肾茶胶囊中总黄酮的含量测定

吕占国 路 更 王立强

1.解放军第二○二医院医务处，辽宁 沈阳 110016；2.解放军第二一一医院肾内科，黑龙江 哈尔滨 150080；3.华侨大学分子药物学研究所，福建 泉州 362021

肾茶Clerodendranthus spicatus （Thunb.） C.Y.Wu 为唇形科肾茶属植物。本品为肾茶的干燥茎叶，主要含有黄酮类化合物、甾体皂甙类、蒽醌类甙类、氨基酸、多肽、蛋白质、有机酸、糖类、多糖类、多酚类化合物等[1-2]。笔者所在单位2008年研制了肾茶胶囊，并对其质量进行了系统研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器

天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司，型号BP211D；高效液相色谱仪：日本岛津，型号2010；紫外-可见分光光度仪：日本岛津，型号uv-2100。

1.2 材料

肾茶胶囊：中试样品批号：090816、090817、090818，规格：0.3 g/粒，笔者所在单位单位自制。标准品：芦丁（购自中国药品生物制品检定所，批号：10080-200705）。

2 方法

总黄酮的含量测定：原标准以薄层扫描方法测定熊果酸的含量，本研究提取的熊果酸含量很低，故采用HPLC法测定主要成分迷迭香酸的含量，同时肾茶药材中含有较多的黄酮，故在质量标准中增加了总黄酮的含量测定项，采用紫外分光光度法测定样品所含总黄酮的含量，取得满意效果，方法灵敏、可靠[3-4]。

2.1 测定方法

2.1.1 对照品溶液的制备 称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品约50 mg，精密称定后，置于25 mL量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10 mL，置于100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1毫升中含无水芦丁0.2 mg）。

2.1.2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置于 25 mL 量瓶中，各加水至 6 mL，加 5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的溶液为空白对照，采用分光光度法，在500 nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.1.3 测定法 取装量差异项下的本品内容物适量，研细，从中称取约0.25 g，精密称定后，置25 mL锥形瓶中，精密称定，加甲醇25 mL超声处理（功率250 W，频率20 kHz）30 min，放冷，精密称定，补足重量，摇匀。精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6 mL”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度（μg/mL），计算，即得。

本品每粒含总黄酮以芦丁（C27H30O16）计，不得少于45.0 mg。

表4 加样回收率试验结果（n=6）

2.2 吸收光谱的测定、光谱一致性检测

精密吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液各3 mL，分别置于25 mL量瓶中，照分光光度法，在200～750 nm波长范围内测定吸收光谱。结果芦丁对照品与供试品光谱可见光区吸收图谱基本一致，并且在500 nm波长处有最大吸收。

2.3 线性关系的考察

精密吸取芦丁对照品溶液 1、2、3、4、5、6 mL（相当于芦丁 8.03、16.06、24.09、32.12、40.15、48.18 μg/mL），按 上 述 测定法测定吸收度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程。回归方程为：y=0.0111x+0.0181，r2=0.9995。表明芦丁在8.03～48.18 μg/mL范围内具有良好的线性关系。见表1、图1。

图1 芦丁不同浓度吸收度

图1 芦丁线性回归方程坐标图

2.4 精密度试验

按2.3项下测定法对对照品溶液重复测定6次，计算RSD，结果见表2。试验结果表明，RSD＜2%，方法精密度良好，符合测定要求。

表2 精密度试验结果（n=6）

2.5 重复性试验

按供试品测定方法测定，对同一批样品（090816）重复测定5次，结果见表3。

表3 重复性试验结果（n=5）

2.6 加样回收率试验

精密称取已知含量的同一批号（批号为090816），含量250.51 mg/g）的样品125 mg，分别精密加入芦丁对照品各27.5 mg，按正文供试品溶液的制备方法制备及上述光谱条件测定，测定并计算回收率，平均回收率在97.0%～103.0%之间，RSD＜2%（n=6），方法准确性良好。见表4。

2.7 含量测定

按上述方法测定各批样品的含量，结果见表5。

表5 含量测定结果（n=6）

根据3样品测定结果，暂定本品含总黄酮不得少于45.0 mg/粒。

3 结论

通过针对肾茶胶囊中总黄酮的系统研究，包括线性关系考察、精密度考察、回收率考察、重复性考察等，证实本测定方法科学可行，完全能控制和检测肾茶胶囊中总黄酮的质量。

[1]Hsu CL，Hong BH，Yu YS. Antioxidant and anti-inflammatory effects of orthosiphon aristatus and its bioactive compounds[J].J Agric Food Chem，2010，58（4）：2150-2156.

[2]喻陆，吴凡.欣肾胶囊延缓大鼠慢性肾功能衰竭实验研究[J].中国中药杂志，2006，31（24）：2058-2060.

[3]潘晓勤，王晓燕，姜新猷.肾小球系膜细胞培养及鉴定[J].南京医科大学学报，1995，15（1）：222-223.

[4]李晓玫，戴振华，王海燕.肾小球系膜细胞增殖抑制因子[J].国外医学（泌尿系统分册），1997，17（1）：31-34.