兔爱美耳球虫病的快速病理诊断

何书海 （信阳农业高等专科学校动物科学系 河南 信阳 464000）



兔爱美耳球虫病的快速病理诊断

何书海 （信阳农业高等专科学校动物科学系 河南 信阳 464000）

爱美耳球虫在临床上常常引起鸡球虫病和兔球虫病，检查该病时常产采用病理剖检和实验室检查来确诊。爱美耳球虫感染鸡时，球虫常常寄生在肠黏膜上，出现以球虫肠炎为主的病变特征，其球虫合子可以随粪便排出体外，所以通过检查粪便就可以比较容易的确诊该病。而当发生兔球虫病特别是肝型球虫时，球虫主要寄生在肝胆管上，发生以球虫肝炎为主要特征的病变，此时就不能单纯根据粪检发现卵囊就确诊为球虫病。一方面是因为在急性球虫病时，如处于裂体增殖期时尚未形成卵囊，有时粪检不一定发现卵囊。另一方面是兔的带虫现象极为普遍。实践证明，粪便中的卵囊检查要和尸检同时进行，特别是病变部制作切片镜检是诊断球虫病的重要手段。由于传统石蜡切片检查相对粪检来说较费时费力，所以在临床检查时很少被运用。本试验结合病理剖检技术，通过对传统石蜡切片技术进行改良和创新，探索出了一种便捷的病理检查方法，以期为临床快速确诊兔爱美耳球虫病提供实践经验。

1 临床诊断材料与设备

患病家兔及其肝、肠病变组织。54~58℃石蜡、硬脂酸、无水乙醇、二甲苯、苏木素染色液、伊红染色液等，以上所涉及化学药品均为分析纯。

SK生物组织快速处理仪(上海隆拓仪器设备有限公司)，KD-3368-VI电脑冷冻石蜡两用切片机(浙江省金华市科迪仪器设备有限公司)，OLYMPUS CHC型光学显微镜(日本OLYMPUS光学工业株式会社)，MD90 数码成像装置(广州明美科技有限公司)。

2 临床诊断方法

2.1 病理剖检 对病死家兔进行尸体解剖，检查内脏器官，采取病变器官进行保存备检。

2.2 快速切片检查 取肝脏以及小肠组织快速制作石蜡切片，并染色镜检。具体方法如下：（1）准备100ml具塞广口瓶6个，分别盛入AF固定液、85%酒精、95%酒精、100%酒精、混合石蜡(硬脂酸与54℃石蜡按1:3混合)。（2）取肝脏、小肠病理组织切成1.0cm×1.0cm×0.3cm大小，放入100ml具塞广口瓶，置于SK生物组织快速处理仪中超声处理(水温75℃，超声频率1MHz，超声时间根据组织大小选择3~5min)，依次完成固定、脱水、透明、浸蜡。（3）取事先预制蜡块(熔点56~58℃)，用弯头镊子在中央融化与组织大小相同的坑，放入组织块，热蜡固封，冰箱4℃迅速冷却1min。（4）迅速切片，捞片后，将载玻片反面放在酒精灯上加热至70℃左右融蜡，滤纸吸蜡后再次加热入二甲苯1min脱蜡。（5）无水酒精浸洗15s，95%酒精浸洗15s，滴加苏木素染色液于玻片组织上，并酒精灯加热至表面有热气散发。(6）水洗2次后75%盐酸反蓝，水洗后入95%乙醇，再进行伊红染色，水洗后进入80%、95%、100%浓度酒精梯度脱水各1min。（6）二甲苯透明2次，中性树胶封片、镜检。

3 结果

剖检可见部分病死兔肝脏明显肿大，沿小胆管分布上有黄白色小结节，有的病灶中的内容物变稠，形成粉粒样的钙化物，胆囊胀大，胆汁浓稠；肠壁血管充血，肠腔臌气，十二指肠扩张、肥厚，黏膜有出血性炎症；部分表现为肠壁有栗粒大小的黄白色结节以及小的化脓性、坏死性病灶。

显微镜下观察肝小叶间结缔组织增生，并形成包囊，内含大量球虫虫卵；肝细胞脂肪变性、萎缩，肝索明显变细，肝血窦显著变大，肝胆管扩张，胆管上皮细胞内和管腔内有许多裂殖体、裂殖子、配子体、孢子囊等不同发育期的虫体(图1)。镜检小肠可见肠黏膜上皮细胞变性、坏死和脱落，黏膜上皮内见有裂殖体，肠腔部位可见球虫卵囊(图2)。该方法制作的切片HE染色着色好，细胞质与细胞核红蓝对比鲜明，细胞无变形、空泡化等异常现象。

图1 肝球虫H.E400´

图2 肠球虫H.E400´

3 讨论

兔球虫病是兔业养殖中一种常见且危害严重的寄生虫病，该病是由艾美耳属的多种球虫寄生于兔的小肠或胆管上皮细胞内引起的，病兔死亡率很高，该病常造成兔业养殖的巨大损失。发生该病时，特别是肝型兔球虫病时，诊断该病仅靠粪便检查发现卵囊来确诊是不够的，所以需要采取病理剖检并结合实验室病理组织切片检查来确诊本病。本试验通过对传统石蜡切片技术进行改良和创新，探索了一种快捷的兔球虫病的快速病理诊断技术，并取得了良好的试验结果，值得推广。

本试验根据超声波可以使分子高速振动、运动加快的原理，运用SK生物组织快速处理仪发射的超声波对病理组织进行脱水、透明、浸蜡处理，缩短病理组织的处理时间，使整个制作过程简便而快捷。在一定温度下，超声波强大的穿透力作用使病理组织中的液体分子与试剂溶液交换加速，从而加快了固定、脱水、透明和浸蜡的速度。本方法成功实现了病理切片检查时间的缩短并获得高质量的检查效果，将传统石蜡切片制作时间从30h缩短为20~30min，为实现该方法在实验室检查中的广泛推广奠定了良好的技术基础。同时，在实践该病理切片检查方法时，体会出了一些关键注意事项，以保证切片效果，现总结如下：（1）取材时应尽量取的薄，便于组织脱水；（2）处理过程中应根据不同组织来选择时间，注意观察处理后的组织变化；（3）包埋时，蜡块中的坑不可事先做好，这样组织在切片时会出现脱落的现象，同时还要注意将组织包埋得平整；（4）用滤纸吸蜡时，不应太用力，已用过的地方，切不可反复使用，否则很容易脱片；（5）在载玻片反面加热融蜡和染色时，也可以选用电吹风，但都要注意温度的控制，不宜过高，以免在染色时出现脱片和细胞过度收缩；（6）操作时，操作人员的熟练程度会直接影响到全程的时间长短。

（2011–10–27）

S858.291

B

1007-1733(2012)01-0038-02