根据3样品测定结果,暂定本品含总黄酮不得少于45.0 mg/粒。
通过针对肾茶胶囊中总黄酮的系统研究,包括线性关系考察、精密度考察、回收率考察、重复性考察等,证实本测定方法科学可行,完全能控制和检测肾茶胶囊中总黄酮的质量。
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