封闭抗体与早期反复流产的关系及淋巴细胞主动免疫治疗的疗效观察

刘晓芹，田连霞

(山东省桓台县妇幼保健院，桓台 256400)

反复流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是妇女妊娠期常见的一种并发症。约占已婚育龄妇女的10%［1］。其病因有遗传、内分泌紊乱、生殖道畸形或感染、自身免疫和环境因素等，还有40% ～80%［2］的原因不明。近年来，随着生殖免疫学的研究深入，认为多数原因不明的反复自然流产与免疫因素有关［3］。本文通过观察封闭抗体与早期反复自然流产的关系，探讨淋巴细胞主动免疫治疗BA缺乏对妊娠结局的意义，以达到减少流产率的目的。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2007年1月至2011年12月来我院生殖中心就诊的126例反复自然流产患者作为研究组，年龄24～40岁。其选择标准为:①连续2次及以上孕3个月内自然流产史;②经妇科检查排除生殖器畸形及其他病变;③双方染色体核型分析正常;④月经第2～4天空腹测内分泌正常;⑤TORCH感染(包括风疹病毒、巨细胞病毒、弓形体和单纯疱疹病毒)阴性;⑥自身免疫方面的检查:不孕抗体七项(抗精子抗体、抗子宫内膜抗体、抗心磷脂抗体、抗卵巢抗体、抗透明带抗体、抗绒毛膜促性腺激素抗体、抗滋养细胞层抗体)、抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体均阴性;⑦无吸烟、酗酒不良习惯，非近亲婚配;⑧男方精液常规分析正常。对照组，选择与研究组同期诊断为早孕要求行人工流产者或药物流产者126例，本次妊娠前均有正常妊娠或分娩史;而无自然流产、死胎、死产史;本次妊娠期间无先兆流产的症状和体征;B型超声提示宫内胚胎发育正常，且已见胎心搏动。

1.2 研究方法 两组患者均随机抽取空腹静脉血检测体内封闭抗体，比较两组患者体内封闭抗体阳性率。研究组封闭抗体阳性者13例，阴性者113例，将研究组封闭抗体阴性者113例随机分为两组，治疗组61例，孕前行淋巴细胞主动免疫治疗，4次后复查封闭抗体，观察其阳性率，转为阳性者，指导试孕，仍为阴性则加强2次后复查BA，阴性者也不再做免疫治疗，均指导受孕，免疫治疗后3个月不怀孕则加强1次，直至受孕为止。在孕40余天排除宫外孕后、孕2个月确定见胎心搏动后、孕2.5～3个月时再各做1次免疫治疗，并常规黄体支持，保胎治疗。对照组52例，不行免疫治疗，直接指导受孕，孕后常规黄体支持，保胎治疗。观察两组患者妊娠情况及自然流产情况。治疗组年龄25～40岁，平均(30.4±6.7)岁，流产次数:2次流产31例，3次流产25例，4次流产5例。对照组年龄24～38岁，平均(29.8±6.1)岁，流产次数:2次流产 18例，3次流产11例，4次流产2例。两组在患者的年龄、流产的次数上无显著性差异，具有可比性。

1.3 淋巴细胞主动免疫治疗方法 抽取配偶或其他健康男性第三者外周全血20 ml，加肝素抗凝，在百级超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司生产，型号:SW-CJ-1FD)下经淋巴细胞分离液(天津市灏洋生物制品科技有限责任有限公司生产)分离出淋巴细胞，生理盐水洗涤，并调整至细胞数为20×106～40 ×106/ml，共约 0.6 ～0.8 ml。于患者一侧前臂近腋窝处内侧分6～8点行皮内注射，皮丘直径在0.5 cm左右，左右臂交替。孕前2～3周一次，其余治疗时间如上所述。治疗前夫妇双方查乙肝五项、丙肝抗体、梅毒、艾滋病，若丈夫有一项为阳性，可采用其他健康男性的血或健康孕妇的血，避开月经期或感冒。

1.4 护理干预局部护理 告知患者注射部位24 h不能遇水，若出现局部红、肿、热、痛、痒等反应均属正常免疫反应，无需特殊处理，4～7 d后会逐渐减轻或消失，若发生体温升高达38℃以上等全身性反应时要及时就诊，切记不要抓挠，防止皮肤破损后出现感染。本文所有患者治疗后仅部分患者出现注射部位轻度瘙痒，1例出现皮肤发红，3 d后逐渐缓解，无肿、热、痛症状。

1.5 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理，计量资料以均数±标准差()表示，两样本均数比较采用t检验，计数资料率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究组与对照组患者封闭抗体检测比较 经检测，研究组患者静脉血封闭抗体阳性者13例，阴性者113例。对照组阳性107例，阴性者19例。两组比较研究组患者封闭抗体阳性率明显低于对照组，其差异有统计学意义，P＜0.005。详见表1。

表1 研究组与对照组患者封闭抗体检测比较

2.2 治疗组经淋巴细胞主动免疫治疗后转阳率治疗组61例，接受4次治疗转阳45例，6次治疗转阳8例，总转阳率86.89%，效果显著，具有明显的临床意义。

2.3 两组患者妊娠率及自然流产率比较 定期随访治疗组61例，妊娠51例，妊娠率83.61%，其中封闭抗体阳性者45例，随访至孕4个月以上，其中36例已足月分娩，4例已孕4个月以上，自然流产5例，自然流产率11.11%，封闭抗体阴性者6例，已足月分娩3例，已孕4个月以上2例，自然流产1例，封闭抗体阴性者自然流产率16.67%，治疗组总自然流产率11.76%;对照组52例，妊娠42例，足月分娩孕7例，孕4个月以上3例，自然流产32例，妊娠率80.76%，自然流产率76.19%。两组患者妊娠率无明显差异，自然流产率治疗组明显低于对照组，其差异有统计学意义(P＜0.005)，经免疫治疗后封闭抗体仍为阴性者其自然流产率与对照组比较也明显降低，其差异有统计学意义(P＜0.05)，详见表2。

表2 两组患者妊娠率及自然流产率比较

3 讨论

随着生殖免疫学研究的发展，人们对妊娠早期复发性流产越来越关注。其中，复发性流产的发病率约3%，其中50% ～60%［4］与免疫因素有关。现代生殖免疫学研究证明:妊娠是成功的半同种移植过程，在母体免疫功能正常时，既保护母体不受外来微生物的侵犯，又对宫内胚胎移植物不发生免疫排斥反应，使妊娠得以继续。免疫因素引起的RSA大体可分为自身免疫型和同种免疫型两种。自身免疫型RSA可在患者体内检测出自身抗体，如抗磷脂抗体、抗核抗体、抗甲状腺抗体等。同种免疫型则主要与HIA(人类白细胞抗原)相容性等有关，患者与正常生育妇女的免疫状态不同，表现在体液免疫的异常及血清中缺乏封闭抗体等方面［5］。本文主要研究封闭抗体对反复自然流产的影响。在妊娠早期即可检出封闭抗体，孕中期达高峰。封闭抗体具有以下特征［6］:①在妊娠初期的血清中检出，并随妊娠时间的增加而增强，分娩数周后消失;②在血清中的IgG体现它的活性;③在胎盘组织中的IgG活性与血清IgG封闭抗体是相同的;④丈夫的B淋巴细胞可灭活封闭抗体的活性。反复自然流产者由于缺乏封闭抗体，致使母体对胚胎保护作用低于对胚胎的免疫损伤作用，使得胚胎受到免疫攻击，最终导致流产。

应用配偶淋巴细胞对封闭抗体缺乏的RSA患者进行免疫治疗，目的是淋巴细胞免疫诱导刺激母体产生同种免疫反应，产生具有免疫保护作用的封闭抗体，从而增加患者体内封闭抗体水平，而防止胚胎或胎儿父系抗原被母系免疫系统识别和杀伤，产生免疫保护［7］，使再次妊娠得以成功。本文对61例RSA患者应用配偶或其他健康男性淋巴细胞进行免疫治疗后，显著提高了其封闭抗体水平，妊娠51例，获得妊娠成功的患者45例，自然流产6例，妊娠率83.61%，自然流产率11.76%，且其中6例经免疫治疗后封闭抗体仍阴性者，仅1例再次自然流产，其自然流产率为16.67%，采用保守治疗的对照组其妊娠率为80.76%，自然流产率为76.19%，两组比较，虽然妊娠率无明显差异，但其治疗组自然流产率明显降低，且经免疫治疗后，虽然封闭抗体仍为阴性，但其自然流产率也明显降低。本研究显示，淋巴细胞主动免疫治疗对治疗封闭抗体缺乏效果显著，封闭抗体转阳率较高，且治疗后无论封闭抗体有无转为阳性，均可明显降低自然流产率。

正常生育妇女体内存在一定水平的封闭抗体。在正常妊娠中，人类白细胞抗原(HLA)相互排斥，这样胚胎所带的父源性HLA抗原(在于滋养细胞表面)能刺激母体免疫系统，并产生一类称为封闭因子或封闭抗体的IgG型抗体;此因子既可与母体淋巴细胞表面抗原结合，又可与滋养细胞本身结合，从而阻断母儿之间的免疫识别和免疫反应［2］。应用配偶淋巴细胞免疫治疗，可以改善患者的体液免疫功能，增加封闭抗体，而且方法技术简单易行，交叉感染的危险性较低，费用低廉，成功率比较高。应用淋巴细胞免疫治疗反复自然流产不失为一种安全有效的治疗方法。

［1］肖芬球，朱丽华，王安妮.主动免疫联合传统安胎治疗复发性流产的疗效观察［J］.中国医药导报，2010，7(25):3l-32.

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［3］金 燕，刘小兰.复发性流产患者血清三种抗体检测及应用分析［J］.实用预防医学，2010，17(2):355-357.

［4］曹文丽，叶玲玲，姜 雯，等.复发性流产的免疫因素及抗免疫治疗效果的评价Ⅲ.中国妇幼保健，2010，25(8):lll8-1119.

［5］周 毅，周 敏.反复性自发流产与淋巴细胞主动免疫治疗进展［J］.实用妇产科杂志，2003，19(2):84-85.

［6］刘继龙.淋巴细胞免疫治疗反复流产的疗效分析［J］.当代医学，2011，17(11):104-105.

［7］植自勤，黄惠萍，黄小静.大剂量免疫球蛋白在封闭抗体阴性反复自然流产孕妇中的应用［J］.广州医药，2010，41(3):33-34.